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    核糖開關(guān)調(diào)控基因表達(dá)的熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)機(jī)制

    2012-01-06 07:40:58楊會(huì)勇林俊生
    中國生化藥物雜志 2012年4期
    關(guān)鍵詞:核糖熱力學(xué)配體

    施 磊,楊會(huì)勇,林俊生,刁 勇

    (華僑大學(xué) 分子藥物學(xué)研究所,福建 泉州 362021)

    核糖開關(guān)調(diào)控基因表達(dá)的熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)機(jī)制

    施 磊,楊會(huì)勇,林俊生,刁 勇

    (華僑大學(xué) 分子藥物學(xué)研究所,福建 泉州 362021)

    核糖開關(guān)是一種新型基因表達(dá)調(diào)控元件,一般存在于mRNA的非編碼區(qū)內(nèi)。當(dāng)核糖開關(guān)與特定配體分子結(jié)合后,其構(gòu)象發(fā)生相應(yīng)變化,然后啟動(dòng)或阻斷mRNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯、拼接等過程,行使基因調(diào)控的功能。近期研究發(fā)現(xiàn),核糖開關(guān)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控不僅僅與配體分子的數(shù)量有關(guān),還與mRNA轉(zhuǎn)錄速度有關(guān),即存在熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)調(diào)控兩種機(jī)制。對(duì)核糖開關(guān)介導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的深入了解,將促進(jìn)其在生物技術(shù)及新藥研究等領(lǐng)域的應(yīng)用。

    核糖開關(guān);熱力學(xué);動(dòng)力學(xué);基因表達(dá);調(diào)控

    大多數(shù)生物都具有根據(jù)內(nèi)部和外部信號(hào)的變化而改變其基因表達(dá)模式的能力。傳統(tǒng)理論認(rèn)為感應(yīng)并調(diào)控基因表達(dá)的作用全部由蛋白質(zhì)所執(zhí)行,而最新研究表明,非編碼RNA也可以發(fā)揮重要的基因表達(dá)調(diào)控作用[1]。這些RNA具有原認(rèn)為是蛋白質(zhì)獨(dú)有的功能,如催化、配體識(shí)別等。隨著可特異性結(jié)合有機(jī)分子配體的RNA適體的發(fā)現(xiàn)[2],在mRNA上存在的可調(diào)控基因表達(dá)的適體類序列引起了人們的關(guān)注[3],并被命名為核糖開關(guān)。在調(diào)控基因表達(dá)方面,核糖開關(guān)與蛋白質(zhì)相比毫不遜色,并具有特異性高、敏感性高、表達(dá)調(diào)節(jié)響應(yīng)快等特點(diǎn)[4]。核糖開關(guān)廣泛存在于原核生物,在真菌及植物中也有發(fā)現(xiàn)。核糖開關(guān)在感應(yīng)特定代謝產(chǎn)物的變化后,通過調(diào)控 mRNA 的轉(zhuǎn)錄[5]、翻譯[6]、穩(wěn)定性[7]、或pre-mRNA的剪切[8],發(fā)揮基因表達(dá)調(diào)節(jié)作用。

    1 核糖開關(guān)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

    核糖開關(guān)均由兩部分結(jié)構(gòu)域組成(圖1):其一是負(fù)責(zé)與配體結(jié)合的適體結(jié)構(gòu)域(aptamer domain),其二是負(fù)責(zé)表達(dá)調(diào)控的表達(dá)平臺(tái)(expression platform)[4]。適體結(jié)構(gòu)域序列高度保守,折疊后形成的結(jié)構(gòu)能保證其與配體特異性結(jié)合。適體結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)特征是區(qū)分各種類型核糖開關(guān)的依據(jù)。相對(duì)于適體結(jié)構(gòu)域,表達(dá)平臺(tái)的特異性就不非常明顯。當(dāng)配體與適體結(jié)構(gòu)域結(jié)合后,會(huì)引起下游表達(dá)平臺(tái)的RNA構(gòu)象變化,從而阻礙或促進(jìn)mRNA的轉(zhuǎn)錄或翻譯等[9-11]。轉(zhuǎn)錄終止是核糖開關(guān)控制原核生物基因表達(dá)的常用機(jī)制,配體與核糖開關(guān)結(jié)合與否,導(dǎo)致終止子的形成或破壞,并分別引起轉(zhuǎn)錄的終止或延伸(圖2):當(dāng)適體結(jié)構(gòu)域沒有結(jié)合配體時(shí),表達(dá)平臺(tái)形成穩(wěn)定的抗終止子結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)錄順利進(jìn)行;當(dāng)與配體結(jié)合后,抗終止子與下游序列通過構(gòu)象變化,形成終止子結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄終止。

