滇丹參中丹酚酸B提取及純化工藝研究

　　摘 要：目的：優(yōu)選滇丹參提取及絮凝沉降法純化丹酚酸B的最佳工藝。方法：以滇丹參主要成分丹酚酸B含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選提取及純化的最佳條件。結(jié)果：滇丹參的最佳提取條件為8倍量水，煎煮2次，每次1 h；采用ZTC11+1為絮凝沉降劑，藥液濃度在1 g/5 mL，絮凝劑的用量是B∶A=4∶2，攪拌速度為100 r/min時(shí)，得到的精制液中丹酚酸B含量最高。結(jié)論：使用絮凝澄清的方法精制水提液，用量少，污染小，丹酚酸B的含量損失較少。
　　關(guān)鍵詞：滇丹參；丹酚酸B；ZTC1+1型絮凝劑
　　中圖分類號(hào)：R284.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349（2011）05-0061-02
　　
　　滇丹參為唇形科鼠尾草屬植物云南鼠尾草（salvia yunnanensis C.H.Wright）的干燥根及根莖，味微苦，性微寒。具有調(diào)經(jīng)、活血、散瘀、鎮(zhèn)靜止痛之功，用于月經(jīng)不調(diào)、風(fēng)濕痹痛、子宮出血、吐血等癥^［1］?，F(xiàn)代藥理作用研究表明，滇丹參具有增加冠狀動(dòng)脈血流量，防止血栓形成，抑制血小板聚集，降低血黏度，消除自由基，改善血管內(nèi)皮功能，抑制血管損傷后的內(nèi)膜增生等功能，在防治冠心病及防治血管成形術(shù)后血管再狹窄中均有重要作用^［2］。滇丹參主要含有脂溶性的丹參酮及水溶性的酚酸類成分，水溶性成分中丹酚酸B的含量較高，為3分子丹酚素與1分子咖啡酸縮合而成。丹酚酸B活性強(qiáng)，具有強(qiáng)烈的清除自由基和抗氧化作用。本文以丹酚酸B的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)滇丹參的提取工藝及絮凝澄清純化工藝進(jìn)行研究。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀（美國(guó)）；FB124型電子分析天平（上海舜字恒平科學(xué)儀器有限公司）；SK250HP型超聲提取器（上?？茖W(xué)儀器有限公司）。
　　1.2 試藥 丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111562-200302）；滇丹參（購(gòu)于云南綠生藥業(yè)有限公司）；ZTC1+1天然澄清劑（購(gòu)于天津正天成澄清技術(shù)有限公司）；乙腈、甲醇為色譜純；水為去離子水；其它試劑均為分析純。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 丹酚酸B含量測(cè)定
　　2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。色譜條件：Agilent-C18色譜柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水體積比（26∶9∶1∶64）為流動(dòng)相；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm；流速：0.8 mL/min；理論塔板數(shù)按丹酚酸B計(jì)不低于2000。
　　2.1.2 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取丹酚酸B對(duì)照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色譜條件下依次進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為Y=895054x-68669，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明丹酚酸B進(jìn)樣量在0.768～2.688 μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。
　　2.1.3 樣品測(cè)定 精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μL進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算含量。
　　2.2 提取工藝研究
　　2.2.1 提取溶劑的選擇 分別稱取40 g（準(zhǔn)確到0.01 g）藥材4份，分別以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇為溶劑，加入8倍量溶劑提取1.5 h，過(guò)濾，濾渣再用6倍量溶劑提取1 h，合并濾液，濃縮并定容到500 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，精密吸取10 μL溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果分別為2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水為溶劑時(shí)，與30%乙醇提取率相差不大，因考慮實(shí)際生產(chǎn)的需要，故以水為提取溶劑。
　　2.2.2 水提工藝正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　2.2.2.1 設(shè)計(jì)方案 以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，以丹酚酸B含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，采用正交表L9（34）安排試驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1。
