• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙及抗菌性研究

    2011-11-14 15:35:20楊仁黨李雪云
    食品工業(yè)科技 2011年1期
    關(guān)鍵詞:葡萄糖氧化酶葡萄糖淀粉

    虢 杰,楊仁黨,*,李雪云

    (1.華南理工大學(xué)制漿造紙國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640;2.廣東省造紙技術(shù)與裝備公共實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640)

    葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙及抗菌性研究

    虢 杰1,2,楊仁黨1,2,*,李雪云1,2

    (1.華南理工大學(xué)制漿造紙國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640;2.廣東省造紙技術(shù)與裝備公共實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510640)

    葡萄糖氧化酶是氧化葡萄糖的專一催化酶,具有脫氧、殺菌的功能。通過(guò)定性和定量抗菌實(shí)驗(yàn)方法研究了葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系在以淀粉作為載體和不混合淀粉時(shí)施涂于紙張表面的抗菌效果。定性抗菌實(shí)驗(yàn)表明,葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙具有良好的抗菌效果。而定量檢測(cè)結(jié)果表明,pH等于5.5時(shí),35℃反應(yīng)10min,不添加淀粉時(shí),葡萄糖氧化酶最小的抑菌濃度約為70U/m2,葡萄糖足量時(shí),酶用量越高,抗菌率越好;添加0.7g/m2淀粉后,最小抑菌濃度提高到約650U/m2。淀粉對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌效果有較大影響,主要原因是淀粉能夠促進(jìn)細(xì)菌的繁殖。

    葡萄糖/葡萄糖氧化酶,抗菌紙,抗菌性,定性與定量抗菌實(shí)驗(yàn)

    抗菌紙是各種具有抑制危害紙品微生物能力的功能性紙張的統(tǒng)稱[1],其抗菌效果來(lái)源于抗菌劑。一般來(lái)講,抗菌劑在低濃度時(shí)只有抑菌作用,而濃度增大或作用時(shí)間延長(zhǎng)時(shí),可起到殺菌作用[2]。抗菌紙用于食品包裝時(shí),可以使被包裝的食品、果蔬等延長(zhǎng)保質(zhì)期而不變質(zhì)。也就是說(shuō),食品用抗菌包裝紙基本功能是:防止微生物的污染和昆蟲(chóng)的侵入,保護(hù)商品在生產(chǎn)和銷售過(guò)程中不變質(zhì)[3-4]。目前,超市里的生鮮食品,為了保持新鮮,延遲變質(zhì)時(shí)間,通常添加一些化學(xué)物質(zhì)或采用特殊的包裝技術(shù)來(lái)延長(zhǎng)貨架期,如添加二氧化氯做為保鮮劑,采用真空預(yù)處理和氣調(diào)包裝技術(shù)都能達(dá)到較好的延長(zhǎng)貨架期的目的[5-9]。但這些常規(guī)方法也存在不足的地方,有些生產(chǎn)成本較高,有些保鮮效果一般,貨架存放時(shí)間較短,影響產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)性。葡萄糖氧化酶是一種需氧脫氫酶,能專一地將β-D-葡萄糖(Glucose)氧化成為葡萄糖酸和過(guò)氧化氫,在食品保鮮、醫(yī)藥檢測(cè)等許多方面得到廣泛的應(yīng)用[10-12],其化學(xué)反應(yīng)機(jī)理如下:

