阿魏酸鈉膠囊與片劑在健康人體的生物等效性研究

楊婷 余斌 宋欣 劉麗萍

[摘要] 目的：研究阿魏酸鈉膠囊和阿魏酸鈉片在健康志愿受試者中的藥動學和人體生物等效性。方法：20名健康志愿者隨機交叉單次口服受試制劑阿魏酸鈉膠囊和參比制劑阿魏酸鈉片，均100 mg，采用HPLC-UV檢測方法，測定血漿中阿魏酸鈉濃度，采用Das2.1程序計算其藥動學參數(shù)，評價兩種制劑的人體生物等效性。結(jié)果：受試制劑及參比制劑主要藥動學參數(shù)分別為：Cmax（1.021±0.286） μg/ml和（1.066±0.397） μg/ml，tmax（0.388±0.078） h和（0.371±0.083） h，t1/2（0.887±0.431） h和（0.824±0.404） h，AUC（0~t）（0.613±0.172） μg·h/ml和（0.614±0.235） μg·h/ml。結(jié)論：受試制劑阿魏酸鈉膠囊和參比制劑阿魏酸鈉片具有生物等效性。

[關鍵詞] 阿魏酸鈉；生物等效性；高效液相-紫外檢測法

[中圖分類號] R969.1[文獻標識碼]A [文章編號]1673-7210（2011）11（c）-037-03

Bioequivalence of Sodium Ferulate Capsules and Tablets in healthy volunteers

YANG Ting1, YU Bin1, SONG Xin2, LIU Liping1

1.Department of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Anhui Province, Hefei 230601, China; 2.College of Pharmacy, Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Anhui Province, Hefei 230038, China

[Abstract] Objective: To study the pharmacokinetic characteristics of Sodium Ferulate Capsules and Tablets in healthy volunteers and to evaluate the bioequivalence of them. Methods: In a randomized, crossover and self-control study, 20 healthy volunteers were orally administrated Sodium Ferulate Capsules and Tablets (100 mg respectively). The plasma concentrations were determined by the HPLC-UV. Pharmacokinetic parmeters were calculated and the bioequivalences were evaluated by DAS2.1 software. Results: The main pharmacokinetic parameters of Sodium Ferulate were as follows: Cmax (1.021±0.286) μg/ml and (1.066±0.397) μg/ml, tmax (0.388±0.078) h and (0.371±0.083) h, t1/2 (0.887±0.431) h and (0.824±0.404) h, AUC(0-t) (0.613±0.172) μg·h/ml and (0.614±0.235) μg·h/ml. Conclusion: The test and reference sodium ferulate are bioequivalent.

[Key words] Sodium Ferulate; Bioequivalence; HPLC-UV

阿魏酸（Ferulic Acid）的化學名稱為4-羥基-3-甲氧基-肉桂酸，是桂皮酸的衍生物之一，最初在植物的種子和葉子中發(fā)現(xiàn)，是一種廣泛存在于植物中的酚酸，在細胞壁中與多糖和蛋白質(zhì)結(jié)合成為細胞壁的骨架。它在阿魏、當歸、川芎仁等中藥材中的含量較高，是這些中藥的有效成分之一。阿魏酸鈉（Sodium Ferulate）是阿魏酸的鈉鹽，具有抑制血小板聚集、松弛血管平滑肌、清除氧自由基、提高膜穩(wěn)定性、保護血管內(nèi)皮[1]、增強免疫功能等功效，并具有一定的鎮(zhèn)痛、解痙作用[2]。臨床上主要用于冠心病[3]、腦血管病[4]、腎小球疾病[5]、肺動脈高壓、糖尿病性血管病變[6]、脈管炎等血管性病癥的輔助治療，亦可用于偏頭痛、血管性頭痛的治療[7]。本實驗目的是研究不同廠家的阿魏酸鈉膠囊和阿魏酸鈉片的相對生物利用度，評價兩者的生物等效性，為臨床安全合理用藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津高效液相系統(tǒng)：LC－10ATvp 型溶劑輸送泵，SPD－10Avp 紫外-可見檢測器，LC-Solution Light色譜中文數(shù)據(jù)系統(tǒng)；Welchorm-C18，4.6 mm×150 mm，5 μm色譜柱（上海月旭）及配套保護柱；TDL80-2B型離心機（上海安亭）；快速混勻器；AL104/01型梅特勒電子分析天平。

