Livin和PTEN在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義

倪建華 辛 軍 伍伯聰 辛明華 吳文峰

腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)中發(fā)病率僅次于膀胱癌的惡性腫瘤，也是成人腎臟最常見的惡性腫瘤，預(yù)后較差，且對放、化療均不敏感。Livin和PTEN均參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控，但其在腎腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其相互機(jī)制有待更深一步研究。本研究通過免疫組化SP法檢測44例腎細(xì)胞癌組織和10例正常腎組織Livin和PTEN的表達(dá)，探討它們在腎細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用以及兩者的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院泌尿外科2008～2009年手術(shù)切除的腎細(xì)胞癌石蠟包埋標(biāo)本44例，其中男性24例，女性20例;年齡26～75歲，平均年齡(53.65±10.09)歲;組織學(xué)分級按 WHO推薦的Fuhrman分級標(biāo)準(zhǔn)，高～中分化26例，低分化18例;病理分期按Robson臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期17例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有11例。正常腎組織10例，取自結(jié)石、積水或腎外傷手術(shù)切除病例并經(jīng)病理檢查證實(shí)。所有患者術(shù)前均未行放療或化療。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

石蠟切片脫蠟水化，采用免疫組織化學(xué)SP法，DAB顯色。具體步驟參考說明書進(jìn)行。Livin單克隆抗體和PTEN單克隆抗體均為美國UCL公司產(chǎn)品。Livin和PTEN一抗工作濃度均為1∶100，用已知陽性切片(膀胱癌)作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定

Livin和PTEN染色程度判斷:陽性均為胞質(zhì)染為淡黃色至棕黃色，凡顯色強(qiáng)度與背景無明顯差別者為陰性。隨機(jī)觀察5個高倍視野(×400)，計數(shù)陽性細(xì)胞顯色程度及其所占比例。陽性細(xì)胞百分比＜10%，顯色強(qiáng)度為淡黃色或僅個別細(xì)胞呈黃至棕黃色染色，判定為弱陽性(+);陽性細(xì)胞百分比＞60%，多數(shù)細(xì)胞呈黃至棕黃色染色，判定為強(qiáng)陽性(+++);陽性細(xì)胞百分比及顯色強(qiáng)度介于兩者之間，判定為中度陽性(++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，Livin和PTEN的表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn);兩者之間的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析;顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Livin、PTEN 的表達(dá)

正常組與腎癌組，Livin表達(dá)率分別為0、47.7%(21/44)，PTEN 表達(dá)率分別為 100.0%、38.6%(17/44)，兩兩比較，P 均 ＜0.05。

2.2 Livin、PTEN表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

Livin、PTEN蛋白表達(dá)均與腎細(xì)胞癌臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)，與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)(P均＞0.05)，見表1。

表1 Livin、PTEN表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 腎細(xì)胞癌中Livin和PTEN蛋白表達(dá)相關(guān)性

PTEN、Livin蛋白表達(dá)均陽性13例，均陰性19例，根據(jù)Spearman等級相關(guān)分析:Livin和PTEN表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(γ = －0.326，P ＜0.05)，見表2。

表2 PTEN與Livin蛋白表達(dá)的相關(guān)性(例)

3 討論

PTEN是具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因，廣泛存在于乳腺癌、前列腺癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤中，通過輔助蛋白、張力蛋白的協(xié)同調(diào)節(jié)，在腫瘤細(xì)胞浸潤、血管發(fā)生及腫瘤轉(zhuǎn)移中起到一定的抑制作用［1］。Weng等［2］發(fā)現(xiàn)PTEN通過對細(xì)胞周期和細(xì)胞生存的負(fù)性調(diào)節(jié)抑制細(xì)胞生長，在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和凋亡中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果顯示:PTEN蛋白在腎癌中的表達(dá)顯著低于正常腎組織，且與腎癌病理分級、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等顯著相關(guān)，推測PTEN可能起到抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用。Kim等［3］研究亦發(fā)現(xiàn)，PTEN的陽性表達(dá)缺失與腎癌患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)。

