獼猴桃提取物促進(jìn)小鼠離體腸段運(yùn)動(dòng)的初探

吳旻丹，陳 瑜，金邦荃

（南京師范大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)系，江蘇南京210097）

獼猴桃提取物促進(jìn)小鼠離體腸段運(yùn)動(dòng)的初探

吳旻丹，陳 瑜，金邦荃*

（南京師范大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)系，江蘇南京210097）

重點(diǎn)觀察獼猴桃不同提取成分對(duì)成年雄性小鼠離體小腸的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，獼猴桃提取液中主要含有糖分、有機(jī)酸和VC，而獼猴桃提取物中主要含有膳食纖維；正常成年雄性小鼠離體小腸的平均收縮頻率和收縮力分別是62.0 ±1.00次/min和3.5±0.01g，同等實(shí)驗(yàn)條件下，用獼猴桃提取液原液灌腸可明顯提高小腸收縮頻率和收縮力（p＜0.001），與陽(yáng)性參照物（乙酰膽堿）促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)的作用和效果十分近似。當(dāng)獼猴桃液濃縮2倍和5倍時(shí)，其作用于小腸的效果，尤其是收縮頻率更較乙酰膽堿顯著增加（p＜0.05）；獼猴桃提取物對(duì)小鼠離體腸段的收縮頻率和腸肌收縮力影響不如提取液。本研究提示，獼猴桃提取液隨著其有機(jī)酸和總糖濃度的升高，腸肌收縮頻率和腸肌收縮力升高。

離體腸段，腸運(yùn)動(dòng)，功效成分，獼猴桃提取物，小鼠

生理學(xué)研究認(rèn)為，人的胃腸蠕動(dòng)隨著年齡的增長(zhǎng)，進(jìn)入老年后逐漸衰退，表現(xiàn)為蠕動(dòng)減慢、便秘等。胃腸蠕動(dòng)緩慢不利于食物殘?jiān)扔卸居泻Τ煞峙懦鲶w外，而這些有毒有害成分在腸道內(nèi)的重吸收對(duì)機(jī)體造成有害的毒副作用，是老年期某些疾病、癌癥的誘因之一。近10年老年消化生理學(xué)的研究和功能性改善得到廣泛重視，尤其是利用食物功能性成分來(lái)增進(jìn)老年腸蠕動(dòng)是當(dāng)前的新興課題［1-3］。消化生理學(xué)的進(jìn)一步研究表明，胃腸蠕動(dòng)主要依賴于腸壁上的特殊感受器，當(dāng)給予適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或機(jī)械性刺激時(shí)，其腸粘膜和平滑肌的化學(xué)或機(jī)械感受器響應(yīng)食物刺激，腸肌運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)，引起明顯的蠕動(dòng)波［4］。獼猴桃（Actinidia）首載于《開(kāi)寶本草》，古時(shí)又稱藤梨、狐貍桃、猴子桃等。它的果實(shí)細(xì)嫩多汁，清香鮮美，酸甜宜人，營(yíng)養(yǎng)豐富［5］。食品分析發(fā)現(xiàn)其主要含有10%～18%可溶性固形物，如8%～14%總糖、1.4%～2.0%果酸、較高的維生素C（VC）等，及少量其它成分［6］。近年觀察到中老年婦女每天食用1～2顆獼猴桃，可明顯改善腸道生理功能，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，有利于食物殘?jiān)图S便的排出，從而在一定程度上改善中老年人消化道機(jī)能。本研究試圖通過(guò)科學(xué)研究初步探討獼猴桃改善胃腸蠕動(dòng)的生理機(jī)制和潛在的功效成分。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

樣品 選若干成熟、新鮮、果實(shí)良好的獼猴桃，去皮后榨汁過(guò)濾獲得提取液，采用酶法提取獲得提取物［7］，并于4℃保存待用。

JH-2型肌張力傳感器 北京航天工程研究所；BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 成都泰盟科技有限公司；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；麥?zhǔn)显〔?，?0mm培養(yǎng)皿 南京金慶祥儀器有限公司。

表1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取液與提取物功能成分分析 分別測(cè)定提取液總糖和還原糖含量（GB/T50009.7-2008，菲林法）［8］、總酸含量（GB/T 12293-1990，酸堿滴定法）［9］、VC含量（GB12392-1990，熒光分光光度法）［10］和pH（儀器法）；分別測(cè)定提取物干物質(zhì)含量（GB/T 12087-2008，重量法，DM）［11］、總膳食纖維含量（中性洗滌纖維，TF）、半纖維素和果膠含量（GB/T 5009.88-2008，酸性洗滌纖維即可消化膳食纖維，DF）［12］。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)小鼠與離體腸段制備 5只20±2g清潔級(jí)健康成年雄性ICR小鼠（南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），禁食24h后處死，剖腹分離腸道，分成若干約3cm長(zhǎng)腸段，置于臺(tái)氏液中備用。