1.2 藥物與試劑

受試制劑：阿魏酸鈉膠囊（開封制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20100302，規(guī)格：50 mg/粒）；參比制劑：阿魏酸鈉片（成都亨達藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：091201，規(guī)格：50 mg/片）、阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110773-200611）、內(nèi)標替硝唑?qū)φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所，批號：100336-200703，含量：99.8%）。

試劑：乙腈（美國TEDIA試劑有限公司，色譜純）、冰醋酸（國藥集團化學試劑有限公司，分析純）、鹽酸（宿州化學試劑廠，分析純）、乙酸乙酯（汕頭市西隴化工廠有限公司，分析純）、純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

2 方法與結(jié)果

采用兩周期雙交叉的實驗設計方法。將20名健康志愿者隨機分為2組，每組10名，服藥前1天晚餐后禁食不禁水，分別于次日早晨空腹服用阿魏酸鈉膠囊和阿魏酸鈉片（均100 mg），用200 ml溫開水送服。服藥后2 h可飲水，4 h統(tǒng)一進餐。每例受試者均于服藥前、服藥后5、10、15、20、25、30、40、50、60、90、120、180、240 min各采血4 ml，共計14針。血標本以肝素抗凝，室溫靜置2 h，4 000 r/min離心10 min，取上清血漿置-20℃冰箱保存?zhèn)錅y。1周后進行交叉服藥，再次按照上述方法留取標本。

2.1 色譜條件

色譜柱為Welchorm-C18 4.6 mm×150 mm，5 μm，配套保護柱，流動相為乙腈∶水∶冰醋酸=22∶78∶1，流速為1.0 ml/min，檢測波長為320 nm，靈敏度為0.005AUFS，進樣量為20 μl，柱溫為30℃。

2.2 血漿樣品處理方法

精密量取血漿200 μl加入內(nèi)標替硝唑（15.57 μg/ml）20 μl，加入50 μl（0.6 mol/L）HCl溶液，混勻，加入萃取劑乙酸乙酯1 600 μl渦旋震蕩2 min，4 000 r/min離心10 min后取上清液，40℃氮氣吹干。100 μl流動相復溶，震蕩1 min后取20 μl進樣分析，以內(nèi)標法峰面積比定量。

2.3 方法專屬性考察

精密量取空白血漿200 μl，按“2.2”項下自“加入50 μl（0.6 mol/L）HCl溶液”依法操作得空白樣品色譜圖1（A）；將一定濃度的阿魏酸對照溶液（1.0 μg/ml）加入空白血漿，按“2.2”項下自“加入50 μl（0.6 mol/L）HCl溶液”依法操作得含阿魏酸血漿樣本色譜圖1（B）；將一定濃度的阿魏酸對照溶液（1.0 μg/ml）加入空白血漿，按“2.2”項下依法操作得含阿魏酸及內(nèi)標的血漿樣本色譜圖1（C）；取受試者給藥后采集的血漿樣品200 μl，按“2.2”項下依法操作，得色譜圖1（D）。檢測器波長均為320 nm。見圖1。

2.4 標準曲線和定量下限

在空白血漿中加入不同濃度阿魏酸標準溶液20 μl，配制成相當于阿魏酸血漿濃度為0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、1.20、1.80 μg/ml的樣品，按“2.2”項下依法操作，以待測物與內(nèi)標物的峰面積比值為縱坐標，待測物濃度為橫坐標，并用加權（1/χ2）最小二乘法進行線性回歸運算，求得的直線方程即為標準曲線。結(jié)果得線性方程為Y=1.139X-0.001，表明阿魏酸在0.05～1.80 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好，最低可定量為0.05 μg/ml（S/N>10）。

2.5 提取回收率試驗

將不同濃度的阿魏酸的對照溶液20 μl加入180 μl空白血漿中，配制成高、中、低三個濃度（1.60、1.00、0.06 μg/ml）血漿樣品各3份，按“2.2”項下操作，得到阿魏酸峰面積值A1；另取空白管，配置相應濃度的阿魏酸對照溶液，不做萃取直接檢測，得到阿魏酸峰面積值A2。按公式提取回收率（%）=A1/A2×100%來計算阿魏酸的提取回收率。結(jié)果阿魏酸在上述3個濃度水平的提取回收率分別為91.33%、85.74%、85.97%。