    此外,Mattila Tiina和M.Sandholm[13]的研究結(jié)果顯示,葡萄糖/葡萄糖氧化酶的組合具有明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)抑制作用。盡管在生鮮產(chǎn)品如牛肉、雞等表面噴灑葡萄糖氧化酶能起到抑菌、抗菌效果,延長(zhǎng)產(chǎn)品的貨架時(shí)間,但工藝要求嚴(yán)格,質(zhì)量難以保證。本文將葡萄糖/葡萄糖氧化酶施涂于紙張表面,并探討其抗菌性,為開(kāi)發(fā)生鮮產(chǎn)品抗菌保鮮包裝紙?zhí)峁┘夹g(shù)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    β-D-葡萄糖(Glucose) 分析純;葡萄糖氧化酶(GOD) 活性245U/mg,sigma公司產(chǎn)品,購(gòu)自廣州杰順生物科技有限公司;玉米原淀粉 水分90%;實(shí)驗(yàn)菌 大腸桿菌(Enterobacter cloacae);培養(yǎng)基0.5%氯化鈉,0.5%牛肉膏,1.5%蛋白胨,1%瓊脂粉加去離子水配制而成;肉湯培養(yǎng)基 將所有成分溶于去離子水中,定容至1000mL,調(diào)節(jié)pH為7.2~7.4,121℃下高壓滅菌20min取出,置于無(wú)菌室保存待用;瓊脂肉湯培養(yǎng)基 步驟同上,在無(wú)菌室中操作,將滅完菌后的瓊脂肉湯培養(yǎng)基溶液倒入滅菌平皿制成平皿培養(yǎng)基,培養(yǎng)基冷卻凝固后翻轉(zhuǎn)放置,1d后觀察是否有雜菌,如果沒(méi)有則可放于無(wú)菌室待用。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 抗菌紙制備 將去離子水配好的Glucose溶液、GOD溶液和糊化淀粉溶液在pH5.5和35℃恒溫下反應(yīng)預(yù)定時(shí)間后,全部施涂于直徑9cm的過(guò)濾紙表面上,用刮棒刮平,使液體均勻吸收且不流出來(lái),放入干凈托盤(pán)中,在30℃真空干燥箱干燥一夜。

    1.2.2 菌液制備 采用美國(guó)AATCC 100兩步法[14]在37℃下活化菌種,制取所需濃度的菌液。

    1.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)與檢測(cè)

    1.2.3.1 抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)法定性檢測(cè)[15-16]用接種環(huán)將大腸桿菌菌液接種到制備好的培養(yǎng)基上并涂勻,覆蓋上事先剪好的圓形紙片,將培養(yǎng)皿倒置在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)19h取出,根據(jù)抑菌環(huán)的大小來(lái)測(cè)定抗菌性能。

    1.2.3.2 吸收法定量檢測(cè)[14,16]將抗菌紙和對(duì)照樣紙片放入三角燒瓶中后吸收定量的菌液,37℃下恒溫培養(yǎng)20±2h,或者不培養(yǎng)固定時(shí)間直接用肉湯培養(yǎng)基溶液把紙片上的細(xì)菌洗滌下來(lái),稀釋適當(dāng)濃度后接種到平皿培養(yǎng)基上,然后倒置在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)19h取出,進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算公式為:

    細(xì)菌減少百分率(抗菌率)(%)=(“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)-定期培養(yǎng)試樣上細(xì)菌數(shù))/“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)×100%

    或細(xì)菌減少百分率(%)=(“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù)-定期培養(yǎng)試樣上細(xì)菌數(shù))/“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù)×100%

    或細(xì)菌減少百分率(%)=[(“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)+“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù))/2-定期培養(yǎng)試樣上細(xì)菌數(shù)]/[(“0”接觸時(shí)間試樣上細(xì)菌數(shù)+“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上細(xì)菌數(shù))/2?×100%

    如果“0”接觸時(shí)間試樣上的細(xì)菌數(shù)和“0”接觸時(shí)間對(duì)照樣上的細(xì)菌數(shù)差別較大時(shí),取較大值;如果兩者差別不大時(shí),取平均值。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 抑菌環(huán)法定性抗菌效果

    取葡萄糖用量3500、21000μmol/m2絕干紙,葡萄糖氧化酶用量3500、7000、21000U/m2(如表1中實(shí)驗(yàn)號(hào)1~6所示),pH 5.5,35℃下反應(yīng)10min后施涂于濾紙上,用抑菌環(huán)法定性檢測(cè)抗菌效果。

    表1 不同比例葡萄糖/GOD/淀粉組合的抗菌效果

    從表1看出,濾紙面積3.14cm2,1、3、5號(hào)抑菌環(huán)面積分別為7.61、4.90、2.17cm2,抗菌、抑菌效果很明顯,其葡萄糖用量為3.78g/m2,葡萄糖氧化酶用量分別為21000、7000、3500U/m2。因?yàn)槠咸烟茄趸缸鳛榇呋瘎?,其用量決定催化能力,從而影響生成產(chǎn)物量和抗菌效果;而葡萄糖用量0.63g/m2時(shí),無(wú)論葡萄糖氧化酶用量是3500U/m2或是21000U/m2,都沒(méi)有明顯的抑菌環(huán)出現(xiàn)。

