• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙及抗菌性研究

    2011-11-14 15:35:20楊仁黨李雪云
    食品工業(yè)科技 2011年1期
    關(guān)鍵詞:葡萄糖氧化酶葡萄糖淀粉

    虢 杰,楊仁黨,*,李雪云

    (1.華南理工大學(xué)制漿造紙國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640;2.廣東省造紙技術(shù)與裝備公共實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640)

    葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙及抗菌性研究

    虢 杰1,2,楊仁黨1,2,*,李雪云1,2

    (1.華南理工大學(xué)制漿造紙國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640;2.廣東省造紙技術(shù)與裝備公共實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640)

    葡萄糖氧化酶是氧化葡萄糖的專一催化酶,具有脫氧、殺菌的功能。通過(guò)定性和定量抗菌實(shí)驗(yàn)方法研究了葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系在以淀粉作為載體和不混合淀粉時(shí)施涂于紙張表面的抗菌效果。定性抗菌實(shí)驗(yàn)表明,葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙具有良好的抗菌效果。而定量檢測(cè)結(jié)果表明,pH等于5.5時(shí),35℃反應(yīng)10min,不添加淀粉時(shí),葡萄糖氧化酶最小的抑菌濃度約為70U/m2,葡萄糖足量時(shí),酶用量越高,抗菌率越好;添加0.7g/m2淀粉后,最小抑菌濃度提高到約650U/m2。淀粉對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌效果有較大影響,主要原因是淀粉能夠促進(jìn)細(xì)菌的繁殖。

    葡萄糖/葡萄糖氧化酶,抗菌紙,抗菌性,定性與定量抗菌實(shí)驗(yàn)

    抗菌紙是各種具有抑制危害紙品微生物能力的功能性紙張的統(tǒng)稱[1],其抗菌效果來(lái)源于抗菌劑。一般來(lái)講,抗菌劑在低濃度時(shí)只有抑菌作用,而濃度增大或作用時(shí)間延長(zhǎng)時(shí),可起到殺菌作用[2]。抗菌紙用于食品包裝時(shí),可以使被包裝的食品、果蔬等延長(zhǎng)保質(zhì)期而不變質(zhì)。也就是說(shuō),食品用抗菌包裝紙基本功能是:防止微生物的污染和昆蟲(chóng)的侵入,保護(hù)商品在生產(chǎn)和銷售過(guò)程中不變質(zhì)[3-4]。目前,超市里的生鮮食品,為了保持新鮮,延遲變質(zhì)時(shí)間,通常添加一些化學(xué)物質(zhì)或采用特殊的包裝技術(shù)來(lái)延長(zhǎng)貨架期,如添加二氧化氯做為保鮮劑,采用真空預(yù)處理和氣調(diào)包裝技術(shù)都能達(dá)到較好的延長(zhǎng)貨架期的目的[5-9]。但這些常規(guī)方法也存在不足的地方,有些生產(chǎn)成本較高,有些保鮮效果一般,貨架存放時(shí)間較短,影響產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)性。葡萄糖氧化酶是一種需氧脫氫酶,能專一地將β-D-葡萄糖(Glucose)氧化成為葡萄糖酸和過(guò)氧化氫,在食品保鮮、醫(yī)藥檢測(cè)等許多方面得到廣泛的應(yīng)用[10-12],其化學(xué)反應(yīng)機(jī)理如下:

