黃藤合劑的急性毒性和藥效學(xué)研究

范念斯, 楊軍英, 趙青青

(河南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 省部共建細(xì)胞分化調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河南 新鄉(xiāng) 453007)

黃藤合劑的急性毒性和藥效學(xué)研究

范念斯, 楊軍英, 趙青青

(河南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 省部共建細(xì)胞分化調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 河南 新鄉(xiāng) 453007)

用熱板法和扭體法研究黃藤合劑鎮(zhèn)痛效果，測(cè)定毛細(xì)血管通透性和炎癥組織PGE2含量以研究其抗炎活性及機(jī)理.小鼠灌胃給予黃藤合劑最大給藥量76.8 g/kg后，7天內(nèi)未見(jiàn)明顯異常變化.黃藤合劑8 mg/kg即能明顯提高小鼠對(duì)熱刺激的痛閾值，減少醋酸引起的扭體次數(shù)，降低毛細(xì)血管通透性，減少炎癥組織PGE2的含量.16 g/kg，還能推遲疼痛反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間，延長(zhǎng)潛伏期.黃藤合劑具有鎮(zhèn)痛抗炎作用，最大給藥量為76.8 g/kg，其作用機(jī)理可能與減少PGE2含量有關(guān).

黃藤合劑； 鎮(zhèn)痛； 抗炎

0 引言

黃藤又稱雷公藤、斷腸草、紅藥等，是衛(wèi)茅科雷公藤屬植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook.F.)的根及根莖，性味苦，有大毒[1].其主要成分能夠抑制炎性因子的表達(dá)，具有抑制炎癥反應(yīng)和免疫作用，臨床上用于治療各種自身免疫性疾病，療效顯著[2]，但由于毒副作用較大而限制了其廣泛應(yīng)用.國(guó)外研究黃藤毒性作用的文獻(xiàn)較多，而減毒方面的研究很少.國(guó)內(nèi)研究主要集中于通過(guò)中藥配伍對(duì)抗黃藤的毒副作用[3-4].黃藤合劑是以雷公藤為主藥，輔以當(dāng)歸、紅花等中藥制成的酒劑，臨床用于治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎.為評(píng)價(jià)其安全性和有效性，本文探討其鎮(zhèn)痛抗炎作用和毒性，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，20±2.0 g，由河南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.將小鼠隨機(jī)分組，分別為生理鹽水對(duì)照組(NS組)，阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組，黃藤合劑組.黃藤合劑組的給藥劑量分別為：4 g/kg，8 g/kg，16 g/kg.

1.2藥物與試劑

黃藤合劑：市中醫(yī)院制劑室制備.規(guī)格：250 mL，每10 mL含生藥2.0 g， 47°高粱酒的含量為15%(V/V).藥物在給藥前水浴濃縮，去掉部分水分后，再用47°高粱酒配制成每10 mL含生藥8 g 的濃縮液，4 ℃冰箱保存.給藥前稀釋成所需濃度.阿司匹林腸溶片：陜西白鹿制藥廠生產(chǎn)，25 mg/片.醋酸、角叉菜膠、伊文思藍(lán)、氫氧化鉀、甲醇等.

1.3實(shí)驗(yàn)器材

721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)；800型電動(dòng)離心沉淀器；電熱恒溫水浴鍋；電熱真空干燥箱等.

2 方法與結(jié)果

2.1黃藤合劑的急性毒性實(shí)驗(yàn)

黃藤合劑水浴蒸發(fā)去醇后，45 ℃干燥后加蒸餾水稀釋至最大濃度.取小鼠20只，給藥前禁食14 h.按0.04 mL/g劑量一次性于早晨8：00灌胃給藥.給藥當(dāng)天動(dòng)物精神不振，聳毛、蜷縮，進(jìn)食減少，次日恢復(fù)正常.給藥后觀察7 d，小鼠進(jìn)食、大、小便、呼吸、體重等均無(wú)明顯異常變化，無(wú)一死亡.計(jì)算小鼠的最大給藥量為76.8 g/kg，相當(dāng)于60 kg體重成人每日用量的400倍.在小鼠灌胃給予最大體積最大濃度藥物的情況下，未出現(xiàn)動(dòng)物死亡，推測(cè)該藥可能測(cè)不出半數(shù)致死量(LD50).

2.2熱板法

取雌鼠50只，篩選出舔后足時(shí)間在 5～30 sec之間且不跳躍的小鼠作為合格鼠.灌胃給藥，每天一次，連續(xù)6 d,末次給藥后，于55± 0.5 ℃測(cè)定其痛閾值.結(jié)果表明，黃藤合劑8 g/kg 和16 g/kg分別能提高小鼠60 min 和30 min痛閾值，與正常組相比有顯著性差異.

表1 黃藤合劑對(duì)小鼠熱刺激的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.3扭體法

取小鼠50只，雌雄各半.末次給藥后45 min，腹腔注射0.8%的醋酸0.01 mL/g.記錄扭體反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間和20 min內(nèi)的扭體次數(shù).黃藤合劑8 g/kg和16 g/kg能減少小鼠的扭體次數(shù)，且黃藤合劑16 g/kg還可以延長(zhǎng)潛伏期，抑制疼痛反應(yīng)的出現(xiàn)，與正常組相比有顯著性差異.

