CBX7蛋白在卵巢癌組織中的表達及意義

廖艷丹，韓 慶

(湖北省宜昌市第二人民醫(yī)院腫瘤醫(yī)院婦產科 443000)

卵巢癌是女性最常見的三大惡性腫瘤之一，由于缺乏有效的早期診斷方法，多年來卵巢癌的5年生存率始終徘徊在30%左右[1]，因此，針對卵巢腫瘤發(fā)生、發(fā)展的研究有著重要意義。研究證實，表觀遺傳改變在惡性腫瘤中已是普遍現(xiàn)象，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關系密切[2]。CBX7(chromobox homolog 7)可以引起組蛋白H3K9三甲基轉移酶Suv39h2的表達升高，從而引起組蛋白H3表觀遺傳的改變[3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CBX7在甲狀腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多種腫瘤組織和細胞中低表達，被認為是一種新的抑癌基因[4-6]。目前，CBX7基因在卵巢腫瘤中的研究較少。本研究通過免疫組織化學法檢測CBX7蛋白在正常卵巢組織及卵巢腫瘤組織中的表達，并分析CBX7蛋白與卵巢癌組織臨床病理分期的關系，為卵巢癌分子水平的診斷和治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院婦產科2006～2010年手術切除的正常卵巢及卵巢腫瘤組織共90例。正常卵巢組織取材于子宮肌瘤或子宮腺肌癥等手術同時行附件切除術的卵巢。所有標本一部分經10%甲醛固定后，石蠟包埋。其中，正常卵巢組織12例，良性卵巢腫瘤25例，惡性腫瘤53例?；颊吣挲g最小16歲，最大78歲，平均年齡45歲。免疫組化標本經2名有經驗的病理醫(yī)生檢查確診并有完整臨床病理資料。卵巢癌患者臨床分期和組織學分級參照FIGO(國際婦產科聯(lián)盟)卵巢癌分期和組織學分級標準:Ⅰ期20例，Ⅱ期6例，Ⅲ期22例，Ⅳ期5例;高分化19例，中分化16例，低分化18例。

1.2主要試劑 兔抗人CBX7多克隆抗體(invirtogen公司),免疫組化SABC試劑盒(武漢博士德生物有限公司)。

1.3方法

1.3.1免疫組織化學 將甲醛固定石蠟包埋的組織制備成4 μm厚連續(xù)切片并用多聚賴氨酸包被切片。脫蠟的切片在枸櫞酸鹽緩沖液中以高溫行抗原修復并與相應的抗體4 ℃孵育過夜，免疫組化染色按照SABC試劑盒說明書進行操作。

1.3.2判定標準 以細胞核或細胞質中有棕黃色顆粒且染色強度高于背景非特異性著色為陽性細胞，在高倍鏡下隨機選取5個視野，計數(shù)細胞，陽性細胞數(shù)大于30%為陽性。

2 結 果

如封2圖1所示，CBX7蛋白染色陽性細胞為胞漿深棕色顆粒，部分胞核內有深棕色顆粒(箭頭所指為CBX7蛋白染色陽性細胞)。在總例數(shù)90例中，陽性率正常組織11/12(91.7%)，良性卵巢腫瘤組織20/25(80.0%)，卵巢癌組織18/53(34.0%)，正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織與卵巢癌組織中CBX7蛋白的表達逐漸降低，CBX7蛋白在卵巢腫瘤組織中低表達(P<0.01)。在53例卵巢癌中，F(xiàn)IGO手術-病理分期中CBX7陽性表達率如下：Ⅰ期55%(11/20)，Ⅱ期33.3%(2/6)，Ⅲ期18.18%(4/22)。Ⅳ期20%(1/5)。CBX7蛋白在不同F(xiàn)IGO手術-病理分期中表達不同，Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期比較表達差異有統(tǒng)計學意義(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期比較χ2= 4.465，P=0.033,表1)。結合病理診斷，CBX7蛋白在不同分化程度組織中的陽性表達如下：高分化卵巢癌52.6%(10/19)，中分化卵巢癌37.5%(6/16)，低分化卵巢癌11.1%(2/18)。高、中分化的卵巢癌與低分化卵巢癌比較，CBX7的表達有顯著性差異(高、中分化與低分化相比χ2=4.901，P=0.027，表1)。

表1 CBX7蛋白的表達與卵巢癌臨床病理特征之間的關系

續(xù)表1 CBX7蛋白的表達與卵巢癌臨床病理特征之間的關系

3 討 論

表觀遺傳學(epigenetic)是目前腫瘤研究領域的新熱點[7]，主要包括DNA甲基化和組蛋白甲基化、乙?；土姿峄?。研究證實，表觀遺傳改變在惡性腫瘤中已是普遍現(xiàn)象，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關系密切[2]。

CBX7可以引起組蛋白H3K9三甲基轉移酶Suv39h2的表達升高，從而引起組蛋白H3第9位賴氨酸三甲基化[3]。組蛋白H3第9位賴氨酸三甲基化(H3K9me3)是一種穩(wěn)定的細胞異染色質和表觀遺傳失活基因核小體組蛋白特征性標志物，為DNA甲基化的關鍵性啟動環(huán)節(jié)之一，該環(huán)節(jié)的啟動可沉默相關癌基因轉錄，抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡，進而抑制腫瘤的發(fā)生[8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CBX7在甲狀腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多種腫瘤組織和細胞中低表達，CBX7的缺失與腫瘤形成、生長、轉移及預后密切相關，被認為是一種新的抑癌基因[4-6]。但CBX7在卵巢癌中的表達及作用并無報道。

本研究采用免疫組織化學方法檢測CBX7蛋白在卵巢組織中的表達。結果表明在卵巢良性、惡性腫瘤中CBX7的表達與正常卵巢組織相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義。且卵巢惡性組織中，不同臨床分期、不同分化程度的組織中CBX7的表達亦存在差異，據(jù)本研究分析Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌中CBX7蛋白表達低于Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌組織。低分化組腫瘤的CBX7蛋白表達低于高、中分化組。

卵巢腫瘤是女性生殖器官常見腫瘤，也是病死率最高的婦科惡性腫瘤，由于卵巢位置較深，發(fā)病早期癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時多已是晚期。因此，卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的研究具有重要意義。CBX7基因是表觀遺傳學中的重要調控因子，是一種新的腫瘤候選基因，其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療中的作用正在被不斷地發(fā)現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn)CBX7蛋白在正常卵巢組織及卵巢癌組織中存在著差異，且與臨床分期、組織分化相關，提示CBX7基因可能對卵巢腫瘤的診斷和治療提供輔助參考價值，但其作用機制尚不清楚，仍有待進一步的研究。

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