    同樣取葡萄糖用量21000μmol/m2,葡萄糖氧化酶用量如表1中實(shí)驗(yàn)號(hào)7~9所示,淀粉用量0.7g/m2。與1、3、5號(hào)對(duì)比,相同的葡萄糖和葡萄糖氧化酶用量時(shí),7、8、9號(hào)的抑菌環(huán)面積都相對(duì)較小,抗菌效果不如未添加淀粉的明顯,加入淀粉載體后大大降低了抗菌效果。

    2.2 葡萄糖/葡萄糖氧化酶的抗菌性定量分析

    為了對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶的抗菌效果進(jìn)行更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)分析,采用定量吸收法檢測(cè)。首先優(yōu)化葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的反應(yīng)時(shí)間,實(shí)驗(yàn)中取葡萄糖用量350μmol/m2,葡萄糖氧化酶用量350U/m2,反應(yīng)時(shí)間和抗菌率見(jiàn)表2。催化反應(yīng)1min,抗菌紙的抗菌率為3.4%,反應(yīng)5min為23.2%,比反應(yīng)1min的效果有很大提高,這說(shuō)明1min的反應(yīng)很不完全;反應(yīng)10min時(shí)抗菌率也比反應(yīng)5min的效果有明顯提高。對(duì)于以下實(shí)驗(yàn),反應(yīng)時(shí)間選擇10min。

    表2 不同GOD/葡萄糖催化反應(yīng)時(shí)間的抗菌率

    2.2.1 葡萄糖與抗菌率的關(guān)系 圖1表示葡萄糖氧化酶用量350U/m2時(shí),葡萄糖用量與抗菌率的關(guān)系。抗菌率隨著葡萄糖用量的增加而提高,葡萄糖用量低于150μmol/m2,對(duì)細(xì)菌沒(méi)有抗菌效果,葡萄糖用量840μmol/m2,抗菌率達(dá)到80%。葡萄糖是反應(yīng)物,其用量直接影響生成物的量。繼續(xù)增加葡萄糖用量,抗菌率沒(méi)有明顯提高。由于酶用量的限制,即使繼續(xù)增加葡萄糖用量,抗菌率也基本保持不變。一定的酶濃度時(shí),葡萄糖濃度在一定范圍內(nèi),對(duì)抗菌率有很大的影響。

    圖1 葡萄糖用量對(duì)抗菌效果的影響

    2.2.2 葡萄糖氧化酶與抗菌率的關(guān)系 用固定的過(guò)量葡萄糖,檢測(cè)葡萄糖氧化酶對(duì)抗菌效果的影響(圖2)。葡萄糖用量2800μmol/m2,葡萄糖氧化酶用量很低時(shí),抗菌率隨著葡萄糖氧化酶用量的增加快速上升。當(dāng)葡萄糖氧化酶濃度大于70U/m2時(shí),檢測(cè)結(jié)果顯示大腸桿菌的生長(zhǎng)受到抑制,在抗菌紙上培養(yǎng)20h后,大腸桿菌的數(shù)目比未培養(yǎng)20h的對(duì)照樣上的細(xì)菌數(shù)目減少,此時(shí)的酶濃度可以認(rèn)為是最小抑菌濃度(MIC)。當(dāng)酶用量達(dá)到350U/m2,抗菌率達(dá)到84%,酶用量550U/m2時(shí),抗菌率91%,之后抗菌率雖然隨著酶用量的增加繼續(xù)提高,但增速與前面的相比明顯減慢。

    圖2 葡萄糖氧化酶用量對(duì)抗菌效果的影響

    2.2.3 淀粉對(duì)抗菌效果的影響 淀粉是目前常用的表面施膠劑,可以利用淀粉作為載體把葡萄糖/葡萄糖氧化酶施涂到紙基表面。實(shí)驗(yàn)中,葡萄糖用量與葡萄糖氧化酶用量比為2∶1,溶液在相同的溫度和pH條件下反應(yīng)10min后,與糊化淀粉溶液混合均勻施涂到濾紙表面,抗菌率如圖3所示。

