HPLC-TOFMS法快速分離與鑒別丹香冠心注射液中的化學(xué)成分

欒曉琳，張 海，王 慧，陳 俊，張國(guó)慶

(第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 200438)

HPLC-TOFMS法快速分離與鑒別丹香冠心注射液中的化學(xué)成分

欒曉琳，張 海，王 慧，陳 俊，張國(guó)慶

(第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 200438)

目的采用HPLC-TOFMS對(duì)丹香冠心注射液中化學(xué)成分進(jìn)行快速分離與鑒別。方法色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(3.0 mm × 100 mm, 3.5 μm)，以0.5 %醋酸(A)-乙腈(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫(v/v)，0～25 min, 2%～33% B; 25～30 min, 33%～95% B，進(jìn)樣量5 μl，流速0.5 ml/min，柱溫為30 ℃，飛行時(shí)間質(zhì)譜配有ESI離子源，質(zhì)量數(shù)掃描范圍m/z 100～1 000。結(jié)果采用HPLC-TOFMS方法對(duì)丹香冠心注射液制液進(jìn)行了在線化學(xué)成分分離，共鑒別出丹香冠心注射液中31個(gè)化學(xué)成分。結(jié)論采用HPLC-TOFMS方法對(duì)丹香冠心注射液的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析鑒別，可為中藥丹香冠心注射液的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)。

丹香冠心注射液；HPLC-TOFMS；鑒別

丹香冠心注射液是由丹參和降香兩味藥材組成的中藥注射液，具有活血化瘀，理氣止痛等功效[1～4]。丹香冠心注射液中所含的化學(xué)成分復(fù)雜，其中主要含有丹參的水溶性成分和降香揮發(fā)油成分[5]。目前發(fā)現(xiàn)的主要水溶性成分有丹參素、原兒茶醛、原兒茶酸、丹酚酸B等，具有抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多種藥理活性[6～8]。降香揮發(fā)油具有增加冠脈流量，減慢心率，抗氧化等作用，為有效的活性成分[9,10]。目前尚未見(jiàn)對(duì)丹香冠心注射液進(jìn)行化學(xué)成分分析鑒別的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究采用HPLC-TOFMS聯(lián)用技術(shù)，對(duì)丹香冠心注射液中各化學(xué)成分進(jìn)行分析鑒別，為進(jìn)行注射液的化學(xué)成分代謝和作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1儀器與試劑 安捷倫1200系列高效液相色譜儀，包括在線脫氣機(jī)，二元泵，高性能自動(dòng)進(jìn)樣器；安捷倫6220高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜儀， 配有標(biāo)準(zhǔn)電噴霧離子源(ESI)，Masshunter工作站及Agilent Qualitative analysis質(zhì)譜分析軟件(以上均為美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品)。DL700超高壓等靜壓機(jī)(上海大隆機(jī)器廠)；KUDOS SK2200H型超聲器(上?？茖?dǎo)超聲儀器公司)；METYLER AE240型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

丹香冠心注射液(上海中西制藥有限公司，批號(hào)：0910095)。乙腈(Burdick & Jackson，USA)和醋酸(美國(guó)Tedia公司)均為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為二次純凈水。其他的試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1色譜條件 色譜柱為Zorbax SB-C18柱(3.0 mm×100 mm, 3.5 μm)。以0.5 %醋酸(A)-乙腈(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫(v/v)，0～25 min, 2%～33% B; 25～30 min, 33%～95% B 柱平衡時(shí)間：8 min；進(jìn)樣量：5 μl；流速0.5 ml/min；柱溫30 ℃。

1.2.2HPLC-TOFMS質(zhì)譜條件 采用ESI 源，負(fù)離子模式下：毛細(xì)管電壓3 500 V, 霧化氣壓力35 psig, 干燥氣流速10 L/min, 干燥氣溫度350 ℃, 碎片電壓215 V；參比離子m/z 121.050 873 和922.009 798。質(zhì)量數(shù)掃描范圍m/z 100～ 1 000，分流比1:1。

