高效液相色譜法測定便血顆粒方中鹽酸小檗堿的含量

胡忠紅

（東臺市中醫(yī)院，江蘇 東臺 224200）

便血顆粒方是東臺市中醫(yī)院肛腸科多年來應(yīng)用的協(xié)定處方，方中以黃連、制大黃、槐角、枳殼、黃芩、荊芥、防風、生地黃等濃縮顆粒組成，其中黃連中的鹽酸小檗堿是主要活性成分之一，《中國藥典》2000年版一部采用薄層掃描法測定黃連中鹽酸小檗堿的含量，操作比較煩瑣，重現(xiàn)性差。根據(jù)文獻［1-2］中黃連的測定方法，用高效液相色譜法測定便血顆粒方中鹽酸小檗堿的含量，方法簡便，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

Waters 600E高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Waters 2487雙通道紫外-可見檢測器（美國Waters公司）；JS-3030色譜工作站（大連江申分離技術(shù)公司）；AE240電子分析天平（瑞士Mettle公司）；超聲波清洗器（無錫超聲電子設(shè)備廠）；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。鹽酸小檗堿對照品（Berberine hydrochloride）購于中國藥品生物制品檢定所（編號：0913-0910）供含量測定用。便血顆粒方中諸藥均為江蘇省江陰天江藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil-C18（大連化學物理研究所）；流動相：0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3）∶乙腈（70∶30）；流速：1mL/min；檢測波長：270nm；柱溫：20℃。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于2 500；進樣量10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品約10mg精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（1mL中含鹽酸小檗堿220μg）。

2.2.2 供試品溶液的制備 便血顆粒方溶液的制備：便血顆粒方顆粒按配方比例混合均勻后取約2.0g，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇40mL，超聲處理60min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液。精密吸取續(xù)濾液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分別置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取不同濃度的對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品進樣量（X）對峰面積積分值（Y）進行線性回歸，結(jié)果在0.45～2.20μg范圍內(nèi)呈良好的線形關(guān)系，其回歸方程：Y=860 834X-18 533，r=0.9 999，n=5。

2.4 精密度考察 精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣5次，測定。結(jié)果RSD=0.23％。

2.5 穩(wěn)定性試驗 以同一供試品溶液依法每隔1h測定1次。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿含量在4h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.3％。

2.6 重復性試驗 精密稱取同一批號樣品5分，依法測定鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果RSD=0.13％。

2.7 回收率試驗 用加樣回收法測定。精密稱取已知的樣品，分別精密加入同一量的鹽酸小檗堿對照品，按2.2.2項下方法測定。結(jié)果平均回收率為99.01％（n=6，RSD=1.44％）。

2.8 樣品測定結(jié)果 便血顆粒方顆粒：精密吸取便血顆粒方顆粒溶液，依法測定，計算鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表1。

表1 便血顆粒方顆粒測定結(jié)果

3 小結(jié)

用高效液相色譜法對便血顆粒方中的鹽酸小檗堿進行定量分析，較薄層色譜法操作簡便、精確度高、重現(xiàn)性好。

中藥配方顆粒劑是繼中藥材、中藥飲片、中成藥后的新劑型，目前對制劑質(zhì)量控制上的研究報道較少，筆者認為，本項研究除了對有效成分或指標成分進行量化，還需要其它的定性、檢查等一系列標準，以確保配方顆粒與其飲片的等效性。

［1］趙陸華.高效液相色譜法分析中藥成分手冊［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1994：548-560.

［2］苗明三.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：900-921.