    此外,Mattila Tiina和M.Sandholm[13]的研究結(jié)果顯示,葡萄糖/葡萄糖氧化酶的組合具有明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)抑制作用。盡管在生鮮產(chǎn)品如牛肉、雞等表面噴灑葡萄糖氧化酶能起到抑菌、抗菌效果,延長(zhǎng)產(chǎn)品的貨架時(shí)間,但工藝要求嚴(yán)格,質(zhì)量難以保證。本文將葡萄糖/葡萄糖氧化酶施涂于紙張表面,并探討其抗菌性,為開(kāi)發(fā)生鮮產(chǎn)品抗菌保鮮包裝紙?zhí)峁┘夹g(shù)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    β-D-葡萄糖(Glucose) 分析純;葡萄糖氧化酶(GOD) 活性245U/mg,sigma公司產(chǎn)品,購(gòu)自廣州杰順生物科技有限公司;玉米原淀粉 水分90%;實(shí)驗(yàn)菌 大腸桿菌(Enterobacter cloacae);培養(yǎng)基0.5%氯化鈉,0.5%牛肉膏,1.5%蛋白胨,1%瓊脂粉加去離子水配制而成;肉湯培養(yǎng)基 將所有成分溶于去離子水中,定容至1000mL,調(diào)節(jié)pH為7.2~7.4,121℃下高壓滅菌20min取出,置于無(wú)菌室保存待用;瓊脂肉湯培養(yǎng)基 步驟同上,在無(wú)菌室中操作,將滅完菌后的瓊脂肉湯培養(yǎng)基溶液倒入滅菌平皿制成平皿培養(yǎng)基,培養(yǎng)基冷卻凝固后翻轉(zhuǎn)放置,1d后觀察是否有雜菌,如果沒(méi)有則可放于無(wú)菌室待用。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 抗菌紙制備 將去離子水配好的Glucose溶液、GOD溶液和糊化淀粉溶液在pH5.5和35℃恒溫下反應(yīng)預(yù)定時(shí)間后,全部施涂于直徑9cm的過(guò)濾紙表面上,用刮棒刮平,使液體均勻吸收且不流出來(lái),放入干凈托盤(pán)中,在30℃真空干燥箱干燥一夜。

    1.2.2 菌液制備 采用美國(guó)AATCC 100兩步法[14]在37℃下活化菌種,制取所需濃度的菌液。

    1.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)與檢測(cè)

    1.2.3.1 抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)法定性檢測(cè)[15-16]用接種環(huán)將大腸桿菌菌液接種到制備好的培養(yǎng)基上并涂勻,覆蓋上事先剪好的圓形紙片,將培養(yǎng)皿倒置在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)19h取出,根據(jù)抑菌環(huán)的大小來(lái)測(cè)定抗菌性能。

    1.2.3.2 吸收法定量檢測(cè)[14,16]將抗菌紙和對(duì)照樣紙片放入三角燒瓶中后吸收定量的菌液,37℃下恒溫培養(yǎng)20±2h,或者不培養(yǎng)固定時(shí)間直接用肉湯培養(yǎng)基溶液把紙片上的細(xì)菌洗滌下來(lái),稀釋適當(dāng)濃度后接種到平皿培養(yǎng)基上,然后倒置在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)19h取出,進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算公式為:

    細(xì)菌減少百分率(抗菌率)(%)=(“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)-定期培養(yǎng)試樣上細(xì)菌數(shù))/“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)×100%

    或細(xì)菌減少百分率(%)=(“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù)-定期培養(yǎng)試樣上細(xì)菌數(shù))/“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù)×100%

    或細(xì)菌減少百分率(%)=[(“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)+“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù))/2-定期培養(yǎng)試樣上細(xì)菌數(shù)]/[(“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)+“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù))/2?×100%

    如果“0”接觸時(shí)間試樣上的細(xì)菌數(shù)和“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上的細(xì)菌數(shù)差別較大時(shí),取較大值;如果兩者差別不大時(shí),取平均值。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 抑菌環(huán)法定性抗菌效果

    取葡萄糖用量3500、21000μmol/m2絕干紙,葡萄糖氧化酶用量3500、7000、21000U/m2(如表1中實(shí)驗(yàn)號(hào)1~6所示),pH 5.5,35℃下反應(yīng)10min后施涂于濾紙上,用抑菌環(huán)法定性檢測(cè)抗菌效果。

    表1 不同比例葡萄糖/GOD/淀粉組合的抗菌效果

    從表1看出,濾紙面積3.14cm2,1、3、5號(hào)抑菌環(huán)面積分別為7.61、4.90、2.17cm2,抗菌、抑菌效果很明顯,其葡萄糖用量為3.78g/m2,葡萄糖氧化酶用量分別為21000、7000、3500U/m2。因?yàn)槠咸烟茄趸缸鳛榇呋瘎?,其用量決定催化能力,從而影響生成產(chǎn)物量和抗菌效果;而葡萄糖用量0.63g/m2時(shí),無(wú)論葡萄糖氧化酶用量是3500U/m2或是21000U/m2,都沒(méi)有明顯的抑菌環(huán)出現(xiàn)。

