一例種源性的肉雞大腸桿菌病的診斷

季艷菊，張 偉，鄒曉紅，葉鏡岳，曾惠斯

（1.廣東省惠州農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣東惠州 516023；2.江門市科澤家禽發(fā)展有限公司，廣東江門 529162）

2011年4月至5月，廣東江門地區(qū)天氣晝夜溫差大，某些飼養(yǎng)某一特定品種雞的散養(yǎng)戶（與養(yǎng)殖公司合作），均不同程度出現(xiàn)大量死亡，經(jīng)合作公司的技術(shù)人員臨床癥狀觀察、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷后最終確診為大腸桿菌病，并做了藥物敏感性試驗(yàn)。通過淘汰病雞、嚴(yán)格消毒、緊急肌注敏感性藥物等措施最終控制了該病。

1 發(fā)病特點(diǎn)

該養(yǎng)殖公司的合作農(nóng)戶中，進(jìn)某一快大品種的雞均不同程度出現(xiàn)死亡，多在5日齡后發(fā)病并出現(xiàn)死亡，這之前比較正常。個(gè)別養(yǎng)戶早的在2日齡，晚的有在12日齡。而且往往7日齡經(jīng)免疫新支二聯(lián)苗后會(huì)加重病情。有些養(yǎng)戶，在同一雞棚內(nèi)飼養(yǎng)另一品種，反而發(fā)病很輕。在4月份進(jìn)的該品種雞苗中，羽毛越黑越深，往往發(fā)病后容易死亡。發(fā)病率幾乎在80%，死亡率10%~30%。而且，發(fā)病雞均來自于同一種雞欄，該欄正處于產(chǎn)蛋78%產(chǎn)蛋高峰，所以，發(fā)病的雞均為初生苗（出苗后皮注頭孢類抗生素），而且平時(shí)就反映該品種雞抵抗力弱。

2 臨床癥狀

病雞精神沉郁，食欲不振，有輕微的呼吸道癥狀消瘦，羽毛松亂，呆立，垂翅，拉稀，肛門周圍被糞便糊住。發(fā)病期間曾使用青霉素、鏈霉素、強(qiáng)力霉素、泰樂菌素等均未見效果。

3 剖檢變化

剖檢病死雞發(fā)現(xiàn)腹腔內(nèi)積有大量積液，肝臟腫大，有針尖狀的白色壞死點(diǎn)，心臟出現(xiàn)肉芽腫，胸腔膜有黃色干酪分泌物，個(gè)別腸道出現(xiàn)出血點(diǎn)，腸道黏膜脫落等。因?yàn)橹辉谔囟ㄆ贩N上廣泛發(fā)生該病，故初步診斷為種源性雞白痢沙門氏菌病。

4 實(shí)驗(yàn)室診

4.1 細(xì)菌分離

分別無菌采集病肉死雞、種雞和出生苗三者的肝和脾，另不同天齡胚蛋，接種麥康凱瓊脂、SS瓊脂平板培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h后，觀察結(jié)果：除胚蛋接種的平板均未有細(xì)菌生長外，其它三種來源組織的TSA平板均生長出光滑、灰白色菌落，麥康凱平板均生長出紅色、圓形、隆起、光滑濕潤、邊緣整齊的菌落，而且均呈現(xiàn)為單一的菌落。

4.2 染色鏡檢

用接種環(huán)分別無菌挑取三種來源組織分離菌于麥康凱、TSA平板上培養(yǎng)，后在載玻片上制成涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。觀察細(xì)菌形態(tài)：兩種來源組織的分離菌均為革蘭氏陰性兩端鈍圓無芽胞短桿菌（接近球型），長約2~3μm。單個(gè)排列或成對(duì)排列。

4.3 生化試驗(yàn)

將三種來源組織分離菌的純培養(yǎng)物分別接種于生化培養(yǎng)管中，作生化試驗(yàn)。均可以發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、山梨醇、阿拉伯糖；不發(fā)酵乳糖，不水解尿素、不液化明膠，甲基紅試驗(yàn)陽性、V-P試驗(yàn)陰性。

