QuEChERS-氣相色譜檢測(cè)雞腿菇中的有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留

沈丹玉，湯富彬，鐘冬蓮，沈 莉，莫潤(rùn)宏

（1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所，浙江 富陽(yáng) 311400；2.富陽(yáng)市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)測(cè)中心，浙江 富陽(yáng) 311400）

隨著對(duì)食品中農(nóng)藥殘留的重視，國(guó)內(nèi)外加強(qiáng)了食品中的農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)和控制。近年來(lái)，歐盟和日本等地區(qū)與國(guó)家日益增多了農(nóng)藥殘留檢測(cè)指標(biāo)，并逐漸降低農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)[1-2]。有機(jī)磷農(nóng)藥是我國(guó)目前使用量較大的一類農(nóng)藥，因此有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留被當(dāng)做食品農(nóng)藥殘留的首要檢測(cè)目標(biāo)。

食用菌是一類有機(jī)、營(yíng)養(yǎng)、保健的綠色食品，越來(lái)越受消費(fèi)者青睞。而食用菌生產(chǎn)過(guò)程可能會(huì)受到農(nóng)藥污染，因此，食用菌中農(nóng)藥殘留限量（MRL）超標(biāo)問(wèn)題日益受到國(guó)內(nèi)外的重視。雞腿菇是近年來(lái)新培育的、極具開(kāi)發(fā)潛力和應(yīng)用前景的食用菌，含有多種氨基酸、不飽和脂肪酸、各種甾醇和多糖類等營(yíng)養(yǎng)成分[3-5]。雞腿菇的成分非常復(fù)雜，其中的大分子化合物對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析的干擾很大，用常規(guī)的液-液萃取和固相萃取等手段很難將有機(jī)磷農(nóng)藥殘留與大分子分離。并且這些方法前處理步驟復(fù)雜，試劑消耗大，樣品處理時(shí)間長(zhǎng)，大批量樣品檢測(cè)時(shí)效率較低[6-9]。而 QuEchERS（Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged and Safe）方法以其快速、簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)在農(nóng)藥殘留分析中得到了廣泛應(yīng)用[10-15]。尤其是在蔬菜水果樣品中農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方面，雞腿菇中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面的應(yīng)用未見(jiàn)報(bào)道。本研究根據(jù)歐盟、日本等地區(qū)和國(guó)家有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)項(xiàng)目，使用QuEchERS前處理，建立了同時(shí)檢測(cè)雞腿菇中14種農(nóng)藥殘留量的方法，取得了較好的效果。與傳統(tǒng)的方法相比，該方法提高了分析速度，簡(jiǎn)化了操作步驟，節(jié)約了試劑，重現(xiàn)性好且回收率高，較適用于雞腿菇中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 6890N氣相色譜儀配火焰光度檢測(cè)器（GC-FPD）（美國(guó) Agilent）；G2070AA 化學(xué)工作站，7683B自動(dòng)進(jìn)樣器；食品加工機(jī)（德國(guó)博朗）；漩渦振動(dòng)器（德國(guó)IKA）；離心機(jī)（美國(guó)Thermo Biofuge Stratos）；氮吹儀（瑞士 BUCHI）；循環(huán)水式真空泵；電子天平等。

乙腈（色譜純，美國(guó)天地試劑公司），丙酮、氯化鈉、無(wú)水硫酸鎂（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），PSA（乙二胺-N-丙基硅烷孔徑6 nm，粒度45 μm，安捷倫公司），雞腿菇樣品（市售）。

14種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：甲胺磷、甲拌磷、特丁硫磷、久效磷、樂(lè)果、甲基對(duì)硫磷、毒死蜱、馬拉硫磷、倍硫磷、水胺硫磷、殺撲磷、硫環(huán)磷、三唑磷、伏殺磷均為100 μg/mL，購(gòu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 氣相色譜檢測(cè)條件

進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；DB-17毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32mm，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度150℃保持2min，以8℃/min的速度升溫到250℃，并保持 12min；氫氣流速 75 mL/min；空氣流速100 mL/min；尾吹氣為高純氮?dú)?，流?5 mL/min；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量 1.0 μL；定量方法：峰面積外標(biāo)法定量。

1.3 樣品提取

鮮雞腿菇樣品用四分法取樣，于食品加工機(jī)中粉碎成雞腿菇漿，再按下述兩種方法進(jìn)行前處理。

方法1：NY/T 761-2008傳統(tǒng)方法。稱取鮮雞腿菇漿25 g（均精確至0.01g）于100 mL離心管中，加入50 mL乙腈，高速均質(zhì)2min（轉(zhuǎn)速12 000 r/min）后用脫紙棉過(guò)濾，收集濾液放入100 mL裝有6 g氯化鈉的帶塞量筒中，蓋上塞子，劇烈振搖1min后，靜置20min，使乙腈和水相充分分層后，吸取上層乙腈溶液10 mL放入10 mL比色管中，緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)猓舭l(fā)近干，加2 mL丙酮用漩渦振動(dòng)器混勻，上機(jī)測(cè)定。

