HPLC法測(cè)定刺五加軟膠囊中紫丁香苷的含量

葉 新 崔玉海 李紹銘 孫玉艷 李 男

（哈爾濱仁皇藥業(yè)有限公司，中藥提取物及中藥創(chuàng)新藥物研究黑龍江省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江省刺五加研究所，哈爾濱 150300）

刺五加軟膠囊是由刺五加浸膏、精制玉米油等成分混合制成的中藥軟膠囊，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的作用。臨床用于體虛乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多夢(mèng)。本文參考有關(guān)文獻(xiàn),建立了高效液相色譜法（HLPC）測(cè)定刺五加軟膠囊中紫丁香苷的含量方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作刺五加軟膠囊中紫丁香苷的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1100型高效液相色譜儀；TU-1901紫外分光光度計(jì) (北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；十萬(wàn)分之一天平(梅特勒)。

1.2 試藥。紫丁香苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供批號(hào)111574-200502供含量測(cè)定用)；刺五加軟膠囊（自制批號(hào):20100301、20100302、20100303規(guī)格為0.3g)；甲醇為色譜純,水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇：水（20:80）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μl，理論板數(shù)以紫丁香苷計(jì)不得低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取紫丁香苷對(duì)照品8.14mg，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配成濃度為162.8μg/ml的甲醇溶液。再精密量取該甲醇溶液5ml置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成含紫丁香苷81.4μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備。取本品10粒，除去膠皮取內(nèi)容物，精密稱定，取相當(dāng)于2粒的量，精密稱定。置250ml三角瓶中，加10ml正已烷，混合均勻后移入分液漏斗中，依次用20ml、10ml、10ml乙腈提取三次，合并乙腈層于蒸發(fā)皿上蒸發(fā)至干，用1ml甲醇溶解，取SPE-C18小柱（依次用10ml甲醇和10ml純化水洗滌，吹干），上樣，用甲醇洗脫至25ml容量瓶中，控制流速在1ml/min，定容，即得。

表1

2.4 線性關(guān)系考察

線性關(guān)系的考察。取紫丁香苷對(duì)照品用甲醇制成162.8μg/ml的溶液,精密量取此溶液1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分別置于 10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度,搖勻,在上述色譜條件下測(cè)定,記錄色譜圖,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=60.521X-80.375 r=0.9998。

結(jié)果表明,紫丁香苷在 16.28μg/ml～146.52μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.5 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法,取同一批已知含量樣品6(批號(hào):20100301)份，精密稱定相當(dāng)于1粒的量的樣品，再加入紫丁香苷對(duì)照品溶液10ml（81.4μg/ml），按照2.3項(xiàng)供試品制備方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.79%，RSD為1.03%，表明準(zhǔn)確度良。計(jì)算每份的回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液,進(jìn)樣10μl,重復(fù)6次進(jìn)樣,依法測(cè)定，其峰面積的RSD=0.65%(n=6)。結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(批號(hào)20100301)的供試品溶液，分別于室溫下放置 0、2、4、6、8 小時(shí)后測(cè)定,峰面積積分值基本不變,RSD=0.81%(n=5)。結(jié)果表明，在室溫條件下，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品 (批號(hào)20100301)6份，按照供試品含量測(cè)定方法進(jìn)行操作，結(jié)果平均含量為 1.264mg，RSD=0.33%(n=6)，表明本含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.9 樣品含量測(cè)定分 別 取 本 品 三 批（20100301、20100302、20100303），按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2

3 討論

3.1 通過(guò)紫外掃描,紫丁香苷在265nm處有最大吸收,故選擇265nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 由于生產(chǎn)中采用精制玉米油為溶劑，在檢驗(yàn)過(guò)程中對(duì)色譜柱污染比較嚴(yán)重。針對(duì)這種情況，我們先采取正已烷-乙腈萃取的方法去除部分油脂，再采用固相萃取法用SPE-C18對(duì)油脂進(jìn)行吸附，從而達(dá)到去除油脂對(duì)色譜柱污染的目的。

3.3 先后試用了三種流動(dòng)相系統(tǒng):甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸和乙腈-水-冰醋酸,結(jié)果甲醇-水分離效果較好，操作簡(jiǎn)單。通過(guò)甲醇-水10∶90、15∶85、20∶80、25∶75 不同比例的選擇, 確定 20∶80的比例分離效果最好,保留時(shí)間適中。

3.4 該法檢測(cè)刺五加軟膠囊中紫丁香苷含量精密度高、重現(xiàn)性及線性關(guān)系良好,回收率高。該法操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,作刺五加軟膠囊中紫丁香苷的質(zhì)量控制方法。

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