    圖1 核糖開關(guān)的結(jié)構(gòu)

    圖2 轉(zhuǎn)錄終止型核糖開關(guān)基因表達(dá)調(diào)控示意圖

    2 核糖開關(guān)的熱力學(xué)調(diào)控機(jī)制

    以適體/配體間解離常數(shù)(KD)為指標(biāo)的熱力學(xué)參數(shù)是核糖開關(guān)基因調(diào)控機(jī)制的重要因素,為促進(jìn)配體與核糖開關(guān)的結(jié)合,配體的濃度必須超過其KD值。事實(shí)上,只要是有足量的配體存在,適體/配體復(fù)合物即可形成,并進(jìn)行基因調(diào)控。一些核糖開關(guān)核酸適體的KD值在皮摩爾數(shù)量級(jí),因此可以感應(yīng)極低濃度的代謝產(chǎn)物變化。核糖開關(guān)的適體結(jié)構(gòu)域根據(jù)細(xì)胞內(nèi)靶配體濃度的高低變化改變自身構(gòu)象,表達(dá)平臺(tái)的構(gòu)象也相應(yīng)動(dòng)態(tài)調(diào)整,決定下游序列是否繼續(xù)轉(zhuǎn)錄或翻譯。核糖開關(guān)的適體結(jié)構(gòu)域必須能夠特異性地識(shí)別細(xì)胞內(nèi)濃度處于正常水平的靶配體 對(duì)其它結(jié)構(gòu)近似的代謝產(chǎn)物的正確區(qū)分,是有效避免調(diào)控錯(cuò)誤的關(guān)鍵。采用配體指數(shù)富集系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX),經(jīng)過10~15輪反復(fù)篩選可得到任何指定配體的人工適體[4],但與已發(fā)現(xiàn)的核糖開關(guān)的適體結(jié)構(gòu)域比較,這些人工適體的結(jié)構(gòu)較小、與配體的結(jié)合力較弱且特異性較低,說明上億年的進(jìn)化演變已經(jīng)賦予核糖開關(guān)的適體序列以最佳的熱力學(xué)調(diào)控特征。

    任何僅含有一個(gè)適體結(jié)構(gòu)域的核糖開關(guān),其基因表達(dá)調(diào)控幅度如變化9倍,配體的濃度則需要變化81倍[12],因此要求細(xì)胞必須能夠耐受某些代謝產(chǎn)物巨大的變化幅度。為了提高核糖開關(guān)基因調(diào)控的靈敏度,生物體還進(jìn)化出“串聯(lián)”核糖開關(guān)結(jié)構(gòu),配體的濃度變化40倍即可實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的9倍變化[13]。將多個(gè)適體整合在同一個(gè)核糖開關(guān)內(nèi),是提高核糖開關(guān)熱力學(xué)調(diào)控特性更加精妙的策略。核糖開關(guān)內(nèi)兩個(gè)適體可以協(xié)同作用,任一適體與配體結(jié)合都可以相應(yīng)提高配體與另一個(gè)適體的親和力。配體濃度變化9倍,基因表達(dá)變化就可以達(dá)到9倍[14]。串聯(lián)核糖開關(guān)結(jié)構(gòu)使得RNA可以感應(yīng)代謝產(chǎn)物更小的濃度變化,敏感度完全可與蛋白因子媲美。

    3 核糖開關(guān)的動(dòng)力學(xué)調(diào)控機(jī)制

    Wickiser等[15]發(fā)現(xiàn)黃素單核苷酸(FMN)核糖開關(guān)/配體間KD值大小與體內(nèi)可發(fā)揮調(diào)控作用的FMN濃度高低不一致,并首次提出核糖開關(guān)對(duì)基因的表達(dá)調(diào)控還存在動(dòng)力學(xué)機(jī)制。當(dāng)FMN與核糖開關(guān)結(jié)合的速度慢于RNA聚合酶介導(dǎo)的mRNA延伸速度時(shí),即使細(xì)胞內(nèi)FMN濃度高于KD值,mRNA仍然會(huì)繼續(xù)延伸而不發(fā)生終止。mRNA的模板DNA序列中存在暫停位點(diǎn),可導(dǎo)致RNA聚合酶短暫地終止轉(zhuǎn)錄過程。這些轉(zhuǎn)錄暫停為核糖開關(guān)結(jié)合其特定的配體提供了額外的時(shí)間,從而有效地控制基因的表達(dá)[15]。如果在轉(zhuǎn)錄暫停期間,配體還不能與核糖開關(guān)結(jié)合并形成穩(wěn)定的特定構(gòu)象,mRNA則繼續(xù)延伸形成編碼序列。

