鹽酸普魯卡因注射液穩(wěn)定性考察

尤本明，宋洪杰

(第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，上海 200433)

鹽酸普魯卡因注射液穩(wěn)定性考察

尤本明，宋洪杰

(第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院藥學(xué)部，上海 200433)

目的考察溫度和濕度對(duì)普魯卡因注射液的穩(wěn)定性影響。方法取3批供試品，在溫度(40±2) ℃、相對(duì)濕度(75±5)% 的條件下，分別取放置0、2、4、6個(gè)月的樣品。用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因和其降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸的含量。結(jié)果普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因的含量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降，6個(gè)月下降了10.42%，降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，6個(gè)月增加了412.89%。結(jié)論普魯卡因注射液在溫度(40±2) ℃和相對(duì)濕度(75±5)%條件下不穩(wěn)定。

鹽酸普魯卡因注射液；穩(wěn)定性；對(duì)氨基苯甲酸；高效液相色譜法

普魯卡因注射液臨床廣泛適用于浸潤(rùn)麻醉、外周神經(jīng)(叢)阻滯，能阻斷神經(jīng)纖維傳導(dǎo)，具有麻醉作用，用于局部麻醉。鹽酸普魯卡因易受外界因素如溫度、濕度等因素的影響，產(chǎn)生降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸。筆者動(dòng)態(tài)測(cè)定鹽酸普魯卡因和降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸的含量變化情況，來考察溫度和濕度對(duì)1%普魯卡因注射液穩(wěn)定性的影響。

1 材料和儀器

1．1材料 普魯卡因注射液(第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院自制，規(guī)格10 ml /支，每100 ml 中含有鹽酸普魯卡因1.0 g，批號(hào)為090902、090904、090908)；鹽酸普魯卡因(含量99.5%，遼源市百康藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)090502)；對(duì)氨基苯甲酸(含量99.5%，上海五聯(lián)化工廠，批號(hào)870828)； 氫溴酸加蘭他敏(含量98.0%，浙江康恩貝制藥股份有限公司)；SDS(含量99.0%，美國(guó)Amresco.lnc公司)；乙腈(色譜純，美國(guó)TEDIA公司)；雙蒸水(本院制劑室提供)；磷酸、磷酸二氫鉀等其他試劑均為分析純。

1．2儀器 LC-10A vp高效液相色譜儀(日本島津制作所，包括LC-10ATvp泵、SPD-10Avp紫外檢測(cè)器、CLASS vp色譜工作站和SCL-10Avp系統(tǒng)控制器)；調(diào)溫調(diào)濕箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司，302A型)；FA-2004電子天平(萬分之一，上海天平儀器廠)；電子天平(十萬分之一，Sartorius)；精密酸度計(jì)(上海天達(dá)儀器有限公司)。

2 方法和結(jié)果

2．1取3批樣品(批號(hào)分別為090902、090904、090908)置于調(diào)溫調(diào)濕箱中。參數(shù)設(shè)定為溫度(40±2) ℃，相對(duì)濕度(75±5)%，分別測(cè)定鹽酸普魯卡因和降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸在0月份、2月份、4月份和6月份時(shí)的含量。

2．2溶液的制備

2．2．1內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱取氫溴酸加蘭他敏2 mg，置于50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，配成40 μg/ml氫溴酸加蘭他敏溶液。

2．2．2對(duì)照品溶液的配制 精密稱取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?0 mg，對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品4 mg，分別置于100 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，配成含100 μg/ml鹽酸普魯卡因和40 μg/ml對(duì)氨基苯甲酸的對(duì)照品貯備液。

2．2．3供試品溶液的配制 精密量取1%普魯卡因注射液0.1 ml，置于100 ml量瓶中，用水稀釋至刻度。精密量取稀釋液2.0 ml和內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml，混勻即得供試品溶液。

2．2．4陰性樣品溶液的制備 除鹽酸普魯卡因外，其他原料按處方比例配制，按制劑工藝制備陰性樣品溶液。

2．3色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱為Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特科學(xué)儀器有限公司)；流動(dòng)相為乙腈 0.05 mol/L-磷酸二氫鉀溶液(內(nèi)含3 μmol/LSDS，用磷酸調(diào)pH 至2.5)45:55，以氫溴酸加蘭他敏為內(nèi)標(biāo)，流速為1.0 ml/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm，進(jìn)樣量為20 μl，柱溫為室溫[1, 2]。

取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣，得到色譜圖(見圖1)。由圖1可見，降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸、內(nèi)標(biāo)氫溴酸加蘭他敏和鹽酸普魯卡因的保留時(shí)間分別為2.168、4.193和5.849 min，陰性對(duì)照不干擾測(cè)定。