    同樣取葡萄糖用量21000μmol/m2,葡萄糖氧化酶用量如表1中實(shí)驗(yàn)號(hào)7~9所示,淀粉用量0.7g/m2。與1、3、5號(hào)對(duì)比,相同的葡萄糖和葡萄糖氧化酶用量時(shí),7、8、9號(hào)的抑菌環(huán)面積都相對(duì)較小,抗菌效果不如未添加淀粉的明顯,加入淀粉載體后大大降低了抗菌效果。

    2.2 葡萄糖/葡萄糖氧化酶的抗菌性定量分析

    為了對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶的抗菌效果進(jìn)行更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)分析,采用定量吸收法檢測(cè)。首先優(yōu)化葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的反應(yīng)時(shí)間,實(shí)驗(yàn)中取葡萄糖用量350μmol/m2,葡萄糖氧化酶用量350U/m2,反應(yīng)時(shí)間和抗菌率見(jiàn)表2。催化反應(yīng)1min,抗菌紙的抗菌率為3.4%,反應(yīng)5min為23.2%,比反應(yīng)1min的效果有很大提高,這說(shuō)明1min的反應(yīng)很不完全;反應(yīng)10min時(shí)抗菌率也比反應(yīng)5min的效果有明顯提高。對(duì)于以下實(shí)驗(yàn),反應(yīng)時(shí)間選擇10min。

    表2 不同GOD/葡萄糖催化反應(yīng)時(shí)間的抗菌率

    2.2.1 葡萄糖與抗菌率的關(guān)系 圖1表示葡萄糖氧化酶用量350U/m2時(shí),葡萄糖用量與抗菌率的關(guān)系。抗菌率隨著葡萄糖用量的增加而提高,葡萄糖用量低于150μmol/m2,對(duì)細(xì)菌沒(méi)有抗菌效果,葡萄糖用量840μmol/m2,抗菌率達(dá)到80%。葡萄糖是反應(yīng)物,其用量直接影響生成物的量。繼續(xù)增加葡萄糖用量,抗菌率沒(méi)有明顯提高。由于酶用量的限制,即使繼續(xù)增加葡萄糖用量,抗菌率也基本保持不變。一定的酶濃度時(shí),葡萄糖濃度在一定范圍內(nèi),對(duì)抗菌率有很大的影響。

    圖1 葡萄糖用量對(duì)抗菌效果的影響

    2.2.2 葡萄糖氧化酶與抗菌率的關(guān)系 用固定的過(guò)量葡萄糖,檢測(cè)葡萄糖氧化酶對(duì)抗菌效果的影響(圖2)。葡萄糖用量2800μmol/m2,葡萄糖氧化酶用量很低時(shí),抗菌率隨著葡萄糖氧化酶用量的增加快速上升。當(dāng)葡萄糖氧化酶濃度大于70U/m2時(shí),檢測(cè)結(jié)果顯示大腸桿菌的生長(zhǎng)受到抑制,在抗菌紙上培養(yǎng)20h后,大腸桿菌的數(shù)目比未培養(yǎng)20h的對(duì)照樣上的細(xì)菌數(shù)目減少,此時(shí)的酶濃度可以認(rèn)為是最小抑菌濃度(MIC)。當(dāng)酶用量達(dá)到350U/m2,抗菌率達(dá)到84%,酶用量550U/m2時(shí),抗菌率91%,之后抗菌率雖然隨著酶用量的增加繼續(xù)提高,但增速與前面的相比明顯減慢。

    圖2 葡萄糖氧化酶用量對(duì)抗菌效果的影響

    2.2.3 淀粉對(duì)抗菌效果的影響 淀粉是目前常用的表面施膠劑,可以利用淀粉作為載體把葡萄糖/葡萄糖氧化酶施涂到紙基表面。實(shí)驗(yàn)中,葡萄糖用量與葡萄糖氧化酶用量比為2∶1,溶液在相同的溫度和pH條件下反應(yīng)10min后,與糊化淀粉溶液混合均勻施涂到濾紙表面,抗菌率如圖3所示。

