藤茶中二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物制備工藝研究

粱曉嵐，李云耀，何桂霞*，鄒 茜，劉赫男

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

藤茶中二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物制備工藝研究

粱曉嵐，李云耀，何桂霞*，鄒 茜，劉赫男

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的 研究二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合的最佳工藝。方法 運(yùn)用紫外分光光度計(jì)，采用正交實(shí)驗(yàn)法，以包合溫度、包合時(shí)間、β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的比例為考察因素，以二氫楊梅素包合率為指標(biāo)，優(yōu)選包合的最佳工藝。結(jié)果 β-環(huán)糊精包合二氫楊梅素的最佳制備工藝為：包合溫度為70℃ ，包合時(shí)間為60min，β-環(huán)糊精與二氫楊梅素為1∶2.5。結(jié)論 優(yōu)選的β-環(huán)糊精包合工藝簡(jiǎn)單，方便實(shí)用。

藤茶；二氫楊梅素；β-環(huán)糊精包合物；制備工藝；正交實(shí)驗(yàn)；紫外分光光度計(jì)

二氫楊梅素(Dihydromyricetin，簡(jiǎn)稱DMY)為葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶Ampelopsis grossedentala(Hand—Mazz)W.T.Wang中主要化學(xué)成分， 且含量高達(dá)20%多[1-2]。藥理研究表明，二氫楊梅素能對(duì)抗去腎上腺素和高K+所致的兔胸主動(dòng)脈條的收縮反應(yīng)及顯著擴(kuò)血管和鈣阻滯作用，具有消炎、抑菌、止咳、鎮(zhèn)痛、消脂及抗脂質(zhì)過氧化等功效[3-4]。因二氫楊梅素在藤茶中含量高及較明顯的藥用價(jià)值成為近年研究的熱點(diǎn)。由于二氫楊梅素常溫下水溶解性差，生物利用度低，且有多酚羥基結(jié)構(gòu)，對(duì)光線、溶液的pH值及鐵、鋁等金屬離子敏感，易氧化變質(zhì)，使其應(yīng)用受到較大限制[5]。為改善其物理特性，更好地發(fā)揮其功效，采用β-環(huán)糊精（β-CD）包合技術(shù)[6-7]，將二氫楊梅素制成包合物；利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響包合率的諸多因素進(jìn)行考察，從而篩選優(yōu)化得到最佳的包合工藝?，F(xiàn)將方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

K-2501紫外分光檢測(cè)器(北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))有限責(zé)任公司)；FA2104萬(wàn)分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠)；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）。二氫楊梅素(DMY)對(duì)照品為自制，1H-NMR光譜分析鑒定結(jié)構(gòu)，高效液相歸一化方法檢測(cè)，含量在99.0%以上；β-環(huán)糊精 （中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司）；所用化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 包合物中二氫楊梅素的含量測(cè)定

2.1.1 二氫楊梅素對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制 精密稱取真空70℃干燥至恒重的二氫楊梅素對(duì)照品11.5mg，95%乙醇溶解并定容至25 mL，備用。

2.1.2 吸收波長(zhǎng)選擇 分別將二氫楊梅素、β-環(huán)糊精及二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的95%乙醇溶液在190～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描，二氫楊梅素溶液在290 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物與二氫楊梅素的最大吸收波長(zhǎng)一致，而β-環(huán)糊精在此無(wú)吸收，故選擇290 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取二氫楊梅素對(duì)照品儲(chǔ) 備 液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL， 分 別置50 mL量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，搖勻，于290 nm下測(cè)定吸光度，以濃度C為橫坐標(biāo)，吸收度A為縱坐標(biāo)，得回歸方程

2.1.4 精密度試驗(yàn) 按線性范圍分別配制高、中、低3種濃度的二氫楊梅素乙醇溶液，以95%乙醇為空白，于290 nm處分別1 d內(nèi)測(cè)定5次和5 d內(nèi)測(cè)定5次，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算濃度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD為0.42%，日間精密度RDS為0.78%。

2.1.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物2mg，精密稱定，共9份分成3組，置50 mL容量瓶中加95%乙醇溶解并定容，再量取該溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，分別加入0.1、0.2、0.4 mL 二氫楊梅素對(duì)照品儲(chǔ)備液，按“2.1.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，求加樣回收率。平均回收率為97.86%，RSD 為 1.597%(n=9)。

2.1.6 樣品測(cè)定 取二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物2mg，精密稱定，用95%乙醇定容至250 mL，超聲使之溶解，在290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按下式計(jì)算出二氫楊梅素包合率：

2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.2.1 因素及水平 經(jīng)初步試驗(yàn)，選擇β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的比例(A)、包合溫度(B)、包合時(shí)間(C)為考察因素，利用L9(34)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。包合工藝因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2.2 β-環(huán)糊精包合物制備工藝 精密稱取一定量β-環(huán)糊精，加入純化水，超聲使成飽和溶液。另精密稱取一定量二氫楊梅素，用95%乙醇溶解，超聲下將其緩緩滴入β-環(huán)糊精飽和溶液中，超聲處理一定時(shí)間，放冷至室溫，然后放入冰箱中冷藏12 h，抽濾，固體物先用乙醇洗滌，再用純化水洗滌，抽干，于60℃真空干燥10 h，得二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物，稱質(zhì)量。以二氫楊梅素包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳工藝條件。