圖1 1%普魯卡因注射液的色譜圖

2．4標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別取兩種對(duì)照品貯備液適量，用水稀釋，配成系列濃度的對(duì)照品混合溶液。鹽酸普魯卡因濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 μg/ml ，對(duì)氨基苯甲酸濃度分別為0.025、0.05、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5 μg/ml。精密量取各濃度對(duì)照品溶液2.0 ml和內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml，混勻即得對(duì)照品溶液。按“2．3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積。以濃度(C)為橫坐標(biāo)，對(duì)氨基苯甲酸或鹽酸普魯卡因峰面積與氫溴酸加蘭他敏峰面積比值(y)為縱坐標(biāo)，求回歸方程。對(duì)氨基苯甲酸濃度在0．025～1.5 μg/ml范圍內(nèi)，回歸方程為y=4.863C+0.018(n=7，r=0.999 8)；鹽酸普魯卡因濃度在0.5～30 μg/ml范圍內(nèi)，回歸方程為y=2.290 7C+0.036(n=7，r=0.999 9)。

2．5加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取已知含量的鹽酸普魯卡因液適量，分別加入含鹽酸普魯卡因(3.325 0、6.650 0、13.30 μg/ml)和對(duì)氨基苯甲酸(0.037 5、0.075 0、0.150 0 μg/ml)的低、中、高混合對(duì)照品適量，按供試品溶液的配制方法操作，進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果鹽酸普魯卡因的平均加樣回收率為(100.06±1.51)%、(101.66±0.31)%、(100.99±0.32)%(n=3)，對(duì)氨基苯甲酸的平均加樣回收率為(100.53±1.67)%、(100.71±1.09)%、(101.64±1.50)%(n=3)。

2．6精密度實(shí)驗(yàn) 分別吸取鹽酸普魯卡因和對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品貯備液適量，配成3組內(nèi)含鹽酸普魯卡因和對(duì)氨基苯甲酸濃度分別為1.0和0.05 μg/ml、10.0和0.5 μg/ml 、20.0和1.0 μg/ml的對(duì)照品混合溶液。精密量取上述低、中、高對(duì)照品溶液各2.0 ml，加入內(nèi)標(biāo)溶液0.1 ml，混勻后按2．3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每組濃度重復(fù)測(cè)定3次；樣品放置3 d，每天進(jìn)樣1次，記錄峰面積，分別進(jìn)行日內(nèi)精密度和日間精密度考察。日內(nèi)精密度：鹽酸普魯卡因低、中、高濃度的RSD分別為1.60%、1.17%和0.91% (n=3)；對(duì)氨基苯甲酸低、中、高濃度的RSD分別為1.28%、1.46%和0.58% (n=3)。日間精密度：鹽酸普魯卡因低、中、高濃度的RSD分別為1.85%、1.64%和1.18% (n=3)；對(duì)氨基苯甲酸低、中、高濃度的RSD分別為1.60%、1.90%和0.96% (n=3)。

2．7重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取1%普魯卡因注射液(批號(hào)090902)的供試品溶液5份，按“2．2．3”項(xiàng)下操作，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，鹽酸普魯卡因和對(duì)氨基苯甲酸的RSD分別為0.13%和0.72% (n=5)。

2．8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 在供試品溶液配制后的8 h內(nèi)，每隔2 h測(cè)定一次，鹽酸普魯卡因和對(duì)氨基苯甲酸的RSD分別為0.29%和0.88% (n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．9樣品測(cè)定 3個(gè)批號(hào)的1%普魯卡因注射液，分別取放置0、2、4、6個(gè)月的樣品，按“2．2．3”項(xiàng)下操作，進(jìn)樣，代入線性回歸方程，測(cè)定鹽酸普魯卡因和對(duì)氨基苯甲酸的含量，結(jié)果見表1，普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因的含量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降，6個(gè)月下降了10.42%，降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，6個(gè)月增加了412.89%。以鹽酸普魯卡因、對(duì)氨基苯甲酸含量以及二者的比值對(duì)時(shí)間作圖，如圖2所示。可見對(duì)氨基苯甲酸的含量隨時(shí)間變化曾明顯增加，而鹽酸普魯卡因隨時(shí)間變化含量降低較為明顯，同時(shí)二者的比值隨時(shí)間增加顯著增加。