    葡萄糖氧化酶用量700U/m2時(shí),未添加淀粉的抗菌紙抗菌率為95%,添加0.7g/m2淀粉后抗菌紙的抗菌率只有2%,淀粉施膠劑對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌性能有很大影響。最小抑菌濃度也有明顯變化,未添加淀粉時(shí)為70U/m2,添加0.7g/m2淀粉時(shí)提高到650U/m2。從曲線可以看出,用淀粉作為載體,繼續(xù)增加葡萄糖和葡萄糖氧化酶用量可以提高抗菌效果。但是,由于淀粉是細(xì)菌生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物,會(huì)促進(jìn)細(xì)菌的生產(chǎn),從而會(huì)影響抗菌紙的抗菌效果,這與抑菌環(huán)定性分析結(jié)果相符。

    圖3 淀粉用量對(duì)抗菌效果的影響

    3 結(jié)論

    定性和定量抗菌實(shí)驗(yàn)表明,葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙具有良好的抗菌性能。當(dāng)pH為5.5,35℃下催化反應(yīng)10min時(shí),反應(yīng)較充分,抗菌效果與葡萄糖、葡萄糖氧化酶和淀粉施載體用量有關(guān)。

    葡萄糖氧化酶濃度一定時(shí),葡萄糖濃度在一定范圍內(nèi),對(duì)抗菌率有很大的影響,超過(guò)此范圍,抗菌率基本保持不變。葡萄糖用量充分時(shí),抗菌率隨著葡萄糖氧化酶用量的增加而提高,酶用量550U/m2時(shí),無(wú)淀粉施涂的抗菌紙抗菌率可超過(guò)90%。

    不添加淀粉時(shí),葡萄糖氧化酶最小抑菌濃度約為70U/m2;用0.7g/m2淀粉施膠后,最小抑菌濃度提高到約650U/m2,淀粉對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌效果有較大的影響。添加淀粉后,葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌效果變差,主要原因是淀粉促進(jìn)了細(xì)菌的生長(zhǎng),因此今后可以選用其它的不會(huì)促進(jìn)細(xì)菌繁殖的合成化合物如聚乙烯醇作為載體等進(jìn)行研究。

    [1]周亮.抗菌紙的研究進(jìn)展[J].包裝工程,2005,26(5):103-108.

    [2]賈冬舒,楊飛華,童忠良.納米抗菌材料制備方法與應(yīng)用研究進(jìn)展[J].建筑裝飾材料世界,2003(Z1):59-61.

    [3]陳德衛(wèi),梁超雄.包裝紙的發(fā)展前景與發(fā)展對(duì)策[J].造紙科學(xué)與技術(shù),2005,24(1):62-65.

    [4]向賢偉.食品包裝技術(shù)[M].長(zhǎng)沙:國(guó)防科技大學(xué)出版社,2002:1-4.

    [5]周大成.保鮮紙[P].中國(guó)專利:88206674,1989-11-29.

    [6]鄧東泉,孫恒,肖尤明,等.真空預(yù)冷技術(shù)的現(xiàn)狀和發(fā)展前景[J].食品工業(yè)科學(xué)與技術(shù),2002,23(7):73-75.

    [7]王如林,夏睿.真空預(yù)冷技術(shù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用[J].廣州食品工業(yè)科技,2002,15(1):54-55.

    [8]敘文達(dá),程裕東,岑偉平,等.食品軟包裝材料與技術(shù)[M].北京:機(jī)械工業(yè)出版社,2003:103-107,209-211.

    [9]黃壯霞,張愁,朱丹實(shí),等.MAP結(jié)合真空預(yù)處理延長(zhǎng)鮮牛肉貨架期[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2005,24(3):22-26.

    [10]張樹(shù)政.酶制劑工業(yè)(下冊(cè))[M].第二版.北京:科學(xué)出版社,1998:671-698.

    [11]譚斌.酶在食品保鮮中的應(yīng)用[J].食品科技,1998(5):32-33.

    [12]黃惠芝,黃春波.葡萄糖氧化酶在啤酒生產(chǎn)中的應(yīng)用研究[J].食品科學(xué),1998,19(11):21-24.

