蔞葉提取物的抗氧化與抑菌活性研究

　　摘 要：目的：觀察蔞葉各部分提取物的抗氧化及抗菌實驗效果。方法：采用濾紙片法對6種常見細菌的生長抑制活性進行測定，用DPPH法及連苯三酚紅褪色法進行抗氧化研究。結(jié)果：蔞葉提取物對藤黃球菌、大腸桿菌、普通變形桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、佛氏痢疾桿菌均有抑殺作用；蔞葉提取物均具有抗氧化作用。結(jié)論：蔞葉果實部分乙醇提取物具有更強的抗菌作用；蔞葉葉子部分乙醇提取物具有較強的抗氧化活性。
　　關(guān)鍵詞：蔞葉；抗氧化；抑菌活性
　　中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）05-0057-03
　　
　　蔞葉（Piper betle Linn.）別名蒟醬、青蒟、蘆子、大蘆子、檳榔蒟、檳榔，屬胡椒科胡椒屬植物^［1］。蔞葉在我國古代曾是有名的栽培植物和野生藥用植物，以全株或莖、葉入藥，味辛、微甘，溫。全株及莖葉全年可采為藥用。具有祛風(fēng)散寒，行氣化痰，消腫止癢的功效。主要用于治療風(fēng)寒咳嗽，支氣管哮喘，風(fēng)濕骨痛，胃寒痛，妊娠水腫；外用可治皮膚濕疹，腳癬等皮膚疾病^［2］。因為蔞葉的抗病抗蟲性強，長期咀嚼蔞葉還有護齒作用。研究發(fā)現(xiàn)蔞葉的提取物對老鼠的可逆性節(jié)育有一定作用^［3］。蔞葉中的主要成分是生物堿、木脂素、黃酮類^［4~5］。本文采用DPPH法及連苯三酚紅法對蔞葉提取物進行了抗氧化活性研究，并分別采用蔞葉的多種提取物對多種菌株進行抑菌了實驗，擬觀察蔞葉體外的抗氧化及抑菌效果，為中藥蔞葉的開發(fā)和應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　1 材料與方法
　　1.1 實驗材料
　　1.1.1 材料與試劑 蔞葉（Piper betle Linn.）采自云南保山。標本經(jīng)云南大學(xué)生物系馬紹賓教授鑒定后保存于云南民族大學(xué)生物技術(shù)實驗室。DPPH（1，1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl二苯代苦味肼基自由基），日本東京化成株式會社生產(chǎn)；連苯三酚紅，LEADMAN公司生產(chǎn)；沒食子酸，實驗室自制；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。
　　1.1.2 供試菌種 藤黃球菌（Micrococcus luteus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、普通變形桿菌（Proteus mirabilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、綠膿桿菌（Pseudom onasaeraginosa）、佛氏痢疾桿菌（Valsalva dysentery bacillus）購置于云南大學(xué)微生物實驗室以牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)^［6］備用。
　　1.2 儀器與設(shè)備（只標注主要的） 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)水式真空水泵，河南鞏義市英峪華儀器廠；7200型分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司；恒溫箱，上海實驗儀器廠；手提式壓力蒸汽滅菌鍋，廣州市化南醫(yī)療器械廠；超凈工作臺，蘇州凈化集團安泰設(shè)備公司。
　　1.3 方法
　　1.3.1 蔞葉提取物浸膏的制備 稱取曬干切碎的蔞葉莖、葉和果實各100 g，分別用95%的酒精和70%的丙酮直接回流3 h，重復(fù)4次，餾分用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，蒸干溶劑，得膏狀提取物，稱重。置于小瓶子中保存?zhèn)溆谩?br/>　　1.3.2 蔞葉提取物的抑菌活性研究 取蔞葉的各種提取物0.1 g，各加入1 mL 95%的乙醇使其完全溶解，得濃度為10%的溶液，再依次稀釋為5%、2.5%的濃度梯度。滅菌后放置備用。利用濾紙片瓊脂擴散法^［7~8］對蔞葉提取物進行抑菌活性測定。
