SATB-1在喉癌中的表達(dá)及其臨床意義

莊黎明， 蘇子劍

SATB-1 (special A-T rich binding protein-1, SATB-1)是一種組織特異性表達(dá)的核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白，在胸腺細(xì)胞中顯著表達(dá)，參與T細(xì)胞的發(fā)育和成熟[1-2]。有學(xué)者認(rèn)為SATB-1蛋白可作為“基因組組織者”，能影響1 000多種基因的表達(dá)，從而影響乳腺癌的預(yù)后[3]。本研究利用免疫組織化學(xué)方法檢測SATB-1在喉癌和癌旁組織中的表達(dá)情況，探討可能影響喉癌預(yù)后的獨(dú)立因素，以及SATB-1在喉癌發(fā)生、發(fā)展中可能的作用及臨床意義。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 本組68例為福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院1998年7月至2005年12月間行喉癌根治術(shù)且隨訪資料完整的喉癌患者，年齡28～75歲，平均(55.0±2.5)歲，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療及免疫治療。所有病例均由兩位病理醫(yī)師確診。68例喉癌組織中，按發(fā)生部位分型：聲門上型21例，聲門型28例，聲門下型19例；組織學(xué)分級：Ⅰ級23例，Ⅱ級23例，Ⅲ級22例。TNM分期為：Ⅰ期18例，Ⅱ期19例，Ⅲ期31例。68例中32例有淋巴轉(zhuǎn)移。另外隨機(jī)取遠(yuǎn)離腫瘤(>1 cm)的腫瘤旁正常組織(鏡下無癌)20例作對照組?；颊呱嫫趶氖中g(shù)之日起開始計(jì)算，終止日期為死亡期或末次隨訪日期。研究截止日期為2008年6月30日。隨訪時間為13個月～115個月，平均(60.63±6.80)個月，其中局部復(fù)發(fā)8例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移9例，死亡45例。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人SATB-1多克隆抗體(ab49061)購自美國Abcam公司，濃縮型，工作液濃度為1∶150；SP免疫組化試劑盒購自欣博盛生物公司；PBS緩沖液、檸檬酸緩沖液均購自福州邁新公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)過程 將石蠟切片脫臘脫水，于3%H2O2室溫孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min×3次。檸檬酸抗原，5%正常山羊血清封閉，室溫孵育10 min，傾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，4 ℃冰箱過夜。PBS沖洗，5 min×3次。滴加生物素標(biāo)記二抗工作液，室溫孵育30 min。PBS沖洗，5 min×3次。滴加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育10 min。PBS沖洗，5 min×3次，DAB顯色劑顯色3～5 min，顯微鏡下監(jiān)測。自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，中性樹脂封片。以PBS代替一抗，其他步驟不變，作為陰性對照。以已知陽性標(biāo)本作為陽性對照。

1.4 結(jié)果判定 由兩位病理醫(yī)師獨(dú)立觀察，隨機(jī)采集10個具有代表性的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均數(shù)值。SATB-1陽性染色判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)參考文獻(xiàn)[3]，細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，以細(xì)胞百分率判定陽性強(qiáng)度，分為：“-”無染色的陽性細(xì)胞，“+”強(qiáng)染色細(xì)胞數(shù)≤5%或中等染色陽性細(xì)胞數(shù)≤50%，“++”強(qiáng)染色細(xì)胞數(shù)>5%或中等染色陽性細(xì)胞數(shù)>50%。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 運(yùn)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，成組對照計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier法分析，不同生存曲線的差異性檢驗(yàn)用對數(shù)秩檢驗(yàn)(Log-rank Test)；運(yùn)用多因素COX模型法來綜合評價和權(quán)衡各因素對預(yù)后生存的影響。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 SATB-1在喉癌組織和癌旁組織中的表達(dá) SATB-1在喉癌組織中明顯表達(dá)(47/68, 69.1%)，定位于細(xì)胞核上(圖1)，其他位置未見染色，而SATB-1在喉癌癌旁組織中不表達(dá)，兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 SATB-1在喉癌組織中的陽性表達(dá)(SP染色 ×100)

2.2 SATB-1與喉癌病理參數(shù)的關(guān)系 SATB-1在喉癌中的陽性表達(dá)與患者的年齡、性別、分型無關(guān)(P>0.05)，但隨著組織學(xué)分級、臨床分期的升高和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而增加 (P<0.05)，見表1。