    [13]Tiina Mattila,Sandholm M.Antibacterial effect of the glucose oxidase-glucose system on food-poisoning organisms[J].International Journal of Food Microbiology,1989(8):165-174.

    [14] AATCC100:1999.Antibacterial Finishes on Textile Materials:Assessment of[S].

    [15]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部消毒技術(shù)規(guī)范(2002)[S].

    [16]JIS L 1902:2002.Testing for antibacterial activity and efficacy on tetile product[S].

    Study on glucose/glucose oxidase antibacterial paper and its antimicrobial property

    GUO Jie1,2,YANG Ren-dang1,2,*,LI Xue-yun1,2
    (1.State Key Laboratory of Pulpamp;Papermaking Engineering,South China University of Technology,Guangzhou 510640,China;2.Guangdong Public Laboratory of Process Technology and Equipment Team,South China University of Technology,Guangzhou 510640,China)

    Glucose oxidase is specific for β-D-glucose,and of oxygen removal and antibacterial functions. Antimicrobial effects of paper coated via glucose/glucose oxidase with/without starch were investigated by means of qualitative and quantitative assay.Qualitative assay phenomenon showed that glucose/enzyme paper was capable of inhibiting bacteria growth to betterextent.The experimentalresults from quantitative assay demonstrated that minimal inhibition concentration(MlC)was about 70U per square meter under the conditions of pH 5.5,35 centigrade,10 minutes reaction time,and without starch.And that if the dosage level of enzyme rises with saturation of glucose,the germproof effects could be more remarkable.However,MlC was up to round 650U per square meter with 0.7 gram per square meter starch addition.The starch hereby imposed a significant negative effect on the antibacterial properties of glucose/enzyme paper.This owes to starch nutriment contributing to bacteria growth.

    glucose/glucose oxidase;antibacterial paper;antimicrobial property;qualitative and quantitative assay