1.2.3丹香冠心注射液樣品溶液的制備 精密吸取丹香冠心注射液1 ml，加75 %甲醇稀釋并定容至10 ml，搖勻,經(jīng)0.22 m的微孔濾膜濾過(guò)后，即得樣品溶液。

1.2.4丹香冠心注射液化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)的建立 根據(jù)丹香冠心注射液中已報(bào)道化學(xué)成分的研究文獻(xiàn)，收集了丹香冠心注射液中化學(xué)成分信息，建立相應(yīng)的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)。

2 結(jié)果

將丹香冠心注射液樣品溶液進(jìn)樣分析，采集HPLC-TOFMS總離子流圖，如圖1所示。從質(zhì)譜總離子流圖中搜索出31個(gè)色譜峰的分子量與已知化合物的數(shù)據(jù)庫(kù)相符，大部分化合物在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜圖顯示[M-H]-，少數(shù)成分在負(fù)離子模式下顯示[M+CH3COO]-。采集HPLC-TOFMS總離子流圖，結(jié)果共鑒別出丹香冠心注射液中31個(gè)成分，結(jié)果如表1所示。

圖1丹香冠心注射液樣品溶液的HPLC-TOFMS總離子流圖

表1 丹香冠心注射液中各化學(xué)成分的HPLC-TOFMS分析結(jié)果

3 討論

3.1流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)中分別比較了甲醇-水和乙腈-水系統(tǒng)，由于采用甲醇-水體系時(shí)，基線不穩(wěn)定，干擾較大，故選擇乙腈-水體系。加入適量醋酸調(diào)節(jié)pH，抑制了組分的離解，增強(qiáng)了化學(xué)成分的保留。將溶劑調(diào)節(jié)到最佳的分配系數(shù)，使丹香冠心注射液中各成分有效地分離，結(jié)合各因素確定適宜的流動(dòng)相組成為乙腈-0.5%醋酸。

3.2鑒別結(jié)果 根據(jù)飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)得的精確分子量，應(yīng)用Qualitative Analysis質(zhì)譜分析軟件計(jì)算可能的分子組成(誤差<5 ppm)，結(jié)合自建的丹香冠心注射液化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)，將理論值與實(shí)測(cè)值進(jìn)行比對(duì)，對(duì)丹香冠心注射液進(jìn)行HPLC分離的30余個(gè)主要色譜峰進(jìn)行分析，確定了31個(gè)成分的分子組成。

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2010-08-06

[修回日期] 2010-10-08

RapidseparationandidentificationofchemicalcomponentsinDanxiangguanxininjectionbyHPLC-TOFMS

LUAN Xiao-lin, ZHANG Hai, WANG Hui, CHEN Jun, ZHANG Guo-qing

(Department of Pharmacy, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438,China)

ObjectiveTo separate and identify the components in Danxiangguanxin injection by high performance liquid chromatography time-of-flight mass spectrometry (HPLC-TOFMS).MethodsAgilent Zorbax SB-Cl8column (3.0 mm×100 mm, 3.5 μm) was used for separation and identification of chemical components in Danxiangguanxin injection with a mobile phase of 0.5 % acetic acid (A) and acetonitrile (B) in gradient elution. 0～25 min, 2%～33% B; 25～30 min, 33%～95% B; the flowing rate was 0.5 ml/min and the injection volume was 5 μl. And the time-of-flight mass spectrometer was equipped with an EIS ion source. Scanning mass range was ranged between m/z 100～1000.ResultsThirty-one chemical compounds in Danxiangguanxin injection were identified unequivocally.ConclusionChromatographic demonstration of chemical compounds in Danxiangguanxin injection could provide foundation for the further metabolism and action mechanism study of Danxiangguanxin injection.

Danxiangguanxin injection; HPLC-TOFMS; identification

欒曉琳(1982-)，女，藥師.E-mail：luanxl@hotmail.com.

張國(guó)慶.Tel：(021)81875571,E-mail：zhanggq@smmu.edu.cn.

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A

1006-0111(2011)03-0214-03