    葡萄糖氧化酶用量700U/m2時(shí),未添加淀粉的抗菌紙抗菌率為95%,添加0.7g/m2淀粉后抗菌紙的抗菌率只有2%,淀粉施膠劑對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌性能有很大影響。最小抑菌濃度也有明顯變化,未添加淀粉時(shí)為70U/m2,添加0.7g/m2淀粉時(shí)提高到650U/m2。從曲線可以看出,用淀粉作為載體,繼續(xù)增加葡萄糖和葡萄糖氧化酶用量可以提高抗菌效果。但是,由于淀粉是細(xì)菌生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物,會(huì)促進(jìn)細(xì)菌的生產(chǎn),從而會(huì)影響抗菌紙的抗菌效果,這與抑菌環(huán)定性分析結(jié)果相符。

    圖3 淀粉用量對(duì)抗菌效果的影響

    3 結(jié)論

    定性和定量抗菌實(shí)驗(yàn)表明,葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌紙具有良好的抗菌性能。當(dāng)pH為5.5,35℃下催化反應(yīng)10min時(shí),反應(yīng)較充分,抗菌效果與葡萄糖、葡萄糖氧化酶和淀粉施載體用量有關(guān)。

    葡萄糖氧化酶濃度一定時(shí),葡萄糖濃度在一定范圍內(nèi),對(duì)抗菌率有很大的影響,超過(guò)此范圍,抗菌率基本保持不變。葡萄糖用量充分時(shí),抗菌率隨著葡萄糖氧化酶用量的增加而提高,酶用量550U/m2時(shí),無(wú)淀粉施涂的抗菌紙抗菌率可超過(guò)90%。

    不添加淀粉時(shí),葡萄糖氧化酶最小抑菌濃度約為70U/m2;用0.7g/m2淀粉施膠后,最小抑菌濃度提高到約650U/m2,淀粉對(duì)葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌效果有較大的影響。添加淀粉后,葡萄糖/葡萄糖氧化酶體系的抗菌效果變差,主要原因是淀粉促進(jìn)了細(xì)菌的生長(zhǎng),因此今后可以選用其它的不會(huì)促進(jìn)細(xì)菌繁殖的合成化合物如聚乙烯醇作為載體等進(jìn)行研究。

    [1]周亮.抗菌紙的研究進(jìn)展[J].包裝工程,2005,26(5):103-108.

    [2]賈冬舒,楊飛華,童忠良.納米抗菌材料制備方法與應(yīng)用研究進(jìn)展[J].建筑裝飾材料世界,2003(Z1):59-61.

    [3]陳德衛(wèi),梁超雄.包裝紙的發(fā)展前景與發(fā)展對(duì)策[J].造紙科學(xué)與技術(shù),2005,24(1):62-65.

    [4]向賢偉.食品包裝技術(shù)[M].長(zhǎng)沙:國(guó)防科技大學(xué)出版社,2002:1-4.

    [5]周大成.保鮮紙[P].中國(guó)專利:88206674,1989-11-29.

    [6]鄧東泉,孫恒,肖尤明,等.真空預(yù)冷技術(shù)的現(xiàn)狀和發(fā)展前景[J].食品工業(yè)科學(xué)與技術(shù),2002,23(7):73-75.

    [7]王如林,夏睿.真空預(yù)冷技術(shù)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用[J].廣州食品工業(yè)科技,2002,15(1):54-55.

    [8]敘文達(dá),程裕東,岑偉平,等.食品軟包裝材料與技術(shù)[M].北京:機(jī)械工業(yè)出版社,2003:103-107,209-211.

    [9]黃壯霞,張愁,朱丹實(shí),等.MAP結(jié)合真空預(yù)處理延長(zhǎng)鮮牛肉貨架期[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2005,24(3):22-26.

    [10]張樹(shù)政.酶制劑工業(yè)(下冊(cè))[M].第二版.北京:科學(xué)出版社,1998:671-698.

    [11]譚斌.酶在食品保鮮中的應(yīng)用[J].食品科技,1998(5):32-33.

