薤白平喘作用有效部位的篩選研究

譚中英，張錦紅，劉瑀曦，潘麗洪，張予陽(yáng)，劉曉秋

（沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

藥理

薤白平喘作用有效部位的篩選研究

譚中英，張錦紅，劉瑀曦，潘麗洪，張予陽(yáng)，劉曉秋*

（沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

目的：對(duì)薤白平喘作用的有效部位進(jìn)行篩選。方法：采用醇沉法及大孔樹(shù)脂分離法進(jìn)行初步分離得到水提醇沉淀、含氮化合物、皂苷及皂苷元部位，采用組胺致離體豚鼠氣管片收縮模型進(jìn)行藥效學(xué)篩選。結(jié)果：薤白皂苷部位具有顯著的平喘作用，其舒張率達(dá)到 （178.76±11.07）%。結(jié)論：皂苷類(lèi)成分是薤白平喘作用的有效部位。

薤白；平喘；有效部位

薤白為百合科植物小根蒜AlliummacrostemonBge.或薤Allium chinenseG.Don的干燥鱗莖。具有通陽(yáng)散結(jié)，行氣導(dǎo)滯之功效，用于胸痹心痛，脘腹痞滿脹痛，瀉痢后重[1]?；瘜W(xué)成分主要為揮發(fā)油、含氮化合物、多糖及皂苷類(lèi)[2]。藥理研究表明薤白具有平喘、抑制血小板聚集、抑菌、耐缺氧等作用[3-5]，臨床多用于治療冠心病[6]、心絞痛、肺炎、肺氣腫、支氣管哮喘等病。作者在研究復(fù)方薤白制劑平喘作用時(shí)發(fā)現(xiàn)薤白起主要的作用，而目前尚無(wú)關(guān)于薤白平喘作用的有效部位研究的報(bào)道。因此，本文采用組胺導(dǎo)致離體豚鼠氣管片收縮模型對(duì)薤白中的水提醇沉淀、含氮化合物、皂苷及皂苷元各部位進(jìn)行了平喘試驗(yàn)的研究，為薤白進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材

薤白藥材經(jīng)沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥分析教研室袁久志副教授鑒定為百合科植物小根蒜AlliummacrostemonBge.的干燥鱗莖，存放于沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥分析室。

1.2 試劑與儀器

無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚（天津博迪化工有限公司）；磷酸組胺溶液（Sigma公司試劑，批號(hào)：A6014）；D101大孔樹(shù)脂（河北滄州寶恩公司）。GCZN-08粉碎機(jī) [西化儀（北京）科技有限公司]，RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水式真空泵（鞏義市英峪予華水泵廠），DK-98-Ⅰ電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司），RM-6240多道生理信號(hào)采集系統(tǒng)（成都儀器有限公司），S-501-A型超級(jí)恒溫水?。ㄟ|陽(yáng)博大科學(xué)儀器有限公司），肌肉張力換能器（成都儀器廠），F(xiàn)A1004電子分析天平（上海精科天平廠），微量移液器（上海求精玻璃儀器廠）。

1.3 動(dòng)物

Hartley豚鼠，雌雄各半，300～500 g，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（遼）-2009-0002。

2 方法

2.1 樣品的制備

2.1.1 總提物的制備 取樣品適量，粉碎，加70%乙醇8倍量，加熱回流提取1.5 h，濾過(guò)，如上重復(fù)提取2次，合并濾液，濾液減壓濃縮，60℃干燥，備用（收率為42%）。

2.1.2 水提醇沉淀部位的制備 取樣品適量，粉碎，加水10倍量，加熱回流提取1 h，濾過(guò)，如上重復(fù)提取1次，合并濾液，濾液減壓濃縮至濃度為0.5 g生藥·mL－1，緩緩加入乙醇使醇濃度達(dá)到70%，靜置12 h，濾過(guò)，濾渣依次用無(wú)水乙醇、乙醚進(jìn)行洗滌，干燥，得固體粉末，備用（采用苯酚-硫酸法，以無(wú)水葡萄糖為對(duì)照，水提醇沉淀中多糖含量為86%）。

2.1.3 含氮化合物的制備 取樣品適量，粉碎，加70%乙醇8倍量，加熱回流提取1.5 h，濾過(guò)，如上重復(fù)提取2次，合并濾液，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，上樣于D101大孔樹(shù)脂，吸附5 h，分別用30%、70%、90%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，將30%乙醇洗脫液減壓濃縮，干燥，得固體粉末，備用（采用HPLC，測(cè)定含氮化合物中腺苷含量為0.1%）。

2.1.4 皂苷部位的制備 將2.1.3項(xiàng)下的70%乙醇洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，干燥，得固體粉末，備用（采用香草醛-高氯酸比色法，以菝葜皂苷元為對(duì)照，皂苷相對(duì)含量為61%）。

2.1.5 皂苷元部位的制備 將2.1.3項(xiàng)下的90%乙醇洗脫液進(jìn)行濃縮，干燥，得固體粉末，備用（采用香草醛-高氯酸比色法，以菝葜皂苷元為對(duì)照，皂苷元含量為50%）。

2.2 各部位舒張離體豚鼠氣管平滑肌作用

2.2.1 克-亨氏（Krebs-Henseleit）營(yíng)養(yǎng)液的配制 KCl 0.417 5，NaH2PO40.458 4，NaCl 6.866 6，MgSO40.290 8，CaCl20.367 6，NaHCO32.100 2，Glucose 1.090 g·L－1。使用蒸餾水配制，先加入 KCl、NaH2PO4、NaCl、MgSO4、CaCl2，溶解均勻后加入單獨(dú)溶解的NaHCO3，混勻后加入Glucose。