    TS201.1

    A

    1002-0306(2011)01-0124-04

    2009-12-25 *通訊聯(lián)系人

    虢杰(1985-),男,碩士研究生,主要從事造紙技術(shù)與特種紙方面的研究。

    猜你喜歡
    葡萄糖氧化酶葡萄糖淀粉
    從人工合成淀粉說(shuō)開(kāi)去
    葡萄糖漫反射三級(jí)近紅外光譜研究
    葡萄糖氧化酶的研究進(jìn)展及其在豬生產(chǎn)中的應(yīng)用分析
    飼料博覽(2019年7期)2019-02-12 22:28:15
    齒輪狀SBA-15的制備及其對(duì)葡萄糖氧化酶的吸附行為研究
    糖耐量試驗(yàn)對(duì)葡萄糖用量的要求
    葡萄糖氧化酶在斷奶仔豬日糧上的應(yīng)用研究進(jìn)展
    MMT/淀粉-g-PAA的制備及其對(duì)鉻(Ⅵ)的吸附
    葡萄糖對(duì)Lactobacillus casei KDL22發(fā)酵及貯藏性能的影響
    蕉藕淀粉與薯類淀粉特性對(duì)比研究
    多發(fā)性肺硬化性血管瘤18~F-脫氧葡萄糖PET/CT顯像1例
    在线观看一区二区三区| 在线免费十八禁| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产熟女欧美一区二区| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产黄片视频在线免费观看| 干丝袜人妻中文字幕| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日本免费在线观看一区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| av卡一久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 最近最新中文字幕大全电影3| 女人久久www免费人成看片| 街头女战士在线观看网站| 丰满乱子伦码专区| a级毛色黄片| 国产av一区二区精品久久 | 高清不卡的av网站| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 一区二区三区精品91| 男女国产视频网站| 性色av一级| 18+在线观看网站| 国产永久视频网站| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 51国产日韩欧美| 久久精品国产a三级三级三级| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线观看av片永久免费下载| 国产视频首页在线观看| 美女高潮的动态| kizo精华| 亚洲av中文av极速乱| 一级a做视频免费观看| 日本欧美国产在线视频| 久久这里有精品视频免费| 我的老师免费观看完整版| 黑人高潮一二区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产深夜福利视频在线观看| 国产av精品麻豆| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久 成人 亚洲| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品.久久久| 久久精品国产自在天天线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 干丝袜人妻中文字幕| 国产伦在线观看视频一区| 久久99精品国语久久久| av在线播放精品| 极品教师在线视频| 久久国产精品大桥未久av | 日韩欧美精品免费久久| 亚洲第一av免费看| 日韩av不卡免费在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 少妇 在线观看| 蜜桃在线观看..| 日韩av在线免费看完整版不卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 99久久精品国产国产毛片| 亚洲国产精品国产精品| 三级国产精品欧美在线观看| 日本wwww免费看| 精品一区在线观看国产| 成年人午夜在线观看视频| 韩国高清视频一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲国产最新在线播放| 99热这里只有是精品50| 久久久午夜欧美精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 久久国产乱子免费精品| 精品久久久久久电影网| 99九九线精品视频在线观看视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 丰满少妇做爰视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩欧美 国产精品| 精品久久国产蜜桃| 妹子高潮喷水视频| 亚洲成色77777| 久久久久久久久大av| 婷婷色综合www| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲真实伦在线观看| 天堂8中文在线网| 晚上一个人看的免费电影| 伦理电影大哥的女人| 视频区图区小说| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 新久久久久国产一级毛片| 免费观看在线日韩| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产亚洲一区二区精品| 久热久热在线精品观看| 久久av网站| 日本午夜av视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲av在线观看美女高潮| 全区人妻精品视频| 激情 狠狠 欧美| 亚洲成人一二三区av| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 欧美97在线视频| 中文天堂在线官网| 激情 狠狠 欧美| 男人狂女人下面高潮的视频| 九九在线视频观看精品| 91久久精品国产一区二区三区| 久久99热6这里只有精品| 内射极品少妇av片p| 最新中文字幕久久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 内射极品少妇av片p| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 一级毛片我不卡| 夜夜爽夜夜爽视频| 男人舔奶头视频| 久久综合国产亚洲精品| 久久久久久人妻| 尾随美女入室| 国产永久视频网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 最后的刺客免费高清国语| 日韩视频在线欧美| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲高清免费不卡视频| 国产在线男女| 久久国产乱子免费精品| 99久久精品国产国产毛片| 久久久精品免费免费高清| 街头女战士在线观看网站| 久久 成人 亚洲| 少妇精品久久久久久久| 2022亚洲国产成人精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| av在线app专区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 搡老乐熟女国产| 中文字幕亚洲精品专区| av网站免费在线观看视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品456在线播放app| 久久久久久久久久人人人人人人| 伦理电影免费视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产黄色免费在线视频| 午夜福利影视在线免费观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲国产av新网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日本黄大片高清| 在线观看国产h片| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产精品久久久久久久电影| 黑人猛操日本美女一级片| 18禁动态无遮挡网站| 国产熟女欧美一区二区| 久久青草综合色| 一个人免费看片子| 欧美日韩精品成人综合77777| 日本一二三区视频观看| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区三区av在线| 免费大片18禁| av不卡在线播放| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产精品久久久久久精品古装| 