4.4 PCR鑒定

對(duì)肉死雞、種雞分離菌進(jìn)行EC種特異性鑒定，E.coli檢測的引物如下[1]：

上游引物：5'-ACGTCATCCCACCTTCCTC-3′

下游引物：5'-TCATTGACGTTACCCGCA-3′

擴(kuò)增目的片段為16 sRNA特異性的718 bp片段，結(jié)果與預(yù)期大小一致。如下電泳圖1。

4.5 血清型鑒定

利用中國獸藥監(jiān)察所提供的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O型血清，進(jìn)行凝集試驗(yàn)。結(jié)果：從種雞、雞苗和發(fā)病肉雞來源的E.coli均屬于O8型。

經(jīng)合作公司的技術(shù)人員臨床癥狀觀察、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷后最終確診此次肉雞發(fā)的病為種源性大腸桿菌病。

4.6 藥敏試驗(yàn)

按紙片擴(kuò)散法將被檢細(xì)菌菌涂布接種于接種于普通瓊脂平板上，間隔一定距離貼上各種藥敏試紙，于37℃培養(yǎng)16~18 h，結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)（第四版）》進(jìn)行：頭孢唑啉、利特靈、頭孢拉定、阿莫西林、舒巴坦敏感；卡那霉素、壯觀霉素、氧氟沙星、慶大霉素、氟苯尼考中度敏感；青霉素、紅霉素、鏈霉素、阿奇霉素、利福平耐藥。

5 治療

5.1 對(duì)種雞孵化房環(huán)境進(jìn)行徹底消毒，同時(shí)，對(duì)雞苗在出苗前皮注敏感性抗生素，另外，相應(yīng)欄舍種雞加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和防疫，也肌注敏感性抗生素。

5.2 徹底清除養(yǎng)戶雞棚內(nèi)糞便，更換墊料，對(duì)用具、欄舍、場地進(jìn)行全面消毒，進(jìn)苗后連飲三天敏感性抗生素。

經(jīng)以上防治措施后，疫情得到很好控制。

6 小結(jié)

雞大腸桿菌病是致病性大腸桿菌引起的一種雞急性或慢性細(xì)菌性傳染病[2]，是一種多發(fā)病、常見病。該菌普遍存在于患病禽類、隱性感染的禽類機(jī)體內(nèi)，它是條件性細(xì)菌，當(dāng)飼養(yǎng)管理不當(dāng)，環(huán)境條件比較差時(shí)，不同日齡、不同季節(jié)都可以發(fā)病，本病常與其他疾病并發(fā)或繼發(fā)[3-5]。本文中對(duì)感染種雞所產(chǎn)雞胚中均未分離到大腸桿菌，從而在一定程度上說明，該菌可能不能進(jìn)行垂直傳播。由于受國內(nèi)大環(huán)境的影響，大腸桿菌耐藥性程度俞年性增加，耐藥菌株越來越多，從而給防治大腸桿菌這一常見病帶了很大難度。在平時(shí)的防治過程中，往往出現(xiàn)，無藥可救的局面。所以有時(shí)不得不借助于實(shí)驗(yàn)室診斷及藥敏實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)來加以控制。但養(yǎng)殖過程，對(duì)大腸桿菌最好的防控還是要加強(qiáng)日常的飼養(yǎng)管理和防疫。

[1]覃宗華，蔡建平，呂敏娜，等.鴨疫里默氏菌病和大腸桿菌病鑒別診斷雙重PCR方法的建立和應(yīng)用 [J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，39（4）：517-521.

[2]尹德勝，唐后天.一起肉雞大腸桿菌病的診治[J].畜牧與飼料科學(xué)，2010（5）：177-182.

[3]汪力一，賈海軍，韓旭東，等.影響雞大腸桿菌病的病原分析對(duì)策研究[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009（11）：49-51.

[4]蘭玲，黃瑛，加伊那古力，等.麻花雞大腸桿菌并發(fā)禽敗血克原體病的診斷與治療[J].中國動(dòng)物檢疫，2008，25（11）：42.

[5]劉珍麗，馬鵬燕，劉珍梅，等.雞大腸桿菌病的調(diào)查及診斷[J].中國動(dòng)物檢疫，2007，24（3）：47-48.