2.2.2 受試藥物的配制 將2.1項(xiàng)下得到的苷元部位以0.5%DMSO為溶劑，其他部位以水為溶劑進(jìn)行溶解，濃度均相當(dāng)于生藥量1 g·mL－1。

2.2.3 離體氣管片的制備 將豚鼠擊暈后，立即剪開(kāi)頸部皮膚和皮下組織，自甲狀軟骨至氣管分叉處剪下全部氣管，放入盛有克-亨氏（Krebs-Henseleit）營(yíng)養(yǎng)液的表面皿中（表面皿中同時(shí)充氧），剪除氣管周?chē)慕Y(jié)締組織。在氣管的軟骨環(huán)面縱行切開(kāi)，以3～5個(gè)軟骨環(huán)的間隔橫切，即成氣管片標(biāo)本，供實(shí)驗(yàn)用。將標(biāo)本放入盛有20 mL K-H氏營(yíng)養(yǎng)液的麥?zhǔn)显〔壑?，下端固定于通氣鉤上，上端以線連至張力換能器上。浴槽溫度控制在（37.5±0.5）℃，并持續(xù)供氧，標(biāo)本基礎(chǔ)張力調(diào)為2 g。標(biāo)本平衡2 h，每15～20 min換液1次。

2.2.4 對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌作用 標(biāo)本張力穩(wěn)定后，向浴槽中加入磷酸組胺使氣管片收縮到最大效應(yīng)的50%，然后加入受試藥物，對(duì)照組為同體積0.9%氯化鈉溶液，陽(yáng)性藥組為異丙腎上腺素。浴槽內(nèi)藥物終濃度見(jiàn)表1。觀察各個(gè)部位對(duì)組胺所致離體氣管收縮的拮抗作用，每組設(shè)置4組平行試驗(yàn)，并按下式計(jì)算舒張百分率。

舒張百分率 （%）＝（組胺收縮克數(shù)－加藥后舒張克數(shù)）/組胺收縮克數(shù)×100%

2.3 數(shù)據(jù)處理

各個(gè)部位的藥效學(xué)試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行處理。

3 結(jié)果

表1結(jié)果顯示，當(dāng)給藥濃度為低劑量時(shí)，皂苷部位有明顯舒張組胺致痙的離體豚鼠氣管平滑肌的作用，舒張率達(dá)（115.38±6.57）%；其他部位無(wú)明顯作用。給藥濃度為高劑量時(shí)，皂苷部位有非常顯著的舒張組胺致痙的離體豚鼠氣管平滑肌的作用，舒張率達(dá)到（178.76±11.07）%，與陽(yáng)性藥比較無(wú)顯著性差異，皂苷元部位及總樣有一定的舒張作用，其他部位無(wú)明顯作用。表明作用強(qiáng)度隨著給藥劑量的加大而增強(qiáng)，具有一定的劑量依賴(lài)性。因此，確定皂苷部位為薤白平喘作用的有效部位。

表1 各個(gè)部位對(duì)豚鼠離體氣管平滑肌的舒張百分率

4 討論

本文首次以薤白各提取部位為受試藥物對(duì)離體豚鼠氣管平滑肌的舒張作用進(jìn)行研究，確定薤白皂苷為其平喘作用的有效部位，不僅明確了薤白皂苷類(lèi)成分具有的新藥效作用，而且為薤白用于平喘制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)的選擇提供依據(jù)。

本文采用了組胺所致離體豚鼠氣管片收縮作為篩選模型，考慮到組胺主要作用于Hl受體，與Hl受體的結(jié)合速度非?？?，表現(xiàn)為氣道平滑肌收縮，參與急性哮喘的發(fā)作[7]，該模型適于快速篩選有效部位研究。但其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：353.

[2]陳海峰.中藥小根蒜活性成分的深入研究[D].沈陽(yáng)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)，2005.

[3]覃麗蓉，吳珊，韋錦斌.薤白提取物平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西醫(yī)學(xué)，2008，30（12）：1844-1845.

[4]張香美，劉煥云，王春霞，等.小根蒜抑菌作用的初步研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33（9）：1676-1677.

[5]吳波，陳思維，曹虹，等.薤白提取物對(duì)心肌缺氧缺血及缺血再灌注心肌損傷的保護(hù)作用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（9）：2209-2210.

[6]朱士高，張校芝，張向花.瓜蔞薤白寄生湯治療痰瘀閉阻型冠心病心絞痛效果觀察[J].齊魯醫(yī)學(xué)雜志，2006，21（5）：446.

[7]徐乃玉.加味止嗽散平喘作用及其機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究[D].蘭州：蘭州大學(xué)，2003.

A Screening of the Effective Fraction on Antiasthmatic Activity of Alliimacrostemonis Bulbus

TAN Zhong-ying，ZHUANG Jin-hong，LIU Yu-xi，PAN LI-hong，ZHUANG Yu-yang，LIU Xiao-qiu
（DepartmentofTraditionalChineseMedicines，ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016，China）

Objective：To screen the effective fraction of antiasthmatic activity ofAlliummacrostemonBge..Methods：The fractions of alcohol precipitation，nitrogenous compounds，saponins and aglyconeswere collected by the separation of the alcohol precipitation method and macroporous adsorption resins.Themodel of bronchus slice contraction caused by histamine was used to evaluate the antiasthmatic effect.Results：The fraction of saponins showed the remarkably antiasthmatic activity，the ratio of relaxation was（178.76±11.07）%.Conclusion：The effective fraction of antiasthmatic activity was the saponins.

AlliimacrostemonisBulbus；Antiasthmatic activity；Effective fraction

*劉曉秋，E-mail：liuxiaoqiu3388＠tom.com

2011-04-12）