久久久精品免费免费高清| 国产亚洲5aaaaa淫片| 免费大片18禁| 纯流量卡能插随身wifi吗| 在线精品无人区一区二区三 | 国产成人a∨麻豆精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 九九在线视频观看精品| 一区二区av电影网| 国产黄片视频在线免费观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品一二三| 精品人妻偷拍中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久婷婷青草| freevideosex欧美| 国产精品一及| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久久精品性色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久久久视频综合| 国产精品久久久久成人av| 成人美女网站在线观看视频| 日日啪夜夜撸| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久热这里只有精品99| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 一级a做视频免费观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久精品人妻少妇| 成人特级av手机在线观看| 99热6这里只有精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产精品国产三级专区第一集| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产精品99久久久久久久久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产熟女欧美一区二区| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产伦理片在线播放av一区| 有码 亚洲区| 直男gayav资源| 亚洲真实伦在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 伦精品一区二区三区| 精品午夜福利在线看| 国产一级毛片在线| 国产极品天堂在线| a 毛片基地| 黄色日韩在线| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲av不卡在线观看| 欧美三级亚洲精品| 天天躁日日操中文字幕| 内射极品少妇av片p| 日韩av免费高清视频| 国产爽快片一区二区三区| 久久久亚洲精品成人影院| 丰满少妇做爰视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 少妇的逼好多水| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久人人爽人人片av| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 搡老乐熟女国产| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品久久久久久精品古装| 男的添女的下面高潮视频| 成人无遮挡网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲国产欧美人成| 精品久久久噜噜| 成人国产麻豆网| 久久99热6这里只有精品| 成人毛片60女人毛片免费| 国产免费一区二区三区四区乱码| 内射极品少妇av片p| 欧美少妇被猛烈插入视频| 丝袜喷水一区| 七月丁香在线播放| 国产乱人偷精品视频| 精品人妻视频免费看| av女优亚洲男人天堂| 欧美最新免费一区二区三区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品一区二区在线不卡| 赤兔流量卡办理| 精品午夜福利在线看| av线在线观看网站| 视频区图区小说| 亚洲av综合色区一区| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日韩强制内射视频| 美女中出高潮动态图| 七月丁香在线播放| 又爽又黄a免费视频| 精品久久久久久久久亚洲| 国产中年淑女户外野战色| 精品熟女少妇av免费看| 国产免费视频播放在线视频| 精品酒店卫生间| 一级二级三级毛片免费看| 男人添女人高潮全过程视频| 欧美精品国产亚洲| 亚洲三级黄色毛片| 国产亚洲91精品色在线| 中文字幕久久专区| 大码成人一级视频| 一级爰片在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 欧美97在线视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 美女中出高潮动态图| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产91av在线免费观看| 最新中文字幕久久久久| 如何舔出高潮| 欧美bdsm另类| 欧美极品一区二区三区四区| 婷婷色麻豆天堂久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 熟女电影av网| 国产精品久久久久成人av| 久久久久久久久久人人人人人人| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲国产日韩一区二区| 国产黄片视频在线免费观看| 免费大片黄手机在线观看| 18禁在线播放成人免费| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲欧洲日产国产| 少妇的逼水好多| 国产精品三级大全| av视频免费观看在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 精品一品国产午夜福利视频| 多毛熟女@视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| xxx大片免费视频| av在线老鸭窝| 五月玫瑰六月丁香| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 我的女老师完整版在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 少妇丰满av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一区在线观看完整版| 国产亚洲一区二区精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 成人黄色视频免费在线看| 免费看av在线观看网站| 欧美日韩精品成人综合77777| 91精品国产九色| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 91aial.com中文字幕在线观看| a级毛色黄片| av在线观看视频网站免费| 99热全是精品| 深夜a级毛片| 久久99热6这里只有精品| 只有这里有精品99| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 青春草视频在线免费观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 午夜免费观看性视频| 在线观看三级黄色| 国产伦精品一区二区三区四那| 夫妻午夜视频| 97超碰精品成人国产| 我要看日韩黄色一级片| 国产成人freesex在线| 久久99热这里只频精品6学生| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产免费福利视频在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产亚洲5aaaaa淫片| 干丝袜人妻中文字幕| 成人黄色视频免费在线看| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩精品有码人妻一区| 精品亚洲成国产av| 亚洲av福利一区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产精品欧美亚洲77777| 中文字幕久久专区| 国产亚洲最大av| 中国美白少妇内射xxxbb| 观看美女的网站| 亚洲无线观看免费| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 不卡视频在线观看欧美| 欧美成人a在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 