運(yùn)用GC-MS技術(shù)對(duì)2種淫羊藿揮發(fā)性成分的比較分析

施啟紅，呂 磊，李 玲，趙 亮，張國(guó)慶

(1.啟東市人民醫(yī)院藥材科，江蘇 啟東 226200；2.第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 200438；3.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院分析測(cè)試中心，上海 200433)

運(yùn)用GC-MS技術(shù)對(duì)2種淫羊藿揮發(fā)性成分的比較分析

施啟紅1，呂 磊2，李 玲3，趙 亮1，張國(guó)慶2

(1.啟東市人民醫(yī)院藥材科，江蘇 啟東 226200；2.第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海 200438；3.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院分析測(cè)試中心，上海 200433)

目的運(yùn)用GC-MS技術(shù)對(duì)柔毛淫羊藿與朝鮮淫羊藿揮發(fā)性成分進(jìn)行比較分析。方法采用水蒸氣蒸餾法提取柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿揮發(fā)油，運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索對(duì)其揮發(fā)油進(jìn)行分離鑒定。結(jié)果共鑒定出2種淫羊藿中76個(gè)揮發(fā)性成分，其中28個(gè)共有成分。結(jié)論柔毛淫羊藿與朝鮮淫羊藿揮發(fā)油在組分和含量上存在一定的差異，本研究為2種淫羊藿藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供了重要依據(jù)。

柔毛淫羊藿；朝鮮淫羊藿；揮發(fā)油；GC-MS

柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿分別為小檗科植物柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.和朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai.的干燥地上部分，是我國(guó)傳統(tǒng)的補(bǔ)益中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在中醫(yī)上常用于補(bǔ)腎陽(yáng)，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕[1，2]。

近年來(lái)對(duì)于兩種淫羊藿的研究報(bào)道以幾個(gè)主要黃酮類成分的含量測(cè)定及指紋圖譜研究居多[3，4]，對(duì)其揮發(fā)性成分分析的報(bào)道較少。對(duì)于單個(gè)淫羊藿揮發(fā)油研究的報(bào)道[5～8]，由于實(shí)驗(yàn)條件不同，結(jié)果各異。為能從整體上把握不同種淫羊藿藥材揮發(fā)性成分的差異，現(xiàn)用統(tǒng)一的分析條件對(duì)2個(gè)品種淫羊藿揮發(fā)油成分進(jìn)行比較分析，找出差異。本實(shí)驗(yàn)采用了水蒸氣蒸餾法提取柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿的揮發(fā)油，采用GC-MS首次對(duì)其進(jìn)行了比較分析，為兩種淫羊藿藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供了重要依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Thermo Trace GC Ultra氣相色譜儀(美國(guó)賽默飛世爾公司)，Thermo DSQⅡ質(zhì)譜儀，Xcalibur工作站。揮發(fā)油測(cè)定器(上海華連醫(yī)療器械有限公司)； METTLER AE240型電子天平(德國(guó)梅特勒公司)； LX-02藥材粉碎機(jī)(上海利祥公司)。

1.2試藥 原藥材柔毛淫羊藿產(chǎn)自湖北，購(gòu)自上海德康大藥房，批號(hào)20101121、20101215和20110104；朝鮮淫羊藿于產(chǎn)自東北，購(gòu)自遼寧沈陽(yáng)，批號(hào)20101209、20110129和20110217。經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室黃寶康教授鑒定分別為小檗科植物柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.和朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai.的干燥地上部分。所用試劑乙醚為分析純，水為重蒸水，載氣為高純氦氣。

2 方法與結(jié)果

2.1揮發(fā)油的提取 分別取柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿藥材各100 g，粉碎后置于圓底燒瓶中，加蒸餾水500 ml，按照《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)2010年版附錄“揮發(fā)油測(cè)定項(xiàng)”中甲法提取揮發(fā)油，得到淡黃色、味濃香的油狀液體，柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿的出油率分別為為0.13%和0.14%。樣品取10 μl以0.5 ml無(wú)水乙醚溶解 。

2.2氣相條件 色譜柱TR-5MS(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，分流比10:1，進(jìn)樣口溫度250 ℃，程序升溫(起始溫度40 ℃ ，以20 ℃/min的速率升至150 ℃，然后以5 ℃/min升至220 ℃，再以20 ℃/min升至280 ℃并保持5 min)，傳輸線溫度260 ℃，載氣流速1 ml/min 。

2.3質(zhì)譜條件 電離方式：EI源；電子能量70 eV；離子源溫度200 ℃；質(zhì)量范圍(m/z)：30～450；檢測(cè)器增益1.0×105；溶劑延遲時(shí)間2 min；質(zhì)譜采集時(shí)間28 min。

2.4藥材中揮發(fā)油的GC-MS圖譜 分別取以乙醚溶解的柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿揮發(fā)油，按“2.2”和“2.3”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣1 μl，得到2種淫羊藿揮發(fā)油的總離子流圖，如圖1所示。

