淺析乳制品中脂肪酸類營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑檢測(cè)方法

丁紅梅，陳彬，張霞，楊興龍

（南通市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，江蘇 南通 226011）

淺析乳制品中脂肪酸類營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑檢測(cè)方法

丁紅梅，陳彬，張霞，楊興龍

（南通市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，江蘇 南通 226011）

本文將乳制品經(jīng)酸水解后，利用乙醇-乙醚-石油醚提取脂肪酸，在堿性條件下進(jìn)行甲基化反應(yīng)，用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定出添加的7種脂肪酸類營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑。本檢測(cè)方法前處理簡(jiǎn)單快捷，易于操作，方法重現(xiàn)性良好，其RSD可達(dá)0.82%～1.78%；回收率可達(dá)89.9%～103.6%；靈敏度高，檢測(cè)限為0.1 mg/kg。

乳制品；脂肪酸類營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑；檢測(cè)

0 引 言

必需脂肪酸，是指人體生命活動(dòng)不可缺少而體內(nèi)又無(wú)法合成的，必須由食物提供的一類多不飽和脂肪酸，必需脂肪酸膳食補(bǔ)充已成為食品營(yíng)養(yǎng)的世界性標(biāo)準(zhǔn)，添加了必需脂肪酸的食品與傳統(tǒng)食品相比，能得到消費(fèi)者更多的青睞。本文將乳制品樣品經(jīng)酸水解在堿性條件下甲基化反應(yīng)用氣質(zhì)法測(cè)定出其添加的脂肪酸類營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑含量。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料

所有試劑，如未經(jīng)注明均指分析純；所有實(shí)驗(yàn)用水，如未經(jīng)注明均指三級(jí)水。

鹽酸（優(yōu)級(jí)純），無(wú)水乙醇，乙醚，氫氧化鉀，無(wú)水甲醇，石油醚（沸程30～60℃），正己烷（農(nóng)殘級(jí)）。

α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、γ-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、共軛亞油甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、花生四烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，均購(gòu)于上海安譜。氫氧化鉀的甲醇溶液（KOH）濃度為4 mol/L，使用無(wú)水甲醇配制。

1.2 儀器

Agilent 7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜儀，配備7683B自動(dòng)進(jìn)樣器、增強(qiáng)型化學(xué)工作站。

色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管色譜柱 （30m×0.25mm×0.32mm）；

超聲波清洗儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，離心機(jī)。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

準(zhǔn)確稱取樣品5.0000 g置于200 mL具塞三角瓶中，加25 mL水加熱溶解，混勻后再加15 mL鹽酸，搖勻。將搖勻后樣液放置超聲波清洗儀中，調(diào)節(jié)水浴溫度80℃超聲提取45 min。取出三角瓶加入10 mL無(wú)水乙醇混勻，冷卻后加25 mL乙醚入三角瓶中加塞超聲提取1 min，小心開(kāi)塞放出氣體，再振搖1 min后再加入25 mL石油醚，塞上塞子超聲提取1 min，振搖后離心或靜置，使醚層、水層分開(kāi)，有機(jī)層轉(zhuǎn)入燒瓶中。第二次、第三次提取加入的試劑為5 mL乙醇、15 mL乙醚、15 mL石油醚，操作方法同第一次。

把提取的醚液合并，減壓濃縮至近干，用正己烷溶解殘留物并定容至10 mL，搖勻。準(zhǔn)確吸取2 mL氫氧化鉀的甲醇溶液，超聲振搖10 min，進(jìn)行甲基化反應(yīng)。如果有機(jī)層有渾濁可離心至澄清，此有機(jī)層為樣品待測(cè)液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品配制

7種標(biāo)準(zhǔn)品利用正己烷配成標(biāo)準(zhǔn)混合溶液質(zhì)量濃度分別為5，10，20，30 mg/L。

1.3.3 測(cè)定條件

（1）氣相條件。HP-5MS毛細(xì)管色譜柱；進(jìn)樣口溫度200℃；分流進(jìn)樣，分流比5∶1；載氣為氦氣（純度99.999%）,流速1 mL/min；程序升溫：150℃下保持5 min，以10℃/min升至250℃，保持10 min，全部程序時(shí)間25 min，自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL。

（2）質(zhì)譜條件。 電子轟擊（EI）離子源；電子倍增器電壓1301eV;電離電壓70 eV;離子源溫度230℃ ；四極桿溫度150℃ ；接口溫度250℃；SIM/全掃描（SCAN）采集模式，掃描質(zhì)量范圍：m/z 40～450；溶劑延遲時(shí)間3 min；采樣頻率2Hz。

1.3.4 定量與定性

（1）定性。采用保留時(shí)間和MS/SCAN方法來(lái)定性，主要是利用7種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑出峰時(shí)間和3個(gè)特征離子定性。