1.2.3 離體實(shí)驗(yàn)的分組腸斷與條件設(shè)計(jì) 共分13組，詳見(jiàn)表1。為了保證實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性和結(jié)果的可靠性，其實(shí)驗(yàn)條件嚴(yán)格設(shè)計(jì)為在38±0.5℃臺(tái)氏液麥?zhǔn)显〔壑羞M(jìn)行。

先將離體腸段置于4±1℃臺(tái)氏液的培養(yǎng)皿中（4℃冰箱）備用；實(shí)驗(yàn)中將所用離體腸段移至38± 0.5℃麥?zhǔn)显〔壑?，并連接JH-2型肌張力傳感器和BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；檢測(cè)參數(shù)設(shè)定為電壓（G）20mV、電流頻率（F）20Hz、走紙速度5.00s/div；觀測(cè)離體腸段的運(yùn)動(dòng)狀況，以研究獼猴桃提取液和提取物刺激腸道蠕動(dòng)的初步生理學(xué)機(jī)制（測(cè)定指標(biāo)為收縮頻率和收縮力）。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)雙錄入，經(jīng)處理后在文中以±sD，采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件（序列號(hào)30078035519）進(jìn)行組間單因子方差分析（ANVOA）；組間性差異顯著時(shí)，進(jìn)行LSD多重比較［13］。

2 結(jié)果與討論

2.1 獼猴桃提取液/物成分分析

獼猴桃提取液含有豐富的小分子糖及有機(jī)酸，VC則隨著果實(shí)的熟化及儲(chǔ)藏期的延長(zhǎng)而迅速減少。其中提取液含有9.6%±0.20%總糖、7.9%±0.20%還原糖、1.3%±0.32mg/100mL總酸，pH3.4±0.21；其中總糖和還原糖以葡萄糖為基準(zhǔn)。

冷藏鮮果（硬果）VC含量可高達(dá)310mg/100g，但果實(shí)軟化可食后VC含量降低至140±2.81mg/100g；本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該果實(shí)16～17℃儲(chǔ)藏10d后，獼猴桃VC已不足鮮果的50%，表明獼猴桃在較低的室溫條件下儲(chǔ)藏，VC依然會(huì)大量丟失。因此，保藏期較長(zhǎng)的獼猴桃不能為人提供豐富的VC。

獼猴桃提取物中的干物質(zhì)、總膳食纖維、可消化膳食纖維及不消化膳食纖維含量分別是17.6% ± 2.03%、2.6%±0.13%、0.9%±0.07%和1.7%±0.06%，其中可消化膳食纖維占總膳食纖維的34.6%。

2.2 獼猴桃提取液/物刺激離體腸段運(yùn)動(dòng)的研究

2.2.1 生理和藥理?xiàng)l件下離體腸段的運(yùn)動(dòng) 如表2所示，本研究以38±0.5℃臺(tái)氏液在麥?zhǔn)显〔壑蟹跤x體腸段，所獲得的實(shí)驗(yàn)參數(shù)為離體腸段運(yùn)動(dòng)的正常生理參數(shù)，并以此為正常對(duì)照（CK）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在該條件下，離體腸段平均收縮頻率和收縮力分別為62.0±1.00次/min和3.5±0.01g。

本實(shí)驗(yàn)用1/萬(wàn)Adr和1/萬(wàn)Ach分別為腸壁α受體和M受體激動(dòng)劑，當(dāng)?shù)渭?mL 1/萬(wàn)Adr于離體腸段內(nèi)，38±0.5℃臺(tái)氏液孵育中的腸粘膜α受體明顯受到抑制而導(dǎo)致蠕動(dòng)明顯減弱，其收縮頻率被抑制了82.2%（p＜0.05*），收縮力也被抑制了11.4%，腸蠕動(dòng)波趨于平坦，故為本實(shí)驗(yàn)的陰性藥物對(duì)照。滴加1mL1/萬(wàn)Ach于離體腸段內(nèi)，作用于腸粘膜M受體，在38±0.5℃臺(tái)氏液孵育中，可使腸蠕動(dòng)增加，其腸肌收縮頻率和收縮力分別增加2.8倍（p＜0.05 *）和17.1%，故設(shè)計(jì)為陽(yáng)性藥物對(duì)照組。