国产免费福利视频在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 久久久午夜欧美精品| 妹子高潮喷水视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产在线一区二区三区精| 最近最新中文字幕免费大全7| 丝袜喷水一区| 97在线视频观看| 免费看不卡的av| 国产精品女同一区二区软件| 看十八女毛片水多多多| 2021少妇久久久久久久久久久| 高清黄色对白视频在线免费看 | 久久亚洲国产成人精品v| 色视频在线一区二区三区| 亚洲中文av在线| 精品久久久精品久久久| 国产熟女欧美一区二区| 精品人妻熟女av久视频| 欧美日韩在线观看h| 纯流量卡能插随身wifi吗| 五月伊人婷婷丁香| a级毛色黄片| 国产乱人视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 伦理电影免费视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久国产乱子免费精品| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美最新免费一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 我的老师免费观看完整版| 国产中年淑女户外野战色| 少妇人妻一区二区三区视频| 又爽又黄a免费视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲成色77777| 99久国产av精品国产电影| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 美女高潮的动态| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲三级黄色毛片| 国产综合精华液| 亚洲成色77777| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品福利在线免费观看| 午夜精品国产一区二区电影| 最近最新中文字幕免费大全7| h视频一区二区三区| 欧美性感艳星| 大香蕉久久网| 亚洲欧美清纯卡通| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久99热6这里只有精品| 精品国产三级普通话版| 日韩视频在线欧美| 在线观看美女被高潮喷水网站| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲四区av| 2022亚洲国产成人精品| 国产久久久一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 欧美+日韩+精品| 美女内射精品一级片tv| 久久热精品热| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久久久视频综合| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品久久久久久av不卡| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲av综合色区一区| 亚洲综合色惰| 欧美变态另类bdsm刘玥| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人精品久久久久久| a级毛色黄片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 青春草视频在线免费观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品一区二区在线观看99| 国产片特级美女逼逼视频| 中文欧美无线码| 99久久人妻综合| 色哟哟·www| 久久鲁丝午夜福利片| av不卡在线播放| 亚洲精品,欧美精品| 国产乱人偷精品视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 深夜a级毛片| 老女人水多毛片| 在线观看国产h片| 欧美最新免费一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 黄片wwwwww| 久久久久久久亚洲中文字幕| 天堂8中文在线网| 高清午夜精品一区二区三区| 久久久久性生活片| 日韩制服骚丝袜av| 免费看不卡的av| 美女内射精品一级片tv| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久精品国产亚洲av天美| 多毛熟女@视频| 成人免费观看视频高清| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 在线 av 中文字幕| 美女主播在线视频| 国产色婷婷99| 国精品久久久久久国模美| 我的老师免费观看完整版| 国产v大片淫在线免费观看| 黑人高潮一二区| 亚洲久久久国产精品| 国产亚洲精品久久久com| 街头女战士在线观看网站| 老女人水多毛片| 偷拍熟女少妇极品色| 大陆偷拍与自拍| 国产精品国产三级国产专区5o| 日日撸夜夜添| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av国产久精品久网站免费入址| 国产黄色免费在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久久久性生活片| 中国三级夫妇交换| 91狼人影院| 毛片女人毛片| 欧美日韩精品成人综合77777| 联通29元200g的流量卡| 久久6这里有精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲国产欧美人成| 夫妻性生交免费视频一级片| 日韩一区二区三区影片| 97超视频在线观看视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 不卡视频在线观看欧美| 一二三四中文在线观看免费高清| 波野结衣二区三区在线| 2021少妇久久久久久久久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 少妇 在线观看| 国产成人免费观看mmmm| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| av不卡在线播放| 婷婷色综合大香蕉| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 美女福利国产在线 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 最黄视频免费看| 久久婷婷青草| 一区二区三区免费毛片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 丝袜喷水一区| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| videos熟女内射| 午夜免费鲁丝| 高清午夜精品一区二区三区| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品无大码| 老熟女久久久| 亚洲av福利一区| 久久毛片免费看一区二区三区| 色视频在线一区二区三区| h日本视频在线播放| 国内精品宾馆在线| 亚洲精品自拍成人| 久久精品久久久久久久性| 26uuu在线亚洲综合色| 日日啪夜夜爽| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 岛国毛片在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| 日韩欧美 国产精品| 成年免费大片在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 在线观看人妻少妇| av一本久久久久| 黄色一级大片看看| 国产在视频线精品| freevideosex欧美| 国产爽快片一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片 | 中国国产av一级| 亚洲色图av天堂| 国产黄片美女视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲美女黄色视频免费看| 久久精品国产亚洲av天美| 久久久国产一区二区| 亚洲性久久影院| 国模一区二区三区四区视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 亚洲无线观看免费| 简卡轻食公司| 国产成人91sexporn| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲精品第二区|