（2）定量。利用選擇特征離子α-亞麻酸甲酯（292.3,135.1,108.1,79.1）、γ-亞麻酸甲酯（292.3,194.1,150.1,93.1）、亞油酸甲酯（294.3,263.1,109.1,81.1）、共軛亞油甲酯（294.3,109.1,95.1,81.1）、花生四烯酸甲酯（203.2,105.1,91.1,150.1）、EPA甲酯（201.1,79.0,119.1,104.9）、DHA甲酯（215.1,130.9,79.1,91.1），采用外標(biāo)法進(jìn)行定量計(jì)算。其中，第一個(gè)特征離子為定量時(shí)使用，后三個(gè)特征離子為標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)定性時(shí)采用。

2 結(jié)果討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

中性脂肪為脂肪酸和甘油形成的酯。在酸、堿或酯酶的作用下可發(fā)生水解，以堿作催化劑，產(chǎn)物是甘油和能溶于水的鹽類（即皂），此過(guò)程即為皂化作用，皂用酸水解后生產(chǎn)不溶于水的脂肪酸，不飽和脂肪酸從樣品中提取分離后，需要甲酯化處理，常用的甲酯化方法有三氟化硼法、三甲基氫氧化硫法（TMSH）、甲醇鉀法、重氮甲烷、鹽酸/甲醇和氫氧化四甲胺/甲醇等[1-3]，本方法通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較表明，利用濃度為4 mol/L的KOH-CH3OH能夠?qū)λ崛〉牟伙柡椭舅釥I(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑進(jìn)行有效酯化，所選試劑相比之下更易獲取制備。

2.2 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品總離子圖

圖1中，出峰順序：14.10 min為γ-亞麻酸甲酯，14.29 min為亞油酸甲酯，14.37 min為α-亞麻酸甲酯，14.80 min為共軛亞油甲酯，15.98 min為花生四烯酸甲酯，16.09 min為EPA甲酯，18.15 min為DHA甲酯。 圖2為調(diào)制乳樣品提取離子圖。

2.3 準(zhǔn)確度與精密度實(shí)驗(yàn)

2.3.1 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

在市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)嬰兒奶粉、調(diào)制乳樣品，分別添加質(zhì)量濃度為5，10，20 mg/L的三種混合標(biāo)準(zhǔn)品，按照本文的樣品處理及檢測(cè)方法，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),，結(jié)果如表1所示。

2.3.2 精密度

取奶粉樣品各進(jìn)行6次樣品處理進(jìn)行測(cè)定，得精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)

表2 精密度實(shí)驗(yàn)（n=6）

取質(zhì)量濃度為10 mg/L的7種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑混合標(biāo)樣，進(jìn)樣量為1 μL，測(cè)得信噪比 ，檢測(cè)限以3倍噪聲計(jì)算，得到7種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑儀器檢測(cè)限；以5.0 g稱樣量，最后定容體積為10 mL，進(jìn)樣量1 μL（同標(biāo)樣）計(jì)，得到本方法的7種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的檢出限均為0.1 mg/kg。

3 結(jié)束語(yǔ)

此方法線性好回收率和精密度都很高，與GB5413.27-2010標(biāo)準(zhǔn)中的方法相比具有檢測(cè)限低、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，且樣品中待測(cè)組份的分離度很好，能夠同時(shí)測(cè)定乳制品中添加的脂肪酸類營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，此方法適合在基層實(shí)驗(yàn)室推廣。

[1]李全陽(yáng)，岳永生，張慶朝.食品添加劑的檢測(cè)技術(shù)研究[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1994，16（2）：223-225.

[2]朱世永，陳世京.衍生物氣相色譜法[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版杜，1993，183-207.

[3]中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所.食物營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定法[M].北京：人民衛(wèi)生出版杜，1990：31-45.

Detection of fatty acids nutrition enhancer in dairy products

DING Hong-mei,CHEN Bin，ZHANG Xia，YANG Xing-long
（Nantong Bureau of Produce Quality Supervision and Testing,Nantong 226011，China）

s：In this paper dairy products after acid hydrolysis,fatty acid were extracted by alcohol ether-petroleum ether，in alkaline conditions were methylated,with gas chromatography-mass spectrometry method for the determination of fatty acids nutrition enhancer.The detection method was good at simple and quick detection,easy operation,the method has good reproducibility，with RSD of 0.82%to 1.78%;recovery rate of 89.9%to 103.6%;high sensitivity and a detection limit of 0.1 mg/kg.

Dairy products；Fatty acids Nutrition Enhancer；Detection.

TS252.7

A

1001-2230（2012）09-0046-02

2012-02-20

國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局科技項(xiàng)目（2010QK174）；江蘇省南通市科技項(xiàng)目（S2010004）。

丁紅梅（1978-），女，工程師，從事色譜儀器檢測(cè)工作。