不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株GRP78的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響*

徐 智, 陽書華, 王 愷, 黃明文, 鄒書兵

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽外科,江西 南昌 330006)

不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株GRP78的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響*

徐 智, 陽書華, 王 愷△, 黃明文, 鄒書兵

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽外科,江西 南昌 330006)

目的研究葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)在不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株內(nèi)的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法應(yīng)用GRP78反義寡核苷酸(GRP78 ASODN)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株HepG2和MHCC97-H。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測肝癌細(xì)胞內(nèi)GRP78 mRNA的表達(dá)，Transwell小室實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)分別檢測2種肝癌細(xì)胞的侵襲、遷移及黏附能力。結(jié)果2種細(xì)胞內(nèi)均有GRP78的表達(dá)，MHCC97-H細(xì)胞表達(dá)較HepG2高(P<0.05)。GRP78 ASODN可以有效地抑制2種肝癌細(xì)胞株內(nèi)GRP78的表達(dá)。GRP78 ASODN轉(zhuǎn)染的高侵襲潛能的MHCC97-H肝癌細(xì)胞的侵襲、遷移和黏附能力較對照組有明顯的下降(P<0.05)，而低侵襲潛能的HepG2肝癌細(xì)胞侵襲、遷移及黏附能力下降不明顯(P>0.05)。結(jié)論抑制肝癌細(xì)胞內(nèi)GRP78的表達(dá)可以削弱其侵襲、遷移及黏附能力，GRP78可能成為肝癌治療上有效的分子靶點(diǎn)。

葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78； HepG2細(xì)胞； MHCC97-H細(xì)胞； 侵襲; 轉(zhuǎn)移

肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)高死亡率的原因是早期轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，尤其是HCC根治性切除術(shù)后的高復(fù)發(fā)率嚴(yán)重影響肝癌總體療效[1]。有研究報(bào)道，葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)參與腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展, 并且是腫瘤細(xì)胞存活的關(guān)鍵因素之一。同時GRP78還參與了腫瘤耐藥性的調(diào)節(jié)及轉(zhuǎn)移過程[2]。但GRP78對肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為是否有影響，目前國內(nèi)外報(bào)道較少。為探討GRP78在不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)狀態(tài)及其對肝癌細(xì)胞的侵襲、黏附和運(yùn)動能力的作用，我們選取低侵襲潛能的人肝癌細(xì)胞株HepG2及具有高侵襲潛能的肝癌細(xì)胞株MHCC97-H，檢測GRP78的表達(dá)狀態(tài)，并運(yùn)用反義寡核苷酸技術(shù)特異性地下調(diào)上述細(xì)胞內(nèi)的GRP78的表達(dá)，研究GRP78對肝癌細(xì)胞侵襲、遷移和黏附能力的影響。

材 料 和 方 法

1主要試劑

DMEM高糖培養(yǎng)基購自Gibco，胎牛血清購自Hyclone，MHCC97-H肝癌細(xì)胞株購自復(fù)旦大學(xué)肝癌研究所，HepG2購自中科院上海細(xì)胞庫，總RNA提取試劑盒及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自全是金公司， LipofectamineTM2000 購自Invitrogen，噻唑藍(lán)MTT購自華美生物工程有限公司， Matrigel購自BD， Transwell小室購自Costar。

2細(xì)胞株培養(yǎng)

2種肝癌細(xì)胞均接種于含有10%胎牛血清的高糖DMEM(不含抗生素)，并放置在37 ℃、5% CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)，3-4 d傳代，取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

3半定量RT-PCR檢測HepG2及MHCC97-H細(xì)胞GRP78mRNA的表達(dá)

收集HepG2及MHCC97-H對數(shù)生長期細(xì)胞并提取總RNA。GRP78上游引物序列 5’-TGGCT-CGACTCGAATTCCAAAG-3’,下游引物序列 5’-GTCAGGCGATTCTGGTCATTGG-3’, 片段大小513 bp。β-actin引物上游 5’- GTTTGAGACCTTCAACACCCC-3’，下游5’-GTGGCCATCTCTCTTGCTCGAAGTC-3’，片段大小308 bp。PCR 條件為: 94 ℃預(yù)變性5 min, 94 ℃ 30 s, 55 ℃ 50 s, 72 ℃ 1 min, 循環(huán)35次, 末次72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5 %瓊脂糖凝膠電泳分離, 溴乙啶染色, 凝膠成像儀掃描, 以 GRP78/β-actin吸光度比值作為GRP78 mRNA的相對表達(dá)水平。

4脂質(zhì)體介導(dǎo)寡核苷酸轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后GRP78mRNA的檢測