　　1.3.3 蔞葉提取物的抗氧化活性研究 取蔞葉各種提取物按質(zhì)量濃度均為1.05 g/L配制成抗氧化劑溶液。按以下方法進行抗氧化活性研究。
　　1.3.3.1 DPPH自由基捕獲分光光度法^［9］ 往10mL 比色管中依次加入4mL pH 6.88 標準磷酸鹽緩沖溶液，4 mL 0.177 7 mmol/L DPPH 溶液，混勻，再加入一定量抗氧劑溶液，蒸餾水補充體積至10mL 刻度，充分混勻，10 min 后在520 nm 處測量吸光度。對DPPH 自由基的清除率的計算
　　KP（%）=［1-（Ai-Aj）/Ac］×100
　　式中：Ai=加抗氧劑反應(yīng)后DPPH 溶液吸光度；Aj=不加DPPH，只加抗氧劑及水的溶液的吸光度；Ac=未加抗氧劑，只加DPPH 及水的溶液的吸光度。
　　1.3.3.2 連苯三酚紅褪色光度法^［9］ 往10mL 具塞比色管中，依次加入2mL pH 9.1 的NaCO3—NaHCO3緩沖溶液，0.7mL 0.003 8 mol/L EDTA-Fe2 + 溶液，3.5mL 0.0001 mol/L連苯三酚紅溶液，0.7mL 體積分數(shù)0.6 % HO溶液，蒸餾水補充至刻度后在25 ℃保溫反應(yīng)30 min（上面每加一次均需搖勻），測544 nm處的吸光度。設(shè)不加HO時的吸光度為A0，加入HO 后的吸光度為Ab，則羥自由基產(chǎn)生量可用ΔA = A0-Ab 來表征。在體系中加HO之前加入一定量的抗氧劑樣品，測定其吸光度As。則抗羥自由基氧化率S的計算
　　SP（%）=（As-Ab）/（A0-Ab）×100
　　2 結(jié)果與分析
　　2.1 蔞葉提取物對6種病原菌的抑菌活性 見表1。
　　注：濾紙直徑為1.0 cm
　　由表1可知，萎葉提取物對藤黃球菌，普通變形桿菌的抑菌效果較明顯，而對綠膿桿菌的抑菌效果相對較差；抑菌效果與濃度呈正相關(guān)系；不同溶劑提取物對各種病原菌的抑菌程度存在差異，乙醇提取物比丙酮提物的抑菌效果好；蔞葉不同部位的抑菌活性不一樣，蔞葉果實部分的抑菌活性相對較強。
　　2.2 蔞葉提取物抗氧化活性測定
　　2.2.1 DPPH自由基捕獲分光光度法研究 按實驗方法加入不同體積的DPPH（質(zhì)量濃度均為1.05 g/L），測出 Ai，Aj，Ac，計算出Ai-Aj 值，據(jù)此再計算出其相應(yīng)的自由基清除率K。結(jié)果見圖1。
　　2.2.2 連苯三酚紅褪色法對羥自由基的研究 按實驗方法加入不同體積的抗氧劑（質(zhì)量濃度均為1.05 g/L，測出 As，Ab，A0，計算出（As–Ab）/（A0–Ab）值，據(jù)此再計算出其相應(yīng)的抗羥自由基氧化率。結(jié)果見圖2。
　　1.蔞葉葉子95%乙醇提取物；2.沒食子酸；3.蔞葉果實95%
　　乙醇提取物；4.蔞葉葉子70%丙酮提取物；5.蔞葉果實70%
　　丙酮提取物；6.蔞葉莖95%乙醇提取物
　　從圖1、2 可知：隨著抗氧劑用量的增加，其捕獲的DPPH自由基和羥自由基也越多，抑制率上升，逐漸達到飽和狀態(tài)。所做的各抗氧化劑樣品捕捉DPPH自由基和羥自由基的能力次序為：蔞葉的葉子提取物>蔞葉果實提取物>蔞葉莖提取物乙醇提取物 >丙酮提取物。
　　蔞葉果實乙醇提取物對DPPH 自由基有很強的清除作用。其IC50比茶葉的抗氧化性略高^［10］。由于身體在生命活動的氧化代謝過程中會不斷產(chǎn)生各種自由基，對人體造成不同程度的損害，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒害作用^［11］，所以研究天然的抗氧化劑已成為必然要求。
　　
　　3 結(jié)論
　　采用DPPH自由基捕獲法和聯(lián)苯三酚紅褪色法對蔞葉的各種提取物進行了抗氧化研究結(jié)果表明蔞葉葉子部分乙醇提取物具有較強的抗氧化活性；采用濾紙片瓊脂擴散法進行抗菌研究，結(jié)果表明蔞葉果實部分乙醇提取物具有更強的抗菌作用。蔞葉物質(zhì)資源豐富，有很大的發(fā)展?jié)摿Γ@對于研究蔞葉提取物在食品及醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用具有重要的意義，有望開發(fā)成為天然防腐劑及藥物。
　　
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