新型三唑醇類化合物的合成及抗真菌活性研究

王曙東，陳興東，趙慶杰，鄒 燕，胡宏崗，俞世沖，汪 亭，柴曉云，任海祥

(1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，江蘇 南京 210002；2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433)

·論著·

新型三唑醇類化合物的合成及抗真菌活性研究

王曙東1，陳興東1，趙慶杰2，鄒 燕2，胡宏崗2，俞世沖2，汪 亭2，柴曉云2，任海祥1

(1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，江蘇 南京 210002；2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433)

目的以氟康唑為先導(dǎo)化合物，設(shè)計合成新的三唑醇類化合物，并研究其抗真菌活性。方法引入較大基團的N,N-二取代側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，合成一系列目標(biāo)化合物，所有化合物結(jié)構(gòu)均經(jīng)MS、1H NMR等譜確證；選擇8種真菌為實驗菌株，測定其體外抗真菌活性。結(jié)果合成了18 個未見文獻(xiàn)報道的目標(biāo)化合物，化合物對所選真菌均表現(xiàn)出了一定的抑菌活性。結(jié)論引入較大基團的N,N-二取代側(cè)鏈結(jié)構(gòu)對抗真菌活性影響較大。

三唑衍生物； 合成；抗真菌活性

1 前言

真菌感染主要分為淺部和深部感染兩類，深部感染嚴(yán)重時可危及人的生命。由于近年來臨床上抗生素、化療藥物、免疫抑制劑的大量使用，以及艾滋病的流傳，使深部真菌感染率急劇上升[1]。但目前氮唑類抗真菌藥物具有肝、腎毒性等缺陷[2]。以及在長期大量使用過程中，耐藥性問題日益突出，因而迫切需要開發(fā)新一代低毒、高效的氮唑類抗真菌藥物。

羊毛甾醇14α-去甲基化酶為真菌中一重要的酶。本研究根據(jù)羊毛甾醇14α-去甲基化酶的活性位點[3]特征，結(jié)合本教研室前期的研究工作[4～7]，以氟康唑為先導(dǎo)化合物，保留基本藥效團三唑環(huán)，叔醇羥基和2,4-二氟苯基，引入酯及各種芐基三唑側(cè)鏈結(jié)構(gòu)。設(shè)計合成了18個目標(biāo)化合物。合成路線見圖1。

2 合成實驗

熔點用YRT-3熔點測定儀(溫度未校正)測定，質(zhì)譜用安捷倫1100型質(zhì)譜儀測定，1H NMR用Bruker spectmspin AC-P300和INNOVA-400型核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))測定，所用試劑均為市售分析純。

2.12-氯-2′,4′-二氟苯乙酮(3)的制備 參照文獻(xiàn)[8]方法合成，收率77.1%。mp 47～48 ℃(文獻(xiàn)[8]：46.5℃)。

2.22′,4′-二氟-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯乙酮(4)的制備 參照文獻(xiàn)方法[8]合成，收率42.2%。mp 104～105℃(文獻(xiàn)[8]：103～105 ℃)。

2.31-[(2,4-二氟苯基)-2,3-環(huán)氧丙基]-1H-1,2,4-三唑甲烷磺酸鹽(5)的合成 參照文獻(xiàn)[8]方法合成，收率56.0%，mp 131～133 ℃(文獻(xiàn)[8]：128～129 ℃)。

2.4化合物(6)的合成 取1-[(2,4-二氟苯基)-2,3-環(huán)氧丙基]-1H-1,2,4-三唑甲烷磺酸鹽(5) 20 g，甘氨酸乙酯鹽酸鹽15 g，和三乙胺20 ml加入300 ml無水乙醇中，攪拌、加熱回流12 h，反應(yīng)結(jié)束。蒸干溶劑，加乙酸乙酯300 ml萃取，依次以水100 ml×3，飽和食鹽水100 ml×3洗滌，無水硫酸鈉干燥。濃縮乙酸乙酯，通氯化氫氣體，得白色固體13.9 g，收率61.2%。

圖1 目標(biāo)化合物的全合成路線

2.5化合物(7)的合成 取化合物(6) 3.0 g(8 mmol)，碳酸氫鈉2.02 g(24 mmol) 于茄形瓶中，加入50 ml乙腈，攪拌10 min，然后加熱回流，分批加入400 mg×3溴丙炔，TCL監(jiān)測直到反應(yīng)結(jié)束。蒸干反應(yīng)溶劑，加乙酸乙酯100 ml萃取，依次水100 ml×3，飽和食鹽水50 ml×3洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮乙酸乙酯，柱層析純化(展開劑:乙酸乙酯:石油醚=3∶1)，得黃色油狀物2.2 g，收率72.9%。