表1 鹽酸普魯卡因注射液穩(wěn)定性考察結(jié)果

注：存放條件為溫度(40±2)℃，相對(duì)濕度 (75±5)%

圖2 鹽酸普魯卡因、對(duì)氨基苯甲酸含量以及二者的比值隨時(shí)間的變化趨勢(shì)圖

3 討論

本實(shí)驗(yàn)建立了普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因和降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸的含量的測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)SDS和乙腈在流動(dòng)相中的比例是影響鹽酸普魯卡因出峰時(shí)間的主要因素。特別是SDS影響較顯著，在無SDS條件下，乙腈-緩沖鹽比例為45:55時(shí)，二者同在2.1 min出峰，峰不能分離，增加緩沖鹽至80%時(shí)，對(duì)氨基苯甲酸保留時(shí)間為3.1 min，鹽酸普魯卡因保留時(shí)間為3.6 min，但峰形較差；當(dāng)緩沖鹽中加入3 μmol/L的SDS時(shí)，在乙腈-緩沖鹽比例為45:55條件下，對(duì)氨基苯甲酸保留時(shí)間為2.1 min，鹽酸普魯卡因?yàn)?.8 min，增加緩沖鹽至65%時(shí)，對(duì)氨基苯甲酸保留時(shí)間為3.1 min，而鹽酸普魯卡因則增至13.8 min。實(shí)驗(yàn)還考察緩沖鹽pH對(duì)各組分保留時(shí)間影響，無明顯變化。在波長(zhǎng)的考慮上兼顧對(duì)氨基苯甲酸和鹽酸普魯卡因的測(cè)定需要，選用283 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

彭賢東和唐志立[3]曾報(bào)道室溫留樣條件下鹽酸普魯卡因注射液放置1 年含量為97. 46 %，放置2 年為91. 63 %。在本實(shí)驗(yàn)中，鹽酸普魯卡因在6個(gè)月時(shí)間內(nèi)業(yè)已下降了10.42%，考慮溫度可能是影響鹽酸普魯卡因注射液穩(wěn)定性的主要因素之一。關(guān)于降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸的含量變化情況未見報(bào)道，而2010版《中國(guó)藥典》對(duì)鹽酸普魯卡因注射液檢查項(xiàng)下對(duì)此有明確要求[4]。精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每1 ml中含鹽酸普魯卡因0. 2 mg的溶液，作為供試品溶液；取對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，精密稱定，加水溶解并定量制成每1 ml中含2.4 μg的溶液，作為為對(duì)照品溶液。照液相色譜法測(cè)定，供試品溶液色譜圖中如有與對(duì)氨基苯甲酸保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法計(jì)算，不得過標(biāo)示量的1.2%。在6個(gè)月時(shí)間內(nèi)其降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸和鹽酸普魯卡因所占比從開始0.41%增加到2.32%，增加了465.85%，詳見表一。4個(gè)月樣品其對(duì)氨基苯甲酸和鹽酸普魯卡因含量的比值已經(jīng)超過1.2%。0月時(shí)的樣品中降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸與鹽酸普魯卡因比值為0.40%，說明1%普魯卡因注射液在配制過程中鹽酸普魯卡因業(yè)已有降解，這主要是由于鹽酸普魯卡因的分子結(jié)構(gòu)中含有酯鍵，在溶液狀態(tài)下容易水解的緣故。雖然鹽酸普魯卡因在血漿中大部分被水解成對(duì)氨基苯甲酸，但制劑中降解產(chǎn)生的對(duì)氨基苯甲酸對(duì)臨床應(yīng)用是利是弊，尚待進(jìn)一步研究。

[1] 葉 卿，宋洪杰，石力夫. 用RP-HPLC法測(cè)定心肌保護(hù)液中鹽酸普魯卡因及其降解產(chǎn)物對(duì)氨基苯甲酸的含量[J]. 藥學(xué)服務(wù)與研究， 2009，9(1)：40.

[2] 祝清蘭，李方實(shí).普魯卡因分析方法的研究進(jìn)展[J]. 華西藥學(xué)雜志，2004 ，19(1) ：51.

[3] 彭賢東，唐志立. 鹽酸普魯卡因注射液的穩(wěn)定性考察[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2005，21(12)：1500.

[4] 中國(guó)藥典2010 年版.二部[S] .2010：794.

2010-07-22

[修回日期]2010-12-15

Investigationonstabilityofprocainehydrochlorideinjection

YOU Ben-ming, SONG Hong-jie

( Department of Pharmacy, Changhai Hospital ,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

ObjectiveTo investigate the effect of temperature and humidity on the stability of procaine hydrochloride injection.MethodsThree batches of the test samples were stored in condition of 40±2 centigrade, relative humidity 75%±5% for 0 month,2 months, 4 months and 6 months respectively. Contents of procaine hydrochloride and its degradation product p-amino benzoic acid were determined in procaine hydrochloride injection by RP-HPLC.ResultsThe content of procaine hydrochloride injection gradually decreased by 10% in 6 months, degradation products p-amino benzoic acid gradually increased by 412.89% in 6 months.ConclusionProcaine hydrochloride injection was instability in 40±2 centigrade and 75%±5% relative humidity condition.

procaine hydrochloride injection；stability；P-Amino benzoic acid；HPLC

尤本明(1982-)，男，藥師. Tel:(021)81873724.

宋洪杰.E-mail:hjsong123@yahoo.com.cn.

R971+.2;R94

A

1006-0111(2011)02-0125-03