    [12]黃惠芝,黃春波.葡萄糖氧化酶在啤酒生產(chǎn)中的應(yīng)用研究[J].食品科學(xué),1998,19(11):21-24.

    [13]Tiina Mattila,Sandholm M.Antibacterial effect of the glucose oxidase-glucose system on food-poisoning organisms[J].International Journal of Food Microbiology,1989(8):165-174.

    [14] AATCC100:1999.Antibacterial Finishes on Textile Materials:Assessment of[S].

    [15]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部消毒技術(shù)規(guī)范(2002)[S].

    [16]JIS L 1902:2002.Testing for antibacterial activity and efficacy on tetile product[S].

    Study on glucose/glucose oxidase antibacterial paper and its antimicrobial property

    GUO Jie1,2,YANG Ren-dang1,2,*,LI Xue-yun1,2
    (1.State Key Laboratory of Pulpamp;Papermaking Engineering,South China University of Technology,Guangzhou 510640,China;2.Guangdong Public Laboratory of Process Technology and Equipment Team,South China University of Technology,Guangzhou 510640,China)

    Glucose oxidase is specific for β-D-glucose,and of oxygen removal and antibacterial functions. Antimicrobial effects of paper coated via glucose/glucose oxidase with/without starch were investigated by means of qualitative and quantitative assay.Qualitative assay phenomenon showed that glucose/enzyme paper was capable of inhibiting bacteria growth to betterextent.The experimentalresults from quantitative assay demonstrated that minimal inhibition concentration(MlC)was about 70U per square meter under the conditions of pH 5.5,35 centigrade,10 minutes reaction time,and without starch.And that if the dosage level of enzyme rises with saturation of glucose,the germproof effects could be more remarkable.However,MlC was up to round 650U per square meter with 0.7 gram per square meter starch addition.The starch hereby imposed a significant negative effect on the antibacterial properties of glucose/enzyme paper.This owes to starch nutriment contributing to bacteria growth.

    glucose/glucose oxidase;antibacterial paper;antimicrobial property;qualitative and quantitative assay