GRP78 mRNA反義寡核苷酸(GRP78 antisense oligonucleotide,GRP78 ASODN)序列如下[3]：5’-GGGAGAGCTTCATCTTGCCAGCC-3’，對照組(random oligonucleotide,RODN)序列：5’-AAAAGGGGGGG-CCCCCCCTTTTT-3’，均采取全程硫代修飾， 5’端以綠色熒光蛋白標(biāo)記。根據(jù)RT-PCR檢測GRP78 mRNA的降低水平，篩選出使GRP78 mRNA降低最明顯的濃度為GRP78 ASODN的最適濃度，MHCC97-H和HepG2最佳轉(zhuǎn)染濃度分別為200 nmol/L和350 nmol/L。本實(shí)驗(yàn)分為4組:A組空白組(培養(yǎng)液),B組對照組(培養(yǎng)液+脂質(zhì)體),C組陰性對照組(培養(yǎng)液+脂質(zhì)體+RODN),D組實(shí)驗(yàn)組(培養(yǎng)液+脂質(zhì)體+GRP78 ASODN)。轉(zhuǎn)染前1 d分別種板，2種細(xì)胞的密度相同(圖5)。按照LipofectamineTM2000說明轉(zhuǎn)染HepG2和MHCC97-H細(xì)胞。2種肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率分別為83.56%±3.84%和88.37%±2.63%。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組分別收集轉(zhuǎn)染48 h后的細(xì)胞，按照前述方法檢測轉(zhuǎn)染后2種細(xì)胞內(nèi)GRP78 mRNA的表達(dá)狀態(tài)。

5檢測細(xì)胞侵襲和運(yùn)動能力

采用Transwell小室，取20 μL Matrigel鋪至Transwell小室上室。取轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的HepG2、MHCC97-H肝癌細(xì)胞，制成 2×108cells/L單細(xì)胞懸液，取200 μL移入上室內(nèi)；下室內(nèi)加入500 μL含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，37 ℃培養(yǎng)24 h后取出。以棉簽小心刮除濾膜上室面的細(xì)胞，侵襲到下室面的細(xì)胞以甲醛固定，HE染色，在×400光鏡下任取 5個視野計(jì)算細(xì)胞數(shù)，以其均數(shù)表示侵襲細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞運(yùn)動能力的檢測，實(shí)驗(yàn)方法與檢測細(xì)胞侵襲力的方法相同,只是不在聚碳酸酯濾膜上鋪20 μL Matrigel膠, 37 ℃培養(yǎng)12 h后取出。

6細(xì)胞黏附能力的檢測[4]

取轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)48 h的HepG2、MHCC97-H肝癌細(xì)胞，96孔培養(yǎng)板覆以matrigel膠 50 μg/孔,膠干后,加入預(yù)處理的5×108cells/L 單細(xì)胞懸液50 μL,37 ℃搖床100 r/min,作用60 min,每孔加無血清DMEM 150 μL及MTT(5 g/L)50 μL,37 ℃繼續(xù)作用4 h，棄上清, 每孔加入150 μL DMSO原液，每組設(shè)6個復(fù)孔, 10 min后上酶標(biāo)儀, 在490 nm單波長下測定A值。

7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1GRP78mRNA的表達(dá)

RT-PCR結(jié)果顯示GRP78mRNA在正常的HepG2及MHCC97-H細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，但2種細(xì)胞內(nèi)的GRP78mRNA的表達(dá)存在差異，GRP78在MHCC97-H表達(dá)較HepG2高(P<0.05)，見圖1、表1。

Figure 1. The expression of GRP78 mRNA in different hepatocellular carcinoma cell lines.A： the expression of GRP78 mRNA in nomal MHCC97-H and HepG2 cells;B：the expression of GRP78 mRNA in different groups. Lane 1: MHCC97-H-control； Lane 2: MHCC97-H-RODN；Lane 3: MHCC 97-H-GRP78 ASODN；Lane 4:HepG2-GRP78 ASODN；Lane 5: HepG2-RODN；Lane 6: HepG2-control.

圖12種肝癌細(xì)胞內(nèi)各組GRP78mRNA的表達(dá)變化

表1 2種肝癌細(xì)胞GRP78 mRNA表達(dá)量

A：normal cells；B：lipo2000；C：400 nmol/L RODN+lipo2000；D：GRP78 ASODN+lipo2000.△P<0.05vsgroup B;*P<0.05vsHepG2 in group A.