2.2.2 獼猴桃提取液/物對(duì)離體腸段的刺激作用如表2所示，滴加等劑量不同稀釋比例的提取液于離體腸段內(nèi)，觀察4～8組的38±0.5℃臺(tái)氏液孵育中的腸蠕動(dòng)。研究發(fā)現(xiàn)，提取液濃度由高到低分別作用于離體腸段，結(jié)果表現(xiàn)為濃縮5倍和2倍的高劑量組（4、5組）提取液可極顯著刺激離體腸段的蠕動(dòng)；可見(jiàn)其收縮頻率極顯著增加，分別達(dá)到CK組的12.7倍和6.9倍（p＜0.001***），也是Ach組的5.4倍（p＜0.01**）和2.5倍（p＜0.05*），收縮力增加20%并略高于Ach作用的陽(yáng)性對(duì)照3組，表明獼猴桃濃縮液含有高濃度的有機(jī)酸和葡萄糖，作用于腸壁化學(xué)受體（可能是M受體）的效果顯著高于Ach的藥理學(xué)作用，具有極其顯著的刺激腸道蠕動(dòng)的作用。提取原液或2倍稀釋液設(shè)為中劑量組，當(dāng)給予同等劑量時(shí)，即具有刺激離體腸段蠕動(dòng)的功效。該結(jié)果顯示，中劑量提取液刺激離體腸段收縮頻率和收縮力與Ach組的作用十分接近，處于同一統(tǒng)計(jì)學(xué)水平；但其收縮頻率顯著高于CK組的2.7倍和2.5倍（p＜0.05*），收縮力增加了20%～23%。5倍稀釋的提取液設(shè)為低劑量組，用該稀釋液滴入離體腸段時(shí)，腸蠕動(dòng)得到改善，其收縮頻率和收縮力均較CK組增加；但其促進(jìn)腸蠕動(dòng)的功效因提取液濃度的降低而低于Ach組。

獼猴桃提取物的主要成分為膳食纖維。本實(shí)驗(yàn)將提取物（DM）分別稀釋1∶2～1∶50（9～13組），制備成懸浮液用于刺激離體腸段運(yùn)動(dòng)的研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，稀釋倍數(shù)低的3組（1∶2、1∶5和1∶10）懸浮液作用于離體腸段，可顯著改善腸肌的收縮頻率（p＜0.05*），適當(dāng)提高腸肌收縮力，但均未能達(dá)到Ach的作用效果。表明以膳食纖維為主的獼猴桃懸浮液改善腸蠕動(dòng)的效果遠(yuǎn)低于獼猴桃提取液，該結(jié)果提示膳食纖維對(duì)腸壁的機(jī)械性刺激而引起的腸壁機(jī)械感受器的響應(yīng)較弱。

表2 藥物對(duì)離體腸段運(yùn)動(dòng)的影響

3 結(jié)論

中醫(yī)認(rèn)為，獼猴桃果性寒，味酸、甘，能調(diào)理中氣、生津潤(rùn)燥，可用于治療消化不良、食欲不振［14］，具有促進(jìn)消化的作用。現(xiàn)代消化生理學(xué)指出，胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)由交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)系統(tǒng)和存在腸壁內(nèi)的腸神經(jīng)系統(tǒng)控制。目前研究認(rèn)為，胃腸道上主要存在膽堿能M受體、腎上腺素α受體和β受體、組胺受體及多種胃腸激素受體［15］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)獼猴桃提取液/物對(duì)小鼠離體腸肌的藥物作用及其作用機(jī)制進(jìn)行探討研究。

近現(xiàn)代對(duì)獼猴桃對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響方面報(bào)道甚少，故我們從獼猴桃對(duì)腸運(yùn)動(dòng)功能的影響方面進(jìn)行了研究。離體腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，獼猴桃提取液能促進(jìn)腸蠕動(dòng)，提高離體腸肌收縮力，作用效果同Ach，提示獼猴桃提取液可能通過(guò)直接興奮腸平滑肌運(yùn)動(dòng)而起到刺激平滑肌的作用，其作用可能與受體激活亦有一定關(guān)系，關(guān)于其對(duì)離體腸肌作用機(jī)理尚有待進(jìn)行深入的研究探討。獼猴桃提取液5個(gè)濃度梯度的比較性研究還發(fā)現(xiàn)，提取液濃度與離體腸段運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)度呈正比，表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。

獼猴桃提取液具有顯著的刺激小鼠離體腸段運(yùn)動(dòng)的功效，推測(cè)其能夠改善胃腸蠕動(dòng)，對(duì)于緩解中老年便秘具有良好的現(xiàn)實(shí)意義。

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［10］中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)總酸度測(cè)定方法［S］.GB/T 12293-1990.

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Effect of actinidia extract on small intestine movement of mice in vitro

WU Min-dan，CHEN Yu，JIN Bang-quan*
（Department of Food Science and Nutrition，Nanjing Normal University，Nanjing 210097，China）

The effect of different actinidia extracts on male mice small intestine in vitro was observed.The results showed that extract liquid mainly contained sugars，organic acids and VC，while the extract materials mainly contained dietary fiber.The normal contraction frequency and contractile force were 62±1.00 times/min and 3.53± 0.01g.Actinidia extract liquid can obviously increase contraction frequency and contractile force（p＜0.001），the effect was very similar to Ach.The effect of 2-fold and 5-fold extract liquid was very significant to Ach（p＜0.05），especially the contraction frequency.The extract materials can’t increase contraction frequency and contractile force as extract liquid.The research displayed that with the organic acids and total sugar concentration increasing，actinidia extract liquid stimulated the contraction frequency and contractile force heighten.

small intestine in vitro；intestinal movement；effective components；actinidia extract；mice

TS255.1

A

1002-0306（2011）01-0078-03

2009-10-12 *通訊聯(lián)系人

吳旻丹（1985-），女，碩士，研究方向：食品功能因子。