高效液相色譜法測定人參蜂王漿口服液中五味子木脂素成分的含量

蔣受軍，鄧 鳴，王思寰，趙青霞，朱 斌

(1．廣西玉林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 玉林 537000;2．廣西食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021;3．廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001;4．桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林，541004)

高效液相色譜法測定人參蜂王漿口服液中五味子木脂素成分的含量

蔣受軍1，2，鄧 鳴2，王思寰3，趙青霞4，朱 斌2

(1．廣西玉林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 玉林 537000;2．廣西食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021;3．廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001;4．桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林，541004)

目的 建立人參蜂王漿口服液中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素三種五味子木脂素成分含量測定的高效液相色譜法。方法 樣品超聲提取后，濾過，取續(xù)濾液，采用高效液相色譜法測定。色譜柱為依利特 Hypersi ODS2(250 mm ×4．6 mm，5 μm)，以甲醇-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為 1．0 mL/min，檢測波長為 254 nm。結(jié)果 五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分別在0．045 4 ～11．35，0．049 3 ～12．33，0．055 3 ～13．82 μg/mL 濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系;平均加樣回收率依次為96．4%，100．1%和106．1%;RSD(n=9)依次為3．7%，2．7%和2．3%。精密度和重復(fù)性良好。結(jié)論 所建立的方法準(zhǔn)確、簡便，適用于人參蜂王漿口服液中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的含量測定。

五味子醇甲;五味子甲素;五味子乙素;人參蜂王漿口服液;高效液相色譜

人參蜂王漿口服液是以人參、蜂王漿、五味子、蜂蜜等為主要原料制成的保健食品，經(jīng)功能試驗(yàn)證明具有免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老的保健功能［1］。人參蜂王漿相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均擬定了針對蜂王漿、人參功效成分的控制指標(biāo)，但均未見對另一主要成分五味子功效成分進(jìn)行控制。五味子作為藥食同源的一味中藥，是我國傳統(tǒng)的補(bǔ)益類藥物，而且也多用于保健食品，其主要的成分包括木脂素類、揮發(fā)油類、有機(jī)酸、三萜酸、甾醇、酚類等?，F(xiàn)代研究表明，五味子中木脂素類成分是其主要藥理活性成分［2］。木脂素類成分含量測定方法很多，高效液相色譜(HPLC)法在五味子的成分分析和質(zhì)量控制中有較多廣泛的應(yīng)用［3-6］。本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定人參蜂王漿口服液中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的方法，為更好的評(píng)價(jià)和控制產(chǎn)品的質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜系統(tǒng);Chemstation工作站;SatoriusBP265電子天平;KQ-500DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

五味子醇甲對照品(批號(hào):110857-200709)、五味子甲素對照品(批號(hào):0764-200107)，五味子乙素對照品(批號(hào):110765-200407)，中國藥品生物制品檢定所;人參蜂王漿口服液，市售，批號(hào):SJ:10052814， BJ: 2010060706、 2010092806、2010102606;水為高純水;其它試劑均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:依利特 Hypersil ODS2(250 mm×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相 A:甲醇，流動(dòng)相 B:水，梯度洗脫:0～30 min(70% ～80%A)、30～31 min(80% ～70%A)、31 ～40 min(70%A)，流速為 1．0 mL/min;檢測波長:254 nm;進(jìn)樣量:20 μL;柱溫:35 ℃。對照品及樣品色譜圖見圖1。

圖1 對照品(A)和樣品(B)色譜圖

2．2 溶液的制備

2．2．1 對照溶液的制備 分別取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品約25 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，分別用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。分別精密量取各對照品貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得混合對照品溶液。

2．2．2 供試品溶液的制備 精密量取人參蜂王漿口服液5 mL，置錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱定重量，超聲提取10 min，取出放冷后用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，用0．45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2．3 線性關(guān)系

精密量取對照品溶液適量，分別用甲醇稀釋成濃度約為 10，4，2，0．4，0．1，0．05 μg/mL 的系列混合對照品溶液，注入液相色譜儀，按2．1項(xiàng)下色譜條件，記錄峰面積。以濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素回歸方程分別為:A=39．828 3 C+1．033 4，r=0．999 9;A=37．624 9 C+4．566 1，r=0．999 9;A=64．132 6 C+2．141 2，r=0．999 9;結(jié)果表明，五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分別在0．045 4 ～11．35，0．049 3 ～12．33，0．055 3 ～13．82 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2．4 精密度實(shí)驗(yàn)

取濃度為2 μg/mL的混合對照品溶液，依前法測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素峰面積RSD(n=5)分別為0．03%，0．11%和0．05%。表明儀器的精密度良好。

2．5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取批號(hào)為2010102606樣品，按2．2．2項(xiàng)制備供試品溶液6份，依法測定，計(jì)算五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量，RSD(n=6)分別為2．6%，2．2%和3．3%。結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2．6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取批號(hào)為2010102606樣品，分別放置0，4，8，12，24 h進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素峰面積RSD值，分別為0．9%，1．8%和1．5%。表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．7 回收率實(shí)驗(yàn)

