氣相色譜法測(cè)定復(fù)方爐甘石洗劑中薄荷腦和樟腦含量

劉平，程璐，張鷹，劉倩，胡志強(qiáng)

(1.武漢中聯(lián)集團(tuán)四藥藥業(yè)有限公司，430223;2.武漢市第一醫(yī)院藥劑科，430022)

復(fù)方爐甘石洗劑是武漢市第一醫(yī)院的醫(yī)院制劑(制劑文號(hào):鄂藥制字 H20083012)，由爐甘石、氧化鋅、樟腦、薄荷腦等成分組成，其中含樟腦0.5%、薄荷腦1.0%，主要功效為止癢，消炎，收斂。臨床上用于治療物理性及過(guò)敏性皮膚病、皮膚瘙癢癥等。其中樟腦、薄荷腦能選擇性地刺激人體皮膚或黏膜的冷覺(jué)感受器，引起皮膚黏膜血管收縮，從而產(chǎn)生消炎止癢的作用。樟腦和薄荷腦均為易揮發(fā)成分，含量測(cè)定多用氣相色譜法［1-2］。原標(biāo)準(zhǔn)中采用滴定法對(duì)其中的氧化鋅和爐甘石進(jìn)行含量測(cè)定，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者建立了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定復(fù)方爐甘石洗劑中樟腦和薄荷腦的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀(日本島津GC-14C)，浙江大學(xué)N2000色譜工作站，電子天平(德國(guó) Sartorius ME215S)。

1.2 試藥 樟腦對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào):110747-200507)，薄荷腦對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110728-200506)，萘(中國(guó)藥品生物制品檢定所，內(nèi)標(biāo)物，批號(hào):111673-200602)，復(fù)方爐甘石洗劑(武漢市第一醫(yī)院生產(chǎn)，批號(hào):090520，090611，090624，090819)，環(huán)己烷(色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:島津CBP-M25-025(25 m×0.22 mm，0.25 μm);載氣:氮?dú)?流速:45 mL ·min-1;柱溫:130℃;進(jìn)樣口溫度:180℃;檢測(cè)器溫度:180℃;氫氣:30 mL·min-1;空氣:400 mL·min-1;進(jìn)樣量1μL。樟腦、薄荷腦和內(nèi)標(biāo)物的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取萘適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每毫升中含1 mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 供試品溶液的制備 用內(nèi)容量移液管精密量取本品2 mL，置20 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液適量，超聲使溶解，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取樟腦、薄荷腦對(duì)照品各適量，加內(nèi)標(biāo)溶液制成每毫升含樟腦0.5 mg、薄荷腦1.0 mg的混合溶液，即得。

2.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 照本品處方及生產(chǎn)工藝分別制備缺樟腦、缺薄荷腦以及缺樟腦和薄荷腦的陰性樣品，同“2.3”項(xiàng)下制備法制得空白對(duì)照溶液。按擬定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，空白對(duì)照在樟腦、薄荷腦對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的保留時(shí)間處沒(méi)有出峰，表明樣品中樟腦、薄荷腦峰與其他組分色譜峰達(dá)到分離效果，陰性樣品中色譜峰對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取樟腦對(duì)照品105.3 mg、薄荷腦對(duì)照品202.6 mg，置20 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取該儲(chǔ)備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 分別置10 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，分別吸取1μL注入氣相色譜儀，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，對(duì)照品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得樟腦、薄荷腦回歸方程分別為:Y=1 460.7X+631.5，r=0.999 6(n=6);Y=1 483.6X+201.7，r=0.999 8(n=6)。結(jié)果表明，樟腦、薄荷腦濃度分別在0.26 ～2.63 mg·mL-1及0.51 ～5.06 mg·mL-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 取線性關(guān)系項(xiàng)下的儲(chǔ)備溶液1μL，注入氣相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，以樟腦、薄荷腦與內(nèi)標(biāo)物峰面積比計(jì)算RSD，結(jié)果樟腦RSD為0.59%，薄荷腦RSD為0.71%，結(jié)果表明精密度良好。

圖1 5種溶液的氣相色譜圖A.缺薄荷腦的陰性樣品;B.缺樟腦的陰性樣品;C.缺樟腦和薄荷腦的陰性樣品;D.對(duì)照品;E.樣品;1.樟腦;2.薄荷腦;3.萘(內(nèi)標(biāo)物)

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取復(fù)方爐甘石洗劑(批號(hào):090611)適量，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，在相同色譜條件下分別于0，2，4，6，8 h 測(cè)定，以樟腦、薄荷腦與內(nèi)標(biāo)物峰面積比計(jì)算 RSD，結(jié)果樟腦RSD為0.39%，薄荷腦RSD為0.62%，結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取復(fù)方爐甘石洗劑(批號(hào):090611)，按“2.3”項(xiàng)下制備方法平行制備6份，照供試品測(cè)定方法測(cè)定其含量，結(jié)果樟腦、薄荷腦分別為標(biāo)示含量的 97.8%，98.5%，RSD分別為 1.42%，1.09%，說(shuō)明本法重復(fù)性良好。

2.10 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取樟腦對(duì)照品63.9 mg、薄荷腦對(duì)照品141.3 mg，置20 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取已知含量的供試品(批號(hào):090611)1.0，2.0，3.0 mL各3份，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，2.0，3.0 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果樟腦、薄荷腦的平均回收率分別為99.4%，99.0%;RSD分別為1.14%，1.02%，見(jiàn)表1。

2.11 樣品含量測(cè)定 取批號(hào)分別為090520，090611，090624，090819)的復(fù)方爐甘石洗劑，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備并按擬訂色譜條件測(cè)定并計(jì)算百分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 樟腦和薄荷腦加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品中樟腦和薄荷腦的含量測(cè)定結(jié)果 %

3 討論

［3-6］方法，實(shí)驗(yàn)了10%聚乙二醇-20M的填充柱及島津 CBP-M25-025毛細(xì)管柱(25 m×0.22 mm，0.25μm)。結(jié)果表明，填充柱不能達(dá)到各組分的分離效果，毛細(xì)管柱分離效果良好，且柱效高，保留時(shí)間較短，達(dá)到快速分析的目的。

柱溫是色譜峰分離的一個(gè)重要參數(shù)，直接影響分離效果和分析速度。文獻(xiàn)中測(cè)定樟腦和薄荷腦的含量采用程序升溫的方法［6-7］，筆者在本實(shí)驗(yàn)比較了一系列程序升溫條件，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用程序升溫方法色譜峰的拖尾因子較高，重復(fù)性差，采用130℃恒溫時(shí)可以達(dá)到各色譜峰基線分離，且分離度＞1.5，峰形對(duì)稱，重復(fù)性好。

本實(shí)驗(yàn)分別選用了萘、正辛醇、水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)物，綜合考慮相對(duì)分子質(zhì)量、沸點(diǎn)及出峰情況等因素，最好選定萘為最佳的內(nèi)標(biāo)物，且供試品溶液在萘峰的位置上沒(méi)有出現(xiàn)色譜峰，對(duì)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有干擾。由于該樣品是混懸液，所以應(yīng)振搖均勻后再取樣，避免由于取樣造成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差過(guò)大。

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