2.6 精密度試驗

取空白血漿加入不同濃度阿魏酸對照溶液，配制阿魏酸高、中、低3個不同血漿濃度（1.60、1.00和0.06 μg/ml）的質(zhì)量控制（QC）樣品，連續(xù)測定3 d，結(jié)果表明日內(nèi)、日間相對標準差（RSD）<15%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取空白血漿加入不同濃度阿魏酸對照溶液，配制阿魏酸高、中、低3個不同血漿濃度（1.60、1.00、0.06 μg/ml）的樣品，分別考察血漿樣品在室溫放置0 h和8 h、在-20℃冰箱中反復凍融3次、冷凍條件下放置10 d和15 d的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示，按“3.2”項下操作室溫放置0、8 h，-20℃冰箱中反復凍融3次和長期冷凍RSD<15%，穩(wěn)定性較好。

2.8 血藥濃度-時間數(shù)據(jù)和藥代動力學參數(shù)

20名受試者口服阿魏酸鈉膠囊和片劑后的平均血藥濃度-時間曲線見圖2。主要藥動學參數(shù)見表1。

2.9 生物等效性評價

將ln（AUC（0~4））、ln（AUC（0~∞））、ln（Cmax）經(jīng)方差分析和雙單側(cè)t檢驗，結(jié)果顯示兩種制劑在吸收程度和達峰濃度上等效。tmax經(jīng)非參數(shù)檢驗（配對Wilcoxon法），差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），表明兩制劑在達峰時間上等效。單次口服受試制劑的相對生物利用度為（104.4±19.7）％。見表2。

3 討論

本實驗建立了HPLC-UV測定人血漿中阿魏酸鈉含量的方法。筆者參考有關文獻[8-11]對血漿樣品處理方法進行篩選，選用0.6 mol/L HCl酸化血漿樣品，使其易與蛋白分離。為了提高檢測靈敏度，筆者先后考察了采用乙醚和乙酸乙酯兩種有機溶劑進行提取，發(fā)現(xiàn)酸化后的樣品經(jīng)乙酸乙酯提取，提取回收率不僅高而且內(nèi)源性物質(zhì)干擾少，為阿魏酸鈉體內(nèi)藥物濃度分析和藥物動力學研究提供了依據(jù)。

20名健康志愿受試者分別口服100 mg阿魏酸鈉受試制劑與參比制劑后，經(jīng)檢測得到血漿中阿魏酸鈉主要藥動學參數(shù)并進行方差分析，進一步采用雙向單側(cè)t檢驗和[1-2α]置信區(qū)間法進行生物等效性評價，結(jié)果均在等效范圍內(nèi)，證明兩種制劑為生物等效制劑。

[參考文獻]

[1]王勇,邢寶恒,史丹丹.阿魏酸鈉對重度子癇前期患者蛋白尿的療效觀察[J].中國醫(yī)藥導刊,2011,13(3):457-458.

[2]劉力群,周丹丹,韓鳳文.阿魏酸鈉臨床療效研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2010,23(1):96-97.

[3]鄒連琦,李玉華,鄒峰.阿魏酸鈉治療冠心病療效觀察[J].中國醫(yī)藥,2010,5(5):393-394.

[4]谷艷,劉爽,楊青蘭,等.探討缺血性腦血管病的臨床診治體會[J].中國現(xiàn)代藥物應用,2010,4(9):108-109.

[5]肖迎春,錢曉惠.阿托伐他汀聯(lián)合阿魏酸鈉治療慢性腎小球腎炎[J].西部醫(yī)學,2011,23(2):250-252.

[6]周玲,喻?；I.阿魏酸鈉聯(lián)合胰激肽酶原酶治療糖尿病腎病[J].中國醫(yī)藥指南,2010,8(13):241-242.

[7]劉會榮.阿魏酸鈉的藥理作用與臨床應用[J].中國藥業(yè),2005,14(3):78-79.

[8]鄭專杰,郝光濤,高洪志,等.阿魏酸鈉顆粒人體生物利用度和生物等效性研究[J].解放軍藥學學報,2008,24(3):210-212.

[9]閆冬,趙娜,張希玉,等.阿魏酸鈉在健康人體中的生物等效性研究[J].中國新藥雜志,2008,17(3):247-250.

[10]徐術,胡晉紅,李鳳前.HPLC測定Beagle犬血漿中阿魏酸鈉的濃度及其藥代動力學研究[J].中成藥,2005,27(9):1062-1065.

[11]李再新,吳小紅,賀福元,等.大鼠血漿中補陽還五湯及總苷元的阿魏酸藥物動力學研究[J].中國藥師,2007,10(10):943-945.

（收稿日期：2011-08-08）

[作者簡介] 楊婷，女，碩士研究生，安徽合肥人，藥師，主要從事醫(yī)院藥學工作。