腸病及肺的微生態(tài)學研究

　　摘要：目的：采用微生態(tài)學的研究方法探討“腸病及肺”的機理。方法：建立大鼠便秘模型，觀察其結腸和肺部微生態(tài)變化。結果：便秘模型組的腸道需氧菌、真菌、大腸桿菌較正常對照組顯著增多（P<0.01），而厭氧菌、類桿菌和雙歧桿菌顯著減少（P<0.01）；同時，便秘模型組的肺部需氧菌增多，厭氧菌顯著減少（P<0.05），真菌顯著增多（P<0.01）。結論：肺腸微生態(tài)學上的菌群對應規(guī)律性變化可能是“腸病及肺”的機制之一。
　　關鍵詞：肺與大腸相表里；腸病及肺；便秘；微生態(tài)學
　　中圖分類號：R37文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）03-0054-02
　　“肺與大腸相表里”的理論源于《內經(jīng)》，肺與大腸不僅在生理上相互聯(lián)系，病理上相互影響，治療上也相互為用（肺病治腸、腸病治肺、肺腸合治）。筆者參照文獻［1］方法，建立大鼠便秘模型，并對結腸和肺組織進行微生態(tài)學觀察，研究‘腸病及肺’的生物學機制。
　　1材料與方法
　　1.1實驗動物SPF級Wistar雄性大鼠40只，體重（180±20）g，購自成都達碩生物科技有限公司（動物合格證號：scxk（m）2008-15），標準飼料喂養(yǎng)。
　　1.2藥物及試劑復方地芬諾酯片（DC）（批號：09033001，焦作博愛藥業(yè)）；阿拉伯樹膠粉（進口分裝）（炭粉液的配制：阿拉伯樹膠50g，加水400mL煮沸至溶液透明，稱取活性碳末25g，加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容至500mL，于4℃冰箱保存，臨用前搖勻）。
　　1.3主要儀器及設備ACS-3C型電子天平（廣州）；BL-420F型生物機能實驗系統(tǒng)（成都）；OLYMPUSBX60光學顯微鏡（日本）；OLYMPUSDP70彩色圖文系統(tǒng)（日本）。
　　1.4大鼠便秘模型制作予復方地芬諾酯片灌胃，劑量10mg/kg，1次/日，30min后再灌炭粉指示液，造模后記錄大鼠排出首粒黑便的時間和在6h內排出糞便的粒數(shù)及重量，共1周。
　　1.5肺腸微生態(tài)學檢測收集支氣管肺泡灌洗液進行肺部細菌檢測，支氣管肺泡灌洗液收集方法：大鼠麻醉后，取仰臥位，固定架上固定，打開胸腔，暴露氣管，V型切口切開，插管，用0.02%PBS灌洗肺臟5～6次，收集灌洗液，以1500r/min離心5min，取上清液4℃保存待測。取新鮮的糞便1粒即刻放入制備好的轉移液中，做菌群的培養(yǎng)、計數(shù)和種類鑒別觀察。轉移液的制備及具體檢測程序參照文獻［2］進行。
　　1.6統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)以（Ax-G?！纒）形式表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進行分析，行組間配對t檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　2結果
　　2.1大鼠DC便秘模型的復制實驗觀察發(fā)現(xiàn)，模型大鼠的一般生物學特征為，不同程度出現(xiàn)腹脹狀態(tài)，懶動、少食，倦怠蜷縮，被毛蓬松無澤，活動減少，反應遲緩，體重明顯減輕，攝食量減少。解便次數(shù)減少，排便較對照組困難，糞便的外觀明顯變小，質地干硬，粒數(shù)減少、干濕重量均減輕（P<0.05），表明造模成功，見表1。