圖1 2種淫羊藿揮發(fā)油總離子流圖A?柔毛淫羊藿(批號(hào)20110104)；B?朝鮮淫羊藿(批號(hào)20110129)

2.5兩種淫羊藿藥材中揮發(fā)油成分的GC-MS鑒別結(jié)果 每個(gè)組分的質(zhì)譜圖通過(guò)計(jì)算機(jī)檢索與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)(NIST,WILEY庫(kù))對(duì)照，以匹配度為基礎(chǔ)(SI>800)結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[5～8]進(jìn)行篩選。并以各色譜圖扣除溶劑峰的全部峰面積作為100%，通過(guò)色譜峰面積歸一化法計(jì)算得出各化學(xué)成分的相對(duì)百分含量，比較兩者共有成分的在含量上的差異，共鑒定出76個(gè)化合物，結(jié)果見表1。由表可見，2種淫羊藿的揮發(fā)油含有24個(gè)共有成分，兩者在組分和含量上存在一定的差異。

表1柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿揮發(fā)油成分及其含量的比較(%)

3 討論

3.1實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化 揮發(fā)油提取首先考察了乙醚超聲法，此法操作簡(jiǎn)單，但提取率低，提取物圖譜峰容量少，后采用經(jīng)典的水蒸氣蒸餾法，獲得良好收率。GC條件主要考察了程序升溫的過(guò)程，經(jīng)過(guò)系列優(yōu)化，最后選擇了起始溫度40 ℃，以3個(gè)階段升至280 ℃并保持5 min的過(guò)程，保證了采樣時(shí)間短，峰容量大，分離度好。MS條件主要是對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)范圍的選擇，在查閱相關(guān)文獻(xiàn)并分析了淫羊藿中可能的揮發(fā)性成分后，選擇了30～450(m/z)。

3.2鑒別結(jié)果分析 通過(guò)對(duì)兩種淫羊藿各3個(gè)批次樣品GC-MS分析，總共鑒別出中76個(gè)揮發(fā)油成分，其中柔毛淫羊藿66個(gè)，朝鮮淫羊藿38個(gè)，分別占各自揮發(fā)油總量的95.58%和93.37%。兩者含共有化合物28個(gè)，柔毛淫羊藿中的38個(gè)成分與朝鮮淫羊藿中的10個(gè)成分為各自特有成分。從組分上看，兩者揮發(fā)油中長(zhǎng)鏈脂肪酸、不飽和醇及各種烴類居多。從含量上看，棕櫚酸為2種淫羊藿中共有的含量相對(duì)較高的化合物，分別占揮發(fā)油總量的16.40%和22.03%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5～8]，但其它幾種相對(duì)含量較高的化合物含量存在很大差異，如十四烷酸在朝鮮淫羊藿中的含量為19.31%，而在柔毛淫羊藿中沒有；6,10,14-三甲基-2-十五烷酮在柔毛淫羊藿中的含量為13.96%，而在朝鮮淫羊藿中的含量?jī)H為1.69%；植醇也僅在柔毛淫羊藿中有，含量為16.92%。推測(cè)可能兩種淫羊藿生長(zhǎng)環(huán)境不同而造成的差異。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用GC-MS技術(shù)對(duì)柔毛淫羊藿與朝鮮淫羊藿揮發(fā)油成分進(jìn)行比較分析，雖然兩者揮發(fā)油含有大量共有成分，但在組分和含量上還是存在很大的差異。本研究為兩種淫羊藿藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供了重要依據(jù)，為淫羊藿的進(jìn)一步合理應(yīng)用提供了理論參考。

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2011-06-25

[修回日期]2011-09-01

AnalysisoftheessentialoilfromtwovarietiesofepimediumsbyGC-MS

SHI Qi-hong1, LV Lei2, LI Ling3, ZHAO Liang1, ZHANG Guo-qing2

(1. Department of Pharmacy, People′s Hospital of Qidong, Qidong 200438，China; 2. Department of Pharmacy, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Shanghai 200438, China; 3. Pharmaceutical Analysis Center, School of Pharmacy,the Second Military Medical University of PLA,Shanghai 200433, China)

ObjectiveTo analyze the chemical components of the essential oil fromEpimediumpubescensMaxim.andEpimediumkoreanumNakai. by GC-MS．MethodsThe essential oil was extracted from two epimediums by steam distillation, the chemical components of the essential oi1 were detected by GC-MS, peaks and their corresponding compounds were identified through database index.Results76 chief components from two varieties of epimediums were identified, 24 components were noted in both.ConclusionThere were some differences in composition and content between the two kinds of epimediums. A scientific basis for the further identification and quality control of the two different species of epimediums was offered in this paper.

EpimediumpubescensMaxim；EpimediumkoreanumNakai；essential oil；GC-MS

施啟紅(1973-)，女，主管藥師.Tel:13962828882，E-mail:shiqihong2011@126.com.

張國(guó)慶. Tel:(021)81875571，E-mail:guoqing_zhang91@126.com.

R917

A

1006-0111(2011)06-0445-04