    TS201.1

    A

    1002-0306(2011)01-0124-04

    2009-12-25 *通訊聯(lián)系人

    虢杰(1985-),男,碩士研究生,主要從事造紙技術(shù)與特種紙方面的研究。

    猜你喜歡
    葡萄糖氧化酶葡萄糖淀粉
    從人工合成淀粉說(shuō)開(kāi)去
    葡萄糖漫反射三級(jí)近紅外光譜研究
    葡萄糖氧化酶的研究進(jìn)展及其在豬生產(chǎn)中的應(yīng)用分析
    飼料博覽(2019年7期)2019-02-12 22:28:15
    齒輪狀SBA-15的制備及其對(duì)葡萄糖氧化酶的吸附行為研究
    糖耐量試驗(yàn)對(duì)葡萄糖用量的要求
    葡萄糖氧化酶在斷奶仔豬日糧上的應(yīng)用研究進(jìn)展
    MMT/淀粉-g-PAA的制備及其對(duì)鉻(Ⅵ)的吸附
    葡萄糖對(duì)Lactobacillus casei KDL22發(fā)酵及貯藏性能的影響
    蕉藕淀粉與薯類淀粉特性對(duì)比研究
    多發(fā)性肺硬化性血管瘤18~F-脫氧葡萄糖PET/CT顯像1例
    xxxwww97欧美| 国产av一区二区精品久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 大型av网站在线播放| 国产国语露脸激情在线看| 黑人欧美特级aaaaaa片| av免费在线观看网站| 男人舔女人的私密视频| 国产精品九九99| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 狂野欧美激情性xxxx| 中文字幕高清在线视频| 亚洲 国产 在线| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 免费在线观看影片大全网站| 国产欧美日韩一区二区三| 成人午夜高清在线视频 | 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 久久精品91无色码中文字幕| 国产成人欧美在线观看| 国产亚洲精品一区二区www| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲人成电影免费在线| 久久青草综合色| 午夜两性在线视频| 岛国视频午夜一区免费看| 一级片免费观看大全| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看舔阴道视频| 国产成人欧美| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产欧美日韩一区二区精品| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲电影在线观看av| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲七黄色美女视频| 成年免费大片在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 成人三级黄色视频| 大型av网站在线播放| 精品久久蜜臀av无| 又黄又爽又免费观看的视频| 日本 av在线| 大型av网站在线播放| www国产在线视频色| 一级毛片高清免费大全| 国产精品影院久久| 99国产综合亚洲精品| 亚洲激情在线av| 大型av网站在线播放| av片东京热男人的天堂| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲美女黄片视频| av视频在线观看入口| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲自拍偷在线| 91成年电影在线观看| 女警被强在线播放| 中文字幕av电影在线播放| 少妇粗大呻吟视频| or卡值多少钱| 色av中文字幕| 国产视频一区二区在线看| 一进一出好大好爽视频| 久久久国产成人免费| 怎么达到女性高潮| 欧美又色又爽又黄视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩欧美国产在线观看| 国产一区二区三区视频了| 长腿黑丝高跟| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 十八禁网站免费在线| 精品欧美国产一区二区三| 我的亚洲天堂| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 老司机午夜十八禁免费视频| 激情在线观看视频在线高清| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美又色又爽又黄视频| 日韩av在线大香蕉| 亚洲人成网站高清观看| 色哟哟哟哟哟哟| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久狼人影院| www.www免费av| 欧美久久黑人一区二区| www.自偷自拍.com| 免费观看人在逋| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 搞女人的毛片| 欧美激情 高清一区二区三区| 一本一本综合久久| 久久精品国产综合久久久| 国产三级在线视频| 欧美成人性av电影在线观看| 成人18禁在线播放| 国产高清视频在线播放一区| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美丝袜亚洲另类 | 韩国av一区二区三区四区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线观看午夜福利视频| 欧美一级a爱片免费观看看 | 制服丝袜大香蕉在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美日韩精品网址| www.999成人在线观看| 99久久国产精品久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| 99re在线观看精品视频| 一本一本综合久久| 国产免费男女视频| 久久中文看片网| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩国内少妇激情av| 欧美黑人精品巨大| 欧美日韩一级在线毛片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| avwww免费| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美zozozo另类| 在线播放国产精品三级| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 一个人免费在线观看的高清视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久久久九九精品二区国产 | 女人被狂操c到高潮| 757午夜福利合集在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 又大又爽又粗| 中文资源天堂在线| 1024香蕉在线观看| 很黄的视频免费| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 午夜精品在线福利| 搞女人的毛片| 亚洲精品美女久久av网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| www日本在线高清视频| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 欧美激情久久久久久爽电影| 日韩三级视频一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www| 色老头精品视频在线观看| 1024香蕉在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美精品亚洲一区二区| 美女高潮到喷水免费观看| 免费看日本二区| 国产精品98久久久久久宅男小说| a级毛片a级免费在线| 午夜福利成人在线免费观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 最近最新免费中文字幕在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| av在线播放免费不卡| 大香蕉久久成人网| 超碰成人久久| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美黄色淫秽网站| 久久婷婷成人综合色麻豆| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲国产中文字幕在线视频| 午夜福利高清视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 怎么达到女性高潮| 亚洲片人在线观看| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产av不卡久久| 亚洲成国产人片在线观看| 久热爱精品视频在线9| 国产成年人精品一区二区| 在线看三级毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 