Livin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成員，特異性地分布于多種腫瘤組織，如黑色素瘤、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤以及肺癌等。Livin抑制腫瘤細(xì)胞凋亡主要有以下幾個通路:①抑制天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)途徑:Kasof等［4］研究表明，Livin能夠直接抑制 Caspase 3、7、9等的酶水解作用，從而抑制細(xì)胞凋亡;②激活TAK1/JNK1信號傳導(dǎo)途徑:livin通過選擇性激活由TAB1/TAK1介導(dǎo)的JNK1信號傳導(dǎo)途徑，明顯抑制由TNF-a和ICE介導(dǎo)的凋亡［5］;③誘導(dǎo) NF-kB激活 Akt(絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶)途徑，鈣離子結(jié)合蛋白等方式發(fā)揮抗凋亡作用。本研究結(jié)果顯示:正常腎組織不表達(dá)Livin，而44例腎細(xì)胞癌組織中Livin陽性表達(dá)率為47.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明Livin可能和腎細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān);且隨臨床分期的增高，表達(dá)逐漸增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示Livin與腫瘤浸潤深度有關(guān)，對腎細(xì)胞癌的發(fā)展起一定的作用，其陽性表達(dá)可作為腫瘤侵襲能力強(qiáng)的指標(biāo)之一;但不同分化程度的腎細(xì)胞癌組織中Livin表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，推測這可能與樣本量相對較少和采用定性檢測等有關(guān)，如加大樣本量及采用定量檢測方法，可能會得到有統(tǒng)計學(xué)意義的結(jié)果。Gazzaniga等［6］研究表明，Livin表達(dá)較高的腫瘤患者易復(fù)發(fā)，常提示預(yù)后不良。國內(nèi)楊春明等［7］研究表明，Livin的異常陽性表達(dá)與腎癌的不良預(yù)后顯著相關(guān)，可作為判斷腎癌預(yù)后的標(biāo)志之一。本研究亦顯示:PTEN與Livin在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)性，PTEN表達(dá)缺失可直接或間接引起Livin的異常高表達(dá)，減少細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及惡性增殖。但腫瘤的發(fā)生是多基因共同作用的結(jié)果，如PTEN、Livin基因表達(dá)的調(diào)控，與其他癌基因，抑癌基因與凋亡抑制基因的聯(lián)系還有待深入研究。

綜上所述，PTEN、Livin在腎細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中具有一定的作用，且與腎細(xì)胞癌的發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為評價腎細(xì)胞癌發(fā)展和預(yù)后的重要的生物學(xué)指標(biāo)，可能成為腫瘤基因治療的新靶點(diǎn)。

［1］Keniry M，Parsons R.The role of PTEN signaling perturbations in cancer and in targeted therapy〔J〕.Onco，2008，27(41):5477.

［2］Weng L，Brown J，Eng C.PTEN induces apoptosis and cell cycle arrest through phosphoinositol-3-kinase/Akt-dependent and-independent pathways〔J〕.Hum Mol Genet，2001，10(3):237.

［3］Kim HL，Seligson D，Xueli L，et al.Using protein expressions to predict survival in clear cell renal carcinomar〔J〕.Cli Can Res，2004，10(11):5464.

［4］Kasof GM，Gomes BC.Livin，a novel inhibitor of apoptosis

protein family member〔J〕.Biol Chem，2001，276(5):3238.

［5］Sanna MG，da Silva Correia J，Ducrey O，et al.IAP suppression of apoptosls involves distinct mechanisms:the TAK1/JNK1 signaling cascade and caspase inhibition〔J〕.Mol Cell Biol，2002，22(6):1754.

［6］Gazzaniga P，Gradilone A，Giuliani L，et al.Expression and prognostic significance of Livin，Surviving and other apoptosis—related genes in the progression of superficial bladder cancer〔J〕.Ann 0nco，2003，14(1):85.

［7］楊春明，劉海波，孫志熙，等.凋亡抑制蛋白Livin在腎癌組織中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，38(4):289.