　　2.2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 稱取藥材9份，每份20 g，按照正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，濾液濃縮并定容到500 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，精密吸取溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。
　　2.2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)直觀分析結(jié)果表明，紫丹參的最佳水提工藝為8倍量水，提取3次，每次1 h，即AB1C3 。由于提取3次和2次的結(jié)果相差不大，為了節(jié)約成本，將工藝定為8倍量水，提取2次，每次1 h，即AB1C。
　　2.3 絮凝澄清純化工藝研究
　　2.3.1 ZTC1+1澄清劑溶液的配制 ①A組分溶液的配制 稱取ZTC1+1Ⅲ澄清劑A組分1 g，先用少量蒸餾水?dāng)嚦珊隣?，然后加蒸餾水至100mL，溶脹24 h，攪勻，雙層紗布濾過(guò)，即得1 %A 組分黏膠液；②B組分溶液的配制 稱取ZTC1+1Ⅲ澄清劑B組分1 g，用少量1 %醋酸溶液溶解并攪成糊狀，然后加1 %醋酸至100 mL，溶脹24 h，攪勻，雙層紗布濾過(guò)，即得1 %B 組分黏膠液。
　　2.3.2 設(shè)計(jì)方案 經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)丹酚酸B在60 ℃時(shí)絮凝效果較好，故以60 ℃為絮凝溫度，采用正交試驗(yàn)對(duì)絮凝澄清工藝的主要工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。選擇藥液濃度、ZTC1+1絮凝劑加入量、攪拌速度3個(gè)主要影響因素進(jìn)行考察，以丹酚酸B含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L9（34）正交表安排試驗(yàn)方案，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表3。
　　2.3.3 實(shí)驗(yàn)方法 按上述最佳提取工藝提取藥材，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)濃縮至不同濃度，分別量取9份濃縮藥液，每份50 mL，在60℃時(shí)，加入4 mL的1%B組分溶液用相應(yīng)的旋轉(zhuǎn)速度攪拌15 min，保溫1 h，攪拌3 min，然后每隔30 min左右攪拌3 min；1 h后，于60 ℃溫度恒溫?cái)嚢柘?，分別加入1%A組分黏膠液攪拌3 min，保溫15 min，離心過(guò)濾，精密量取1 mL定容至100 mL，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，測(cè)定丹酚酸B含量。
　　2.3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見(jiàn)表4~表5。由直觀分析可知，影響絮凝澄清的因素順序?yàn)椋核幰簼饪s比>絮凝劑組分比>攪拌速度，最佳工藝組合為A1B1C。方差分析顯示，藥液濃度對(duì)精制工藝具有顯著性影響。
　　2.3.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 平行取相同量的藥液3份，每份50 mL。按上述確定的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)測(cè)得丹酚酸B含量分別為35.62、35.85、35.77 mg/g，驗(yàn)證結(jié)果與正交試驗(yàn)相符。
　　3 討論
　　由于丹酚酸B在水提液中不穩(wěn)定，提取時(shí)間長(zhǎng)及溫度過(guò)高均會(huì)導(dǎo)致丹酚酸B的含量下降，因此，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需注意丹酚酸B的降解問(wèn)題。
　　純化工藝研究結(jié)果表明，藥液濃縮比為1：5（g/mL）時(shí)，丹酚酸B保留率最高，且隨藥液越稀，丹酚酸B的含量越低。絮凝劑組分比隨著A組分的增加，丹酚酸B的含量隨之降低，所以較佳的絮凝劑組分比例在4/2（B/A）時(shí)，效果最好。
　　ZTC1+ 1Ⅲ型絮凝澄清劑選擇性地與溶液中的膠質(zhì)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)絡(luò)合而共沉，具有安全無(wú)毒、使用簡(jiǎn)便、不影響有效成分等特點(diǎn)，相對(duì)于水提醇沉工藝使用乙醇而言具有提高目標(biāo)含量，減少生產(chǎn)周期，減少成本，且制備的干膏吸濕性低等優(yōu)點(diǎn)。
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　　［1］錢子剛.滇丹參藥用植物源［J］.中藥材，2002，25（9）：628.
　　［2］羅慶祎.滇丹參對(duì)冠心病的防治作用［J］.臨床誤診誤治，2007，20（5）：23.
　　（收稿日期：2011-02-21）