　　病理切片[KG-*3]HE染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，正常對照組大鼠結腸黏膜完好，無炎細胞浸潤及潰瘍形成，黏膜上皮完整、連續(xù)，腺體排列規(guī)則，結構清楚；便秘模型組大鼠結腸表現(xiàn)為局部充血、水腫、黏膜輕度糜爛；結腸黏膜上皮欠完整，腺體排列欠規(guī)則，黏膜腺體破壞，殘存的黏膜充血、水腫，黏膜及黏膜下大量炎細胞浸潤。
　　2.2大鼠腸道菌群檢測結果觀察結腸微生態(tài)的變化，結果顯示，便秘模型組的腸道需氧菌、真菌、大腸桿菌較正常對照組顯著增多（P<0.01），而厭氧菌、類桿菌和雙歧桿菌顯著減少（P<0.01）。見表2。
　　2.3大鼠肺部菌群檢測結果便秘模型組的肺部需氧菌增多，但無統(tǒng)計學意義，厭氧菌顯著減少（P<0.05），真菌顯著增多（P<0.01）。見表3。
　　3討論
　　“肺與大腸表里”理論起源于《黃帝內經(jīng)》，《靈樞?本輸》云：“肺合大腸，大腸者，傳導之府”。肺與大腸臟腑相表里，經(jīng)脈相互屬絡。在生理學中，傳統(tǒng)上認為肺是呼吸器官，大腸是消化器官，二者的活動均由神經(jīng)-內分泌系統(tǒng)調節(jié)控制，沒有直接的關聯(lián)。隨著現(xiàn)代研究對肺的非呼吸功能、腸的非消化吸收功能的揭示，二者之間直接聯(lián)系的途徑不斷被發(fā)現(xiàn)，并日益變得復雜。以往的實驗研究，側重于“肺病及腸”［3~4］，對“腸病及肺”研究較少，因而研究“腸病及肺”的生物學機制有重要意義。
　　觀察發(fā)現(xiàn)，便秘模型組的腸道需氧菌、真菌、大腸桿菌較正常對照組顯著增多，而厭氧菌、類桿菌和雙歧桿菌顯著減少；同時，便秘模型組的肺部需氧菌增多，厭氧菌顯著減少，真菌顯著增多。說明便秘模型大鼠在“腸病”的時候，其腸道菌群出現(xiàn)紊亂，同時，這一病理狀態(tài)導致了肺部的微生態(tài)也隨之發(fā)生了變化，各種類型的菌群與正常對照組比較發(fā)生了顯著的改變，引起微生態(tài)失衡。
　　正常菌群定居于機體的特定空間，在數(shù)量上維持一定的比例，其本身不僅對機體無害，而且能通過占位效應、營養(yǎng)競爭、分泌抑菌或殺菌物質等，形成一道生物屏障，抵抗外來或過路的病原微生物的入侵［5］。菌群失調指定居于特定部位的正常菌群的數(shù)量及比例的改變，最常見的為腸道菌群失調，表現(xiàn)為腸道菌群中占絕對優(yōu)勢的革蘭陽性桿菌減少，而革蘭陰性桿菌增多，臨床表現(xiàn)為嚴重腹瀉及腸功能紊亂，濫用抗生素造成腸道菌群失調等，均可使腸道的潛在致病菌移位至口咽部，下行引起下呼吸道感染［6］。
　　微生態(tài)失衡可能導致腸道細菌移位，腸道細菌移位會引起炎癥介質大量釋放。腸道細菌移位是指腸道內活的細菌穿過腸道黏膜層進入固有層，繼而到達腸系膜淋巴結以及更遠處器官［7］。目前認為當機體應激反應過度或失調時，寄生于腸道內的微生物及其毒素，越過腸黏膜屏障，大量侵入正常情況下是無菌的腸道以外的組織，如腸壁漿膜、腸系膜淋巴結、門靜脈以及其他遠處器官，其結果可能引發(fā)腸源性的全身感染，并且觸發(fā)SIRS甚至MODS［8］。Deitch［9］的研究認為，腸道不僅是人體內最大的貯菌所和內毒素庫，而且是觸發(fā)全身炎性介質釋放的啟動器，腸道內細菌或內毒素的移位，和胃腸道相關淋巴組織及其他腸黏膜細胞產(chǎn)生促炎反應釋放大量促炎介質關系密切，它們共同的病理生理學基礎，是腸道的缺血再灌注損傷；腸道缺血再灌注損傷后的直接結果，是損害腸黏膜屏障和激發(fā)腸道促炎反應。通過對便秘模型大鼠的微生態(tài)學研究，筆者認為，肺腸微生態(tài)學上的菌群對應規(guī)律性變化可能是“腸病及肺”的機制之一。
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　　（收稿日期：2010-11-28）