2GRP78ASODN對2種細(xì)胞株內(nèi)GRP78mRNA表達(dá)的影響

2種細(xì)胞株轉(zhuǎn)染GRP78 ASODN后在熒光顯微鏡下呈綠色，見圖5。RT-PCR結(jié)果顯示，空白組、對照組和陰性對照組三者間GRP78 mRNA的表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。但實(shí)驗(yàn)組GRP78 ASODN轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞其GRP78 mRNA表達(dá)下降明顯，與其它3組比較均有明顯差異(P<0.05),見圖1、表1。以上結(jié)果表明GRP78 ASODN能夠有效抑制該2種肝癌細(xì)胞株內(nèi)的GRP78 mRNA的基因表達(dá)。

3沉默2種細(xì)胞株內(nèi)GRP78mRNA表達(dá)對侵襲、遷移的影響

通過Transwell小室法檢測，沉默了2種肝癌細(xì)胞株內(nèi)GRP78 mRNA的表達(dá)后，細(xì)胞的侵襲、遷移能力不同。MHCC97-H細(xì)胞株轉(zhuǎn)染GRP78 ASODN后細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動遷移能力均有明顯降低，與其余3組比較均有明顯差異(P<0.05)。MHCC97-H細(xì)胞空白組、對照組及陰性對照組的細(xì)胞侵襲和運(yùn)動遷移能力下降不明顯(P>0.05)，見圖2。而轉(zhuǎn)染了GRP78 ASODN的HepG2細(xì)胞其侵襲和運(yùn)動遷移能力下降的并不明顯，與各組比較無明顯差異(P>0.05)，見圖3。

Figure 2. The invasive and migratory number of MHCC97-H cells in each group.A:normal cells;B:lipo2000;C:400 nmol/L RODN+lipo2000;D:200 nmol/L GRP78 ASODN+lipo2000.*P<0.05vsgroup B.

圖2MHCC97-H細(xì)胞侵襲和遷移的數(shù)量

Figure 3. The invasive and migratory number of HepG2 cells in each group.A:normal cells;B:lipo2000;C:400 nmol/L RODN+lipo2000;D:350 nmol/L GRP78 ASODN+lipo2000.

圖3HepG2細(xì)胞侵襲和遷移的數(shù)量

4細(xì)胞黏附能力的檢測

2種細(xì)胞沉默了細(xì)胞株內(nèi)GRP78 mRNA的表達(dá)后，細(xì)胞的黏附能力有所不同。MHCC97-H細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染了GRP78 ASODN后，細(xì)胞的黏附能力下降明顯，與其它3組比較存在明顯差異(P<0.05)。HepG2細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染GRP78 ASODN后，細(xì)胞黏附能力有所下降，與其余3組細(xì)胞比較無顯著差異(P>0.05)，見圖4。

Figure 4. Adhesion of HCC cells in different groups.A:normal cells;B:lipo2000;C:400 nmol/L RODN+lipo2000;D:GRP78 ASODN+lipo2000.*P<0.05vsgroup B.

圖42種肝癌細(xì)胞黏附力檢測

討 論

肝細(xì)胞肝癌的病死率較高，其總體效果不佳，原因主要為肝細(xì)胞肝癌的早期轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。目前認(rèn)為肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的重要原因是手術(shù)切除原發(fā)腫瘤后肝內(nèi)轉(zhuǎn)移病灶繼續(xù)生長為臨床可發(fā)現(xiàn)的腫瘤[5]。抑制肝癌轉(zhuǎn)移成為肝癌治療研究的一個重點(diǎn)。

GRP78是細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)分泌的一種蛋白，被認(rèn)為是熱休克蛋白70(HSP70)家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn)GRP78除了駐留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中起到分子伴侶的作用外, 還可以轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞膜、細(xì)胞漿, 甚至分泌到細(xì)胞外, 參與細(xì)胞分化、細(xì)胞生存、血管形成等重要生物學(xué)過程的調(diào)控, 是一種多功能蛋白質(zhì)[6]。同時它還能夠增強(qiáng)細(xì)胞應(yīng)對外界刺激的能力，從而延長細(xì)胞在各種不利因素刺激下的生存期[7]。GRP78廣泛表達(dá)于乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞內(nèi)[8]。GRP78不僅在腫瘤細(xì)胞內(nèi)，在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)組織當(dāng)中也是高表達(dá)的，抑制GRP78表達(dá)可以降低腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力[9,10]。這為研究抑制腫瘤轉(zhuǎn)移提供了一個新的途徑。

Figure 5. Morphological observation of MHCC97-H and HepG2 transfected with GRP78 ASODN;A: morphological observation of MHCC97-H cells transfeted with GRP78 ASODN;B: morphological observation of HepG2 cells transfeted with GRP78 ASODN.