分別取批號(hào)為2010102606樣品9份，每份5 mL，添加高、中、低三種濃度的對照品溶液，每個(gè)濃度3份供試品溶液，依法測定。結(jié)果見表1。

2．8 樣品測定結(jié)果

取樣品，依法測定，結(jié)果見表2。

3 討論

3．1 流動(dòng)相的選擇

選用甲醇-水、乙腈-水、四氫呋喃-水等流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比較，結(jié)果，甲醇-水系統(tǒng)對人參蜂王漿口服液的分離效果最好。

3．2 檢測波長的選擇

在波長200～400 nm對3種照品色譜峰進(jìn)行掃描，結(jié)果均在216及254 nm波長處有最大吸收。254 nm波長處干擾較小，因此選擇254 nm作為檢測波長。

3．3 提取溶劑的選擇

對甲醇、乙腈、乙醇等不同溶劑的提取效率進(jìn)行考察，結(jié)果表明甲醇的提取效率最高，供試液的干擾較少。故實(shí)驗(yàn)選用甲醇為提取溶劑。

表1 回收率測定結(jié)果

表2 樣品測定結(jié)果

3．4 樣品提取方法的比較

結(jié)合木脂素類成分的性質(zhì)和樣品本身的特點(diǎn)，比較超聲提取和回流提取，結(jié)果表明二者提取效率接近，但超聲提取方法簡單，容易操作，因此我們選擇了超聲提取。

4 結(jié)論

結(jié)果顯示，不同企業(yè)產(chǎn)品所含五味子成分含量差異較大，即使同一企業(yè)的產(chǎn)品，其不同批次之間五味子醇甲的含量也存在較大差異。其原因可能有處方、原料、工藝等多方面的影響。五味子為人參蜂王漿的主要成分之一，其含量的高低直接影響著產(chǎn)品的功效，為保證人參蜂王漿產(chǎn)品的質(zhì)量，有必要對五味子的指標(biāo)性成分——五味子醇甲進(jìn)行測定，制訂含量限度。

［1］ 高玉蘭．人參蜂王漿口服液處方依據(jù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［J］．黑龍江醫(yī)藥，2009，22(3):357．

［2］ 陸兔林，毛春芹，路長珍，等．不同產(chǎn)地五味子藥材中木脂素類成分比較［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(5):547-549．

［3］ 付紹平，楊 傅，陳 彤，等．北五味子的液相色譜指紋圖譜的建立［J］．色譜，2008，26(1):64-67．

［4］ 王彥涵，高建平，陳道峰．高效液相色譜法測定五味子屬藥用植物木脂素的含量［J］．中國中藥雜志，2003，28(12):1155-1160．

［5］ 栗 爽，王 冰．HPLC法測定不同產(chǎn)地五味子種子中3種木脂素類含量［J］．江西中醫(yī)藥，2009，1(1):58-59．

［6］ 應(yīng)國清，郭 濤，易 喻，等．RP-HPLC法檢測華中五味子藥材中的五味子醇甲的含量［J］．浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，37(1):6-8，18．

Determination of lignan compounds of Schisandra Chinesesi Fructus in Ginseng Royal Jelly Oral Liquid by HPLC

JIANG Shou-jun1，2，DENG Ming2，WANG Si-huan3，ZHAO Qing-xia4，ZHU Bin2
(1．Guangxi Yulin Institute for Food and Drug Control，Yulin 537000，China;2．Guangxi Institute for Food and Drug Control，Nanning 530021，China;3．Guangxi University of TCM，Nanning 530001，China;4．Guilin Medical College，Guilin 541004，China)

Purpose To develop a HPLC method for the determination of schisandrin，deoxyschizandrin and schisandrin B of Schisandra Chinesesi Fructus in Ginseng Royal Jelly Oral Liquid simultaneously．Methods A Hypersil ODS2 column(250 mm ×4．6 mm，5 μm)was used．The mobil phase was composed of methanol and water，which eluded in a gradient program．The flow rate was 1．0 mL/min．The detective wavelength was set at 254 nm．Results The results were that quantitative line range of three ingredients was 0．045 4-11．35，0．049 3-12．33 and 0．055 3-13．82 μg/mL，respectively．The average recovery(n=9)was 96．4%，100．1%，106．1%and RSD is 3．7%，2．7%，2．3%，respectively．Conclusion A specific，sensitive，simple and reproducible HPLC method was established for the determination of the three lignan compounds of Schisandra Chinesesi Fructus in Ginseng Royal Jelly Oral Liquid．

schisandrin;deoxyschizandrin;schisandrin B;Ginseng Royal Jelly Oral Liquid;HPLC

R927．2

A

1005-1678(2012)06-0830-03

2012-06-12

蔣受軍，男，醫(yī)學(xué)博士，副主任中藥師，主要從事食品、藥品安全性評(píng)價(jià)研究，天然藥物活性成分和質(zhì)量控制研究及實(shí)驗(yàn)室管理工作。