2.3 喉癌組織中SATB-1蛋白表達(dá)與患者生存時間的關(guān)系 由表2可見，不同SATB-1表達(dá)組之間的生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=59.151,P=0.000)，SATB-1表達(dá)陽性的喉癌患者生存率明顯低于SATB-1陰性者，且陽性表達(dá)越強(qiáng)，患者生存率越低。生存曲線見圖2。

表1 SATB-1與喉癌病理參數(shù)的關(guān)系

圖2 SATB-1表達(dá)與喉癌總生存率的關(guān)系

表2 SATB-1表達(dá)與喉癌總生存率的關(guān)系

2.4 COX比例風(fēng)險模型分析 對可能影響喉癌預(yù)后的6個相關(guān)因素:SATB-1表達(dá)、患者年齡、腫瘤分型、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期進(jìn)行多因素COX模型分析，結(jié)果顯示，SATB-1表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響喉癌預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05)，見表3。

表3 喉癌患者臨床病理特征多因素COX回歸分析結(jié)果

3 討論

SATB-1是一種組織特異性表達(dá)的核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白，在胸腺細(xì)胞中顯著表達(dá)，參與T細(xì)胞的發(fā)育和成熟。SATB-1位于3號染色體3p23區(qū)，全長763個氨基酸，SATB-1與核基質(zhì)結(jié)合區(qū)序列特異性結(jié)合，參與染色體及基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá)的調(diào)控。

SATB-1在正常組織中不表達(dá)，在大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞中有異常表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)，在102例胃癌患者中發(fā)現(xiàn)SATB-1陽性表達(dá)率為48%，SATB-1與浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等相關(guān)，多因素分析表明SATB-1是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素[4-5]。Lakshminarayana等[6]通過下調(diào)SATB-1的表達(dá)抑制Colo205結(jié)腸癌細(xì)胞株的生長。本研究結(jié)果顯示SATB-1在喉癌癌旁組織中無表達(dá)，而在喉癌細(xì)胞中的陽性表達(dá)率為69.1%；SATB-1的表達(dá)隨著組織學(xué)分級、臨床分期的升高和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而增加，提示SATB-1可能與喉癌的增殖和轉(zhuǎn)移有關(guān)。生存時間的統(tǒng)計(jì)顯示，SATB-1陽性喉癌患者生存率明顯低于SATB-1陰性者。多因素COX模型分析結(jié)果顯示，SATB-1表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響喉癌預(yù)后的獨(dú)立因素。以上均證實(shí)SATB-1可能在喉癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，其高表達(dá)是預(yù)后不良的指標(biāo)。

一般認(rèn)為SATB-1可構(gòu)成一個功能性的核結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)在染色質(zhì)周圍形成一個籠狀蛋白分布。Cai等[7]命名這個結(jié)構(gòu)為“SATB-1調(diào)控網(wǎng)絡(luò)”，其通過招募染色質(zhì)重塑/修飾酶和轉(zhuǎn)錄因子作用于基因組的DNA，使表觀遺傳發(fā)生改變，促進(jìn)染色質(zhì)重塑，調(diào)節(jié)組蛋白乙?；图谆剑源藢虮磉_(dá)進(jìn)行調(diào)控。Han[3]發(fā)現(xiàn)SATB-1能通過調(diào)控組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白脫乙?；敢愿深A(yù)組蛋白的乙酰化水平，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)基因表達(dá)的調(diào)控。Alvarez等[8]建立了SATB-1基因敲除小鼠模型，應(yīng)用Atlas小鼠cDNA表達(dá)陣列(atlas mouse cDNA expression array)隨機(jī)觀察597個基因的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)至少有10個基因的表達(dá)上調(diào)，還有1個基因的表達(dá)下調(diào)，通過SATB-1移除前后腫瘤細(xì)胞中基因表達(dá)圖譜的變化，發(fā)現(xiàn)SATB-1控制著1/4～1/3“預(yù)后不良基因”的表達(dá)，其中包括控制粘附性、細(xì)胞周期、細(xì)胞外基質(zhì)、信號通路、細(xì)胞間連接和凋亡的基因。盡管如此，關(guān)于SATB-1調(diào)控相關(guān)的基因表達(dá)的確切機(jī)制尚不清楚，還有待進(jìn)一步證實(shí)。

總之，SATB-1在喉癌的發(fā)生、增殖和轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮重要作用，是喉癌的獨(dú)立預(yù)后因素。是否可通過拮抗或抑制SATB-1的表達(dá)抑制喉癌的發(fā)生發(fā)展及SATB-1的作用機(jī)制還需進(jìn)一步的研究。

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