2.2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果 二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合工藝條件篩選的正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。影響包合的因素排列順序?yàn)锳>C>B,最佳因素水平為A2B2C3，即最佳包合工藝條件為β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的分子比為1∶2.5、包合溫度為60℃、包合時(shí)間為90min，含藥量為32.24%。方差分析表明，β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的分子比對(duì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，而包合時(shí)間和包合溫度對(duì)包合率影響不顯著。見表3。

表2 包合工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 以包合率為指標(biāo)的方差分析

2.3 包合物的鑒定

2.3.1 薄層色譜法 將二氫楊梅素對(duì)照品乙醇溶液、二氫楊梅素對(duì)照品乙醚溶液、二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液、二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醚溶液點(diǎn)于同一硅膠G板上，置展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)中展開，將層析板取出晾干，噴 3%三氯化鐵乙醇溶液顯色，結(jié)果前3個(gè)樣品均在Rf值0.6處出現(xiàn)相同的紫色斑點(diǎn)，而二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醚溶液樣品色譜中未出現(xiàn)與前三者相同的斑點(diǎn)，說明二氫楊梅素被β-環(huán)糊精包合。

2.3.2 紫外光譜法 將二氫楊梅素及二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液在200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果，二氫楊梅素和二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的吸收?qǐng)D譜完全一致，說明包合前后二氫楊梅素未發(fā)生化學(xué)變化，而是通過物理包合作用形成了包合物。

3 討論

近年來β-環(huán)糊精包合物在中藥制劑中的應(yīng)用研究日漸廣泛，β-環(huán)糊精包合物可用于改善難溶性藥物的溶解度，可使液體藥物粉末化與防揮發(fā)，掩蓋藥物不良臭味和降低刺激性，提高藥物的穩(wěn)定性等[8]。目前β-環(huán)糊精包合技術(shù)主要有飽合水溶液法、溶液-攪拌法、研磨法、超聲波等。超聲波是機(jī)械振動(dòng)能量的傳播，可在液體中形成有效的攪動(dòng)與流動(dòng)，破壞介質(zhì)的結(jié)構(gòu)，能達(dá)到普通低頻機(jī)械攪動(dòng)達(dá)不到的效果，超聲波法制備包合物具有時(shí)間短、包合率較高、條件易控制、工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[9-10]。本論文篩選制備二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝，包合率為86.77%，二氫楊梅素的含量為32.24%，制得的包合物為白色無(wú)味的粉末。關(guān)于二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的溶出度、穩(wěn)定性和藥效的觀察有待于進(jìn)一步研究。

[1]周天達(dá)，周雪仙.藤茶中雙氫黃酮醇的分離結(jié)構(gòu)鑒定及藥理活性[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1996，31(8)：458-460.

[2]何桂霞，裴 剛，楊偉麗，等.HPLC測(cè)定藤茶不同采收時(shí)期及不同部位的二氫楊酶素含量[J].中成藥，2004，26(3)：210-212.

[3]周雪仙，周天達(dá).二氫楊梅樹皮素對(duì)兔胸主動(dòng)脈條平滑肌收縮反應(yīng)[J].現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，1997，14(2)：43-45.

[4]鐘正賢，覃潔萍，周桂芬，等.廣西瑤族藤茶中雙氫楊梅樹皮素的藥理研究[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，1998，4(3)：42-44.

[5]何桂霞，裴 剛，李 斌，等.二氫楊梅素的穩(wěn)定性研究[J].中國(guó)新藥雜志，2007，16(22)：1888-1890.

[6]徐 勤，陳 霞，王子嵐.正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選水楊酸β-環(huán)糊精的包合工藝[J].實(shí)用藥物與臨床，2010，13(4)：264-266.

[7]賈金萍，邢 婕，秦雪梅，等.黃芩苷-β-CD包合膠囊的制備和體外溶出度測(cè)定[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)，2009,6(5)：274-276.

[8]趙慧萍，王 浩，盂祥軍.β-環(huán)糊精包合技術(shù)在藥學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的概述[J].沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2009，11(2)：120-121.

[9]翁何霞，王燦嶺.超聲波法制備八角茴香油包合物的工藝考察[J].中國(guó)藥師，2006，9（6）：565-566.

[10]李 超，李躍輝，楊永華，等.丹皮酚β-環(huán)糊精包合物的制備工藝[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（10）：2397-2398.

Preparation of inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin from ampelopsis grossedentala

LIANG Xiao-lan,LI Yun-yao,HE Gui-xia,ZOU Qian,LIU He-nan
(Pharmacy College,TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

ampelopsis grossedentala； dihydromyricetin;complex of β -cyclodextrin；preparation；orthogonal test;UV spectrophotometer

R283.6

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.01.012.043.03

〔Absrract〕Objective To study the optimized process for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin β-cyclodextrin.Methods The orthogonal design and ultraviolet spectrophotometer were used,and the including temperature,including time,the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin were studied,and inclusion ratio were used as optimizing index.Results The optimized preparation conditions of dihydromyricetin-β-cyclodextrin included that the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin was 1:2.5,the inclusion temperature 70℃ and the stirring time 60 min.Conclusion The optimizied process is simple, functional and convenient for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin.

2010-03-12

湖南省教育廳科學(xué)研究資助項(xiàng)目(07C498)；湖南省教育廳中藥學(xué)重點(diǎn)學(xué)科和“十一五”校級(jí)重點(diǎn)學(xué)科中藥化學(xué)與分析的項(xiàng)目資助。

梁曉嵐(1988-)，女，湖南益陽(yáng)人，碩士研究生，從事中藥化學(xué)與制劑工藝研究。

* 何桂霞，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail： heguixia65@yahoo.cn。

（本文編輯 徐愛良）