方法2：QuEChERS快速方法。稱取鮮雞腿菇漿10 g（均精確至0.01g）于50 mL離心管中，加入4 g無(wú)水硫酸鎂、1 g氯化鈉和20 mL乙腈，旋緊蓋子劇烈振搖2min，5 000 r/min離心5min，取上清液5 mL放入10 mL離心管中，加100 mg無(wú)水硫酸鎂、50 mg PSA粉末，再次劇烈振搖2min，5 000 r/min離心5min，取上清液氮吹近干，加1 mL丙酮用漩渦振動(dòng)器混勻，上機(jī)測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在氣相色譜分析中，檢測(cè)實(shí)際樣品農(nóng)藥殘留時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，由于樣品中的雜質(zhì)組份會(huì)與待測(cè)物的分子競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)樣口或柱頭的金屬離子、硅烷基以及不揮發(fā)性物質(zhì)等所形成的活性位點(diǎn)，致使待測(cè)物與活性位點(diǎn)的相互作用機(jī)會(huì)減少，造成相同含量的待測(cè)物在實(shí)際樣品中要比在純?nèi)軇┲许憫?yīng)值高。為消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，本試驗(yàn)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)校正方法對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)償。

用雞腿菇基質(zhì)配制成質(zhì)量濃度分別為0.05，0.10，0.20，0.50，2.00 mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。按色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰高為縱坐標(biāo)，繪制線性方程，農(nóng)藥的線性范圍、相關(guān)系數(shù)和最小檢出量見(jiàn)表1。

表1 14種農(nóng)藥的其線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和最小檢出量

由表1可見(jiàn)，久效磷、殺撲磷、硫環(huán)磷、三唑磷、伏殺磷的線性方程相關(guān)系數(shù)在0.994 48～0.998 85之間，其他9種有機(jī)磷的相關(guān)系數(shù)均在0.999 00以上，表明14種有機(jī)磷濃度在0.05～2.00 mg/L之間具有良好的線性關(guān)系。以在最低添加濃度0.02 mg/kg條件下、信噪比為3時(shí)所能檢測(cè)到的濃度作為方法的檢出限（LOD），得出14種有機(jī)磷的最小檢出限在0.012 5～0.050 0 mg/kg之間。

2.2 不同前處理方法的回收率、精密度比較

在已知不含農(nóng)藥殘留的雞腿菇樣品中，分別添加不同含量（0.4、2、15 μg）的混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)工作液，搖勻靜置1 h，使標(biāo)樣被食用菌充分吸收，按上述兩種方法進(jìn)行提取、凈化和檢測(cè)。使用空白基體萃取液配置標(biāo)準(zhǔn)溶液以補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)，重復(fù)5次，計(jì)算各種農(nóng)藥的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（表2）。

由表2可知，在0.04～1.50 mg/kg的添加水平下，QuEChERS快速法的回收率在 80.28%～116.08%之間，重復(fù)性RSD為1.98%～6.95%。相關(guān)氣相色譜圖比較見(jiàn)圖1。

表2 添加回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

圖1-1 雞腿菇樣品添加14種有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜

圖1-1與圖1－2中的4個(gè)圖分別為添加0.1 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液傳統(tǒng)法提取測(cè)定色譜圖、添加0.1mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液QuEChERS法提取測(cè)定色譜圖、添加0.5mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液傳統(tǒng)法提取測(cè)定色譜圖、添加0.5mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液QuEChERS法提取測(cè)定色譜圖。從圖1中可以看出，傳統(tǒng)法對(duì)樂(lè)果、硫環(huán)磷的提取效果較好，水胺硫磷、殺撲磷的提取效果與QuEChERS快速方法接近，甲胺磷、久效磷提取效率比QuEChERS快速方法略低，而其他7種有機(jī)磷類農(nóng)藥的提取效率偏低。這表明QuEChERS快速測(cè)定明顯優(yōu)于傳統(tǒng)提取方法，可有效地提取雞腿菇樣品中的14種有機(jī)磷農(nóng)藥，大大節(jié)約了使用試劑和提取時(shí)間。

圖1-2 雞腿菇樣品添加14種有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜

逐漸降低添加農(nóng)藥的水平，以檢測(cè)QuEChERS法的回收率，得到各種農(nóng)藥的實(shí)際檢出限。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在0.04～1.50 mg/kg的添加水平下，14種有機(jī)磷農(nóng)藥的平均回收率為80.28%～116.08%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.98%～6.95%之間。這表明QuEChERS法不僅能有效地縮短樣品處理周期，還能保證樣品峰無(wú)雜質(zhì)干擾，回收率也符合殘留分析的要求。

3 結(jié) 論

QuEChERS法是依據(jù)NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》提取方法，并參考大量文獻(xiàn)而建立的能快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)雞腿菇樣品中農(nóng)藥殘留的分析方法。離心分層能大量收集到有機(jī)相，減少試劑揮發(fā)對(duì)測(cè)定濃度的影響，符合農(nóng)藥殘留的要求，檢測(cè)限能滿足相關(guān)的限量要求。同時(shí)，該方法也適用于其他食用菌中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。

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