国产三级黄色录像| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 此物有八面人人有两片| 桃红色精品国产亚洲av| 成人精品一区二区免费| 日韩欧美一区视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲九九香蕉| 久久国产精品人妻蜜桃| www日本黄色视频网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 岛国在线观看网站| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产成人欧美在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日日夜夜操网爽| 国产成人系列免费观看| 免费在线观看黄色视频的| 99国产精品一区二区三区| 99热只有精品国产| 精品日产1卡2卡| 国产成人欧美| 99riav亚洲国产免费| 韩国av一区二区三区四区| 精品国产美女av久久久久小说| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 午夜亚洲福利在线播放| 一区二区三区国产精品乱码| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 亚洲熟女毛片儿| 亚洲性夜色夜夜综合| 日韩欧美国产在线观看| 午夜福利欧美成人| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 91成年电影在线观看| 级片在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜 | 精品国产亚洲在线| cao死你这个sao货| 国产亚洲精品av在线| 亚洲第一青青草原| 校园春色视频在线观看| 最好的美女福利视频网| av福利片在线| 色老头精品视频在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 桃色一区二区三区在线观看| 精品福利观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 中文字幕av电影在线播放| 国产av一区二区精品久久| x7x7x7水蜜桃| 国产精品免费视频内射| 精品免费久久久久久久清纯| 91在线观看av| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲精品国产一区二区精华液| 伊人久久大香线蕉亚洲五| www.www免费av| 无限看片的www在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99久久综合精品五月天人人| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日韩大码丰满熟妇| 手机成人av网站| 久久久久久大精品| 欧美中文综合在线视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲精品在线美女| 国产成人影院久久av| 不卡av一区二区三区| 亚洲中文av在线| 在线播放国产精品三级| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| a级毛片在线看网站| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 日韩欧美在线二视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 18美女黄网站色大片免费观看| 中文字幕久久专区| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久国产成人精品二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美zozozo另类| netflix在线观看网站| 免费高清视频大片| 日本一本二区三区精品| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲avbb在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 中国美女看黄片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲成人国产一区在线观看| 精品久久久久久成人av| 国产不卡一卡二| 亚洲人成伊人成综合网2020| 97碰自拍视频| 无人区码免费观看不卡| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲成av人片免费观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 满18在线观看网站| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲av电影在线进入| 国内精品久久久久精免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| av片东京热男人的天堂| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 91国产中文字幕| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品精品国产色婷婷| 丁香六月欧美| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲人成网站高清观看| 免费电影在线观看免费观看| www.精华液| 波多野结衣av一区二区av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲专区中文字幕在线| bbb黄色大片| 老汉色∧v一级毛片| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 日韩av在线大香蕉| 午夜激情av网站| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品精品国产色婷婷| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 88av欧美| 怎么达到女性高潮| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品野战在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 成人欧美大片| 美女高潮到喷水免费观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜久久久在线观看| 国产在线观看jvid| 国产亚洲欧美精品永久| 婷婷六月久久综合丁香| 国产片内射在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 成人亚洲精品av一区二区| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 亚洲成人久久性| 两性夫妻黄色片| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲精华国产精华精| 老司机在亚洲福利影院| 1024视频免费在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲,欧美精品.| 高清在线国产一区| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久热在线av| 老汉色av国产亚洲站长工具| 窝窝影院91人妻| 哪里可以看免费的av片| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜福利免费观看在线| av电影中文网址| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品免费一区二区三区在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 在线免费观看的www视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 岛国视频午夜一区免费看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3 | 老司机福利观看| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美黄色淫秽网站| 免费看a级黄色片| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产男靠女视频免费网站| 又大又爽又粗| 亚洲国产精品合色在线| 国产成人精品久久二区二区91| 9191精品国产免费久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久伊人香网站| 两个人免费观看高清视频| 国产久久久一区二区三区| av欧美777| 午夜成年电影在线免费观看| 国产精品,欧美在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 