表2 黃藤合劑對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.4對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫的影響

取小鼠50只，雌雄各半.末次給藥后45 min，給每只小鼠左后足皮下注射1%的角叉菜膠20 mg/kg，4 h后處死，沿踝關(guān)節(jié)剪下雙足，精密稱重，求腫脹度.將左足剪碎在2 mL生理鹽水溶液中浸泡1 h后，3 000 rpm離心15 min，取上清液400 μL，再加入KOH-CH3OH溶液于50 ℃水浴中異構(gòu)化20 min，測(cè)定278 nm處OD值.炎性介質(zhì)PGE2用堿水處理易脫水，異構(gòu)化后變?yōu)镻GB1，PGB1的紫外吸收波長(zhǎng)為278 nm.通過(guò)測(cè)定PGB1的OD值可間接測(cè)得PGE2的含量.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃藤合劑8 g/kg和16 g/kg能抑制角叉菜膠引起的足腫脹，16 g/kg能明顯減少PGE2含量，與生理鹽水組相比有顯著性差異.

表3 黃藤合劑對(duì)角叉菜膠引起小鼠足腫脹和PGE2含量的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.5對(duì)毛細(xì)血管通透性的影響

取小鼠50只，雌雄各半.末次給藥45 min后，每只小鼠尾靜脈注射伊文思藍(lán)0.01 mL/g，20 min后處死小鼠，抽取腹腔液，取其上清液于590 nm處測(cè)OD值.伊文思藍(lán)靜脈注射時(shí)可以和血漿蛋白瞬間結(jié)合，通過(guò)比色法測(cè)得OD值來(lái)衡量腹腔滲出液的染料量以間接反映炎性滲出的多少.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃藤合劑8 kg/g和16 g/kg均能明顯降低毛細(xì)血管通透性，與NS組相比有顯著性差異.

表4 黃藤合劑對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

3 討論

雷公藤主要含有生物堿類、二萜類、三萜類、倍半萜及糖類成分[5]，其主要毒性物質(zhì)是二萜類和生物堿[6].大量藥理及臨床研究已證明其提取物和某些成份具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用[5]，其中雷公藤內(nèi)脂和雷公藤多甙能抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎組織IL-1和NO的生成[7-9].

本研究采用小鼠扭體法和熱板法兩種疼痛模型，觀察到黃藤合劑能明顯減少醋酸刺激所致扭體反應(yīng)次數(shù)；顯著提高小鼠由熱刺激所致疼痛的痛閾值.小鼠熱板法在測(cè)定麻醉性鎮(zhèn)痛藥時(shí)較為常用，舔足底動(dòng)作可能和高級(jí)中樞有關(guān)，提示黃藤合劑鎮(zhèn)痛部位可能在中樞.此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃藤合劑能抑制角叉菜膠引起的足腫脹，減少PGE2的含量，還能降低毛細(xì)血管通透性，減輕炎性癥狀.

為了消除乙醇對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，我們?cè)诩毙远拘詫?shí)驗(yàn)時(shí)采取了水浴去醇，只反映藥物對(duì)動(dòng)物的毒性.研究發(fā)現(xiàn)黃藤合劑灌胃給藥至76.8 g/kg時(shí)小鼠還未出現(xiàn)毒性死亡，大于臨床給藥量的100倍.而以單味黃藤制備的黃藤酊其LD50是9.646 g/kg.因此，黃藤合劑具有療效確切，毒副作用小，安全范圍大的優(yōu)點(diǎn)，適于臨床應(yīng)用，其毒性小可能與合理配伍有關(guān).

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[2] 胡南，呂曉雅，饒宗建．雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)MRL/lpr狼瘡鼠血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平的影響[J]．中外醫(yī)療，2010，29(18)：5-8．

[3] 施棟磊，朱華旭，潘林梅．中藥配伍雷公藤減毒作用的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)藥事，2009，23(11)：1136-1140．

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[5] 吳寬裕，劉宏，鄭春姑．雷公藤藥物屬性及其臨床應(yīng)用問(wèn)題[J]．中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2009，6(33)：28-29．

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[8] 楊琴，楊桂枝，王蕾，等．雷公藤多甙對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的作用[J]．四川解剖學(xué)雜志， 2006，14(1)11-12．

[9] 韋登明，焦效蘭，孟丹，等．雷公藤內(nèi)酯醇抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎組織NO生成的實(shí)驗(yàn)研究[J]．浙江中醫(yī)雜志，2007，42(11)：661-663．

EffectsonAcuteToxicity，AnalgesiaandAnti-inflammatoryofHuangtengVinuminMice

FAN Nian-si, YANG Jun-ying, ZHAO Qing-qing

(KeyLaboratoryforCellDifferentiationRegulation,CollegeofLifeSciences,HenanNormalUniversity,Xinxiang453007,China)

Pain threshold and reaction were used to detect analgesic effect; blood capillary permeability and the content of PGE2in inflammatory tissue were used to study anti-inflammatory effect.The maximum dose of administratior without toxicity was 76.8 g/kg, 100 folds greater than that of adult of 60 kg body weight.Huangteng Vinum could obviously relieved the pain reaction induced by thermal stimulus as well as HAc in mice.It also could inhibit the swelling of foot and reduce the content of PGE2induced by carrageenan, and inhibit blood capillary permeability.Huangteng Vinum was safe administrated per o.s., and it possess analgesic and anti-inflammatory effect, which may relate to reduction of the content of PGE2.

Huangteng Vinum； analgesic； anti-inflammatory

R 962； Q 946.887

A

1671-6841(2011)03-0121-04

2010-10-04

河南師范大學(xué)科研啟動(dòng)項(xiàng)目，編號(hào)0714；河南師范大學(xué)青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目，編號(hào)525195.

范念斯(1990-)，女，本科，E-mail：fanyuling001@sina.com;通訊作者：楊軍英(1971-)，女，副教授，主要從事藥物活性研究.