2.6目標(biāo)化合物1a～r 取NaN370 mg(1.08 mmol)于15 ml DMSO的茄形瓶中，加入鄰氟溴芐250 mg(1.32 mmol)，常溫攪拌過夜，次日，稱取化合物(7) 350 mg(0.93 mmol)溶入少量DMSO中，并快速加入抗壞血酸鈉20 mg和無水硫酸銅25 mg(用1 ml水溶解)，其它條件保持不變。TLC監(jiān)測，常溫攪拌至反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液倒入稀NH3·H2O中，乙酸乙酯(30 ml×3)萃取，合并乙酸乙酯層，無水NaSO4干燥，過濾，濃縮，柱層析純化(展開劑為CHCl3∶CH3OH=5:1)得黃色油狀目標(biāo)化合物1a。其他目標(biāo)化合物1b～1s均按此法合成。結(jié)構(gòu)、產(chǎn)率、MS和1H NMR數(shù)據(jù)見表1。

表1目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)、性狀及光譜數(shù)據(jù)

3 藥理實驗

體外抑菌實驗 8種實驗真菌菌株：白念珠菌SC5314(Candidaalbicans,C.alb2)、新生隱球菌ATcc56992(Cryptococcusneoformans,C.neo)、近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis,C.par)、熱帶念珠菌(Candidatropicalis,C.tro)、紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum,T.rub)、克柔念珠菌(Candidakefyr,C.kef)、白念珠菌Y0109(Candidaalbicans,C.alb1)和薰煙曲霉菌(Aspergillusfumigatus,A.fum)。對照藥物：氟康唑(Fluconazole, FCZ)、伊曲康唑(hraconazole, ICZ)、和特比萘酚(Terbinafine,TRB)。

采用美國NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)化抗真菌敏感性實驗方法[9]測試其體外抗真菌活性，以目標(biāo)化合物抑制所選真菌80%生長率的濃度作為判斷終點( MIC80)。當(dāng)藥物的MIC80值超過測定濃度范圍時，按以下方法進行統(tǒng)計：MIC80值高于最高濃度64 mg/L時，計為“>64 mg/L”；MIC80值為最低濃度或在最低濃度以下時，不作區(qū)別，均計為“≤24×10-5mg/L”。體外抑菌活性測試數(shù)據(jù)見表2。

表2 目標(biāo)化合物的體外抗真菌活性[MIC80( μg/ml)]

4 結(jié)果與討論

初步體外抗真菌活性測試結(jié)果(表2)表明，所有目標(biāo)化合物均對白念珠菌(Candidaalbicans)Y0109和白念珠菌(Candidaalbicans)SC5314有一定的抑制活性，同時部分化合物對克柔念珠菌(Candidakefyr)或新生隱球菌(Cryptococcusneoformans)也有一定抑制作用。其中化合物1f和1k對白念珠菌(Candidaalbicans)SC5314的抑菌活性較好，為特比萘酚(TRB)的4倍?；衔?f、1g、1j和1k對新生隱球菌(Cryptococcusneoformans)的抑菌活性同氟康唑(Fluconazole，F(xiàn)CZ)相當(dāng)。側(cè)鏈同時引入乙酸乙酯和芳環(huán)N,N-二取代側(cè)鏈，其抗菌活性相比引入較小基團[4～8]差，可能是由于酯與芳環(huán)的N,N-二取代側(cè)鏈空間位阻較大，不利于化合物同靶酶活性位點的結(jié)合，從而影響了化合物的抗菌活性。由于化合物類型有限，抗菌活性同N,N-二取代側(cè)鏈的構(gòu)效關(guān)系還有待進一步研究。

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2010-07-07

[修回日期] 2011-03-04

Synthesisandantifungalactivityofthenoveltriazolecompounds

WANG Shu-dong1, CHEN Xing-dong1, ZHAO Qing-jie2, ZOU Yan2, HU Hong-gang2, YU Shi-chong,WANG Ting2，CHAI Xiao-yun2, REN Hai-xiang1

(1.The Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command, Nanjing 210002, China; 2.School of pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai, 200433, China)

ObjectiveTo design the synthesis and evaluate the antifungal active of the novel triazole compounds based on the structure of fluconazole.MethodsThe bigN,N-disubstituted group was introduced and a series of compounds were synthesized, all of them were confirmed by MS and1H NMR,etal. The antifungal activity were also evaluated against the eight common pathogenic fungi.ResultsEighteen compounds were synthesized,which exhibited activity against fungi tested.ConclusionThe bigN,N-disubstituted group introduced to the side chain could affected the antifungal activity.

triazole derivatives; synthesis; antifungal activity

國家自然科學(xué)基金資助項目(20772153)，上海市重點學(xué)科資助項目 (B906).

王曙東(1963-)，男，醫(yī)學(xué)博士.

任海祥. E-mail:renhaixiang@126.com.

R914.5

A

1006-0111(2011)06-0426-05