波多野结衣高清作品| 国内精品久久久久精免费| 亚洲熟妇熟女久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 听说在线观看完整版免费高清| netflix在线观看网站| 亚洲九九香蕉| 欧美不卡视频在线免费观看 | 天堂影院成人在线观看| 深夜精品福利| 黄色毛片三级朝国网站| 久久中文字幕一级| 手机成人av网站| 1024视频免费在线观看| 欧美日韩黄片免| 在线观看日韩欧美| 男女午夜视频在线观看| 亚洲avbb在线观看| 久久中文看片网| 高潮久久久久久久久久久不卡| 99在线人妻在线中文字幕| 久久 成人 亚洲| a级毛片a级免费在线| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 久久久久久久久中文| 国产精品av久久久久免费| 99国产精品一区二区三区| 免费人成视频x8x8入口观看| 一区二区三区激情视频| 国产真实乱freesex| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 老司机午夜福利在线观看视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 伦理电影免费视频| 亚洲熟妇熟女久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| а√天堂www在线а√下载| 757午夜福利合集在线观看| 欧美黑人巨大hd| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久国产成人免费| 波多野结衣高清无吗| 成人国语在线视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| xxx96com| a级毛片a级免费在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一级片免费观看大全| 亚洲电影在线观看av| 精品熟女少妇八av免费久了| 无遮挡黄片免费观看| 国产激情久久老熟女| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 免费观看人在逋| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲五月婷婷丁香| 久久欧美精品欧美久久欧美| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 色综合婷婷激情| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一二三四在线观看免费中文在| 禁无遮挡网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产主播在线观看一区二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产精品爽爽va在线观看网站 | 成年人黄色毛片网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 午夜老司机福利片| 99re在线观看精品视频| 人人澡人人妻人| 成人免费观看视频高清| 亚洲最大成人中文| 在线观看免费日韩欧美大片| 韩国精品一区二区三区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩欧美三级三区| 黑人操中国人逼视频| cao死你这个sao货| 999精品在线视频| 亚洲欧美激情综合另类| 国产高清激情床上av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 亚洲性夜色夜夜综合| 激情在线观看视频在线高清| 后天国语完整版免费观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产久久久一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 天堂√8在线中文| 欧美日本视频| 中国美女看黄片| 午夜福利高清视频| 人妻久久中文字幕网| 99热只有精品国产| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲电影在线观看av| x7x7x7水蜜桃| 黄色女人牲交| 精品高清国产在线一区| 亚洲国产精品成人综合色| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲免费av在线视频| 在线永久观看黄色视频| 看片在线看免费视频| av视频在线观看入口| 国产99白浆流出| 两人在一起打扑克的视频| 国产免费av片在线观看野外av| 一级毛片精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | av有码第一页| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产av又大| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美大码av| 亚洲av电影在线进入| 国产精品99久久99久久久不卡| 在线观看日韩欧美| 在线观看一区二区三区| 窝窝影院91人妻| av视频在线观看入口| 亚洲精品中文字幕在线视频| 十分钟在线观看高清视频www| 国产一卡二卡三卡精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 高清毛片免费观看视频网站| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产精品一区二区精品视频观看| 黄色片一级片一级黄色片| 午夜a级毛片| 一级毛片精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 午夜福利高清视频| 国产成人啪精品午夜网站| 久久精品影院6| 757午夜福利合集在线观看| 好男人在线观看高清免费视频 | 日本一本二区三区精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久国产精品人妻蜜桃| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品国产亚洲在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久久久久久久久黄片| 香蕉久久夜色| 男人的好看免费观看在线视频 | 搡老妇女老女人老熟妇| 国产99白浆流出| 欧美一级毛片孕妇| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品国产高清国产av| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩欧美一区视频在线观看| 色综合婷婷激情| 亚洲精品久久国产高清桃花| 男女午夜视频在线观看| 两个人看的免费小视频| 精品免费久久久久久久清纯| 黄色 视频免费看| 精品日产1卡2卡| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 免费无遮挡裸体视频| 热99re8久久精品国产| 免费av毛片视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产亚洲av嫩草精品影院| 波多野结衣av一区二区av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 午夜福利高清视频| 黄色丝袜av网址大全| 免费观看人在逋| 身体一侧抽搐| 色综合欧美亚洲国产小说| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲色图av天堂| 免费在线观看成人毛片| 两个人免费观看高清视频| 在线观看舔阴道视频| 欧美乱妇无乱码| av在线播放免费不卡| 看黄色毛片网站| cao死你这个sao货| 国产精品影院久久| 日本一本二区三区精品| 满18在线观看网站| 嫩草影视91久久| 九色国产91popny在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 伦理电影免费视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 少妇粗大呻吟视频| 高清在线国产一区| 国产伦人伦偷精品视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲一区二区三区色噜噜| www.精华液| 久久中文字幕一级| 一区二区三区高清视频在线| 在线播放国产精品三级| 黄频高清免费视频| 大型黄色视频在线免费观看| 中文在线观看免费www的网站 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 嫩草影院精品99| 国产午夜福利久久久久久| 国产亚洲欧美精品永久| 免费高清在线观看日韩| 色哟哟哟哟哟哟| 成人18禁在线播放| 黄频高清免费视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产在线精品亚洲第一网站| 99久久无色码亚洲精品果冻| 午夜影院日韩av| 免费一级毛片在线播放高清视频|