    核糖開關(guān)與配體結(jié)合以及構(gòu)象轉(zhuǎn)換的速度也是決定其調(diào)控機(jī)制是動(dòng)力學(xué)還是熱力學(xué)過程的重要因素。如腺嘌呤核糖開關(guān)需要15 s左右才能形成穩(wěn)定的核糖開關(guān)/配體復(fù)合物,在這段時(shí)間內(nèi)RNA聚合酶足以從適體結(jié)構(gòu)域合成mRNA至表達(dá)平臺(tái)[16]。如果細(xì)胞內(nèi)存在有利于提高RNA聚合酶效率的因素,如適當(dāng)?shù)暮塑杖姿?、鎂離子以及相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,則表現(xiàn)為動(dòng)力學(xué)控制。另外,如果核糖開關(guān)構(gòu)象轉(zhuǎn)換的速度慢于與配體結(jié)合的速度,也表現(xiàn)為動(dòng)力學(xué)控制。而當(dāng)核糖開關(guān)與配體結(jié)合后形成了較穩(wěn)定的構(gòu)象后,則表現(xiàn)為熱力學(xué)控制。

    4 展望

    與基因表達(dá)的蛋白調(diào)控系統(tǒng)比較,核糖開關(guān)不需要蛋白因子參與,免疫原性小;元件大小在數(shù)百堿基之內(nèi),構(gòu)成非常簡單;響應(yīng)配體時(shí)間一般在數(shù)分鐘之內(nèi),反應(yīng)迅速;核糖開關(guān)位于mRNA之上,發(fā)揮順式調(diào)節(jié)作用,可實(shí)現(xiàn)緊密調(diào)節(jié)。以上諸多優(yōu)點(diǎn),使得核糖開關(guān)自發(fā)現(xiàn)之日起就引起了廣泛關(guān)注,日益深入的研究結(jié)果顯示其可以在代謝物檢測、新藥研但所有這些應(yīng)用前景的實(shí)現(xiàn),必需基于對(duì)核糖開關(guān)作用機(jī)制的深入詳盡研究。

    特別值得提及的是核糖開關(guān)還可以作為新藥研究的重要靶點(diǎn)。首先,已發(fā)現(xiàn)的核糖開關(guān)絕大多數(shù)存在于細(xì)菌內(nèi),如以細(xì)菌核糖開關(guān)為靶點(diǎn)開發(fā)抗生素,則有可能克服對(duì)人體細(xì)胞交叉毒性。其次,已發(fā)現(xiàn)的核糖開關(guān)往往是調(diào)控細(xì)胞生存所必需的蛋白質(zhì),以其為靶點(diǎn)的抗生素應(yīng)為殺菌性藥物。第三,核糖開關(guān)在進(jìn)化過程中的相對(duì)保守性,也可能賦予針對(duì)該靶點(diǎn)的抗生素以廣譜性。Blount等[18]以枯草桿菌內(nèi)賴氨酸核糖開關(guān)為靶點(diǎn)成功開發(fā)了可抑制枯草桿菌生長的新型抗生素,說明了核糖開關(guān)靶點(diǎn)的可行性。

    [1]刁 勇.僅基于RNA元件構(gòu)建可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因表達(dá)的調(diào)控系統(tǒng)[J].中國生物工程雜志,2011,31(12):120-125.

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    Thermodynamic or kinetic control of riboswitch-mediated gene expression

    SHI Lei,YANG Huiyong,LIN Junsheng,DIAO Yong
    (Institute of Molecular Materia Medica,Huaqiao University,Quanzhou,362021,China)

    Q78

    A

    1005-1678(2012)04-0509-03

    2012-02-18

    國際科技合作項(xiàng)目(2011DFG33320)

    施 磊,男,碩士研究生,生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè),E-mail:shllionshl@163.com; 林俊生,男,通信作者,教授,E-mail:ljunshengl@yahoo.com。

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