圖5MHCC97-H與HepG2轉(zhuǎn)染GRP78ASODN后細(xì)胞形態(tài)觀察

本組2種肝癌細(xì)胞株的RT-PCR結(jié)果表明，GRP78在這2種肝癌細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，但MHCC97-H肝癌細(xì)胞內(nèi)GRP78的表達(dá)較HepG2肝癌細(xì)胞高，兩者差異顯著(P<0.05)。在Shuda等[11]和Luk等[12]的研究中，他們發(fā)現(xiàn)GRP78在肝癌內(nèi)是高表達(dá)的，并在其發(fā)展過程中起重要作用，認(rèn)為這主要是打破了細(xì)胞增殖與凋亡間平衡的結(jié)果，促進(jìn)了肝癌的產(chǎn)生和進(jìn)展。

肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是個復(fù)雜的多步驟過程。肝臟是個富血供的器官，腫瘤對血管的高侵襲性也是肝癌容易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的重要原因之一。本組實(shí)驗(yàn)采用的HepG2肝癌細(xì)胞是一種低侵襲潛能的肝癌細(xì)胞株，MHCC97-H是一種具有高侵襲潛能的肝癌細(xì)胞株[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抑制了這2種具有不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞內(nèi)GRP78 mRNA的表達(dá)后，2種細(xì)胞的侵襲、運(yùn)動及黏附能力均有降低，但高轉(zhuǎn)移潛能的MHCC97-H肝癌細(xì)胞的侵襲、運(yùn)動及黏附能力降低更明顯。而低轉(zhuǎn)移潛能的HepG2肝癌細(xì)胞的侵襲、運(yùn)動及黏附能力降低不明顯。這種抑制作用可能與肝癌細(xì)胞本身的侵襲轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。在對乳腺癌細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，不同轉(zhuǎn)移潛能的乳腺癌細(xì)胞內(nèi)GRP78的表達(dá)是不同的，高轉(zhuǎn)移潛能的乳腺癌細(xì)胞GRP78的表達(dá)更高，定位更廣[14]，與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相似。這說明腫瘤細(xì)胞內(nèi)不僅表達(dá)GRP78而且其表達(dá)量與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為有密切關(guān)系。在對肝癌組織的研究中發(fā)現(xiàn)，肝癌組織內(nèi)GRP78是明顯地高表達(dá)，且GRP78的表達(dá)與肝癌細(xì)胞對血管的侵襲和肝內(nèi)的轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，抑制GRP78的表達(dá)可以減少肝癌細(xì)胞對血管的侵襲和肝內(nèi)的轉(zhuǎn)移[12，15]。

細(xì)胞在刺激早期可在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平誘導(dǎo)GRP78表達(dá)，并快速達(dá)到高峰，說明刺激可誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生未折疊蛋白反應(yīng)以抵抗應(yīng)激保護(hù)細(xì)胞，顯示出GRP78快速高效的應(yīng)激反應(yīng)能力[16]。腫瘤細(xì)胞周圍常伴有低糖、低氧及酸中毒等的微環(huán)境，這些不利于腫瘤細(xì)胞生長的因素持續(xù)存在，刺激了腫瘤細(xì)胞大量表達(dá)GRP78，是目前認(rèn)為腫瘤細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)GRP78的重要原因。腫瘤細(xì)胞內(nèi)持續(xù)高表達(dá)的GRP78不僅能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活、增殖，而且促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，這些共同作用使得腫瘤細(xì)胞向著更惡性的方向發(fā)展，同時也促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[8]。因此抑制GRP78在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)有助于抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，減少復(fù)發(fā)的幾率，這對于提高腫瘤的治療效果，尤其是防止肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移提供了一個方向。

GRP78可在不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，其表達(dá)量的不同可能與肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為有關(guān)。GRP78對不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力作用是不同的。本研究結(jié)果表明抑制GRP78的表達(dá)能夠降低肝癌細(xì)胞的侵襲、運(yùn)動和黏附能力。這為利用GRP78作為肝癌治療的一個分子靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。然而GRP78調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

[1] 沈 鋒,吳孟超.肝癌切除術(shù)后的抗復(fù)發(fā)治療[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2005,85(41):2886-2888.

[2] Lee AS. GRP78 inductionin cancer: therapeutic and prognostic implications[J]. Cancer Res, 2007,67(8):3496-3499.

[3] Hirano J, Kita K, Sugaya S, et al. Down-regulation of molecular chaperone 78-kd glucose-regulated protein/immunoglobulin-binding protein expression involved in enhancement of human RS cell mutability[J]. Pancreas, 2008,36(1):e7-e14.

[4] 魯 藜，鄧華瑜. 茶多酚與 EGCG對人乳癌細(xì)胞株侵襲影響的研究[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2004,29(4):441-443.

[5] 孫惠川. 肝癌術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的治療進(jìn)展[J]. 癌癥進(jìn)展, 2005,3(1):30-32、64.

[6] Arap MA, Lahdenranta J, Mintz PJ, et al. Cell surface expression of the stress response chaperone GRP78 enables tumor targeting by circulating ligands[J]. Cancer Cell, 2004,6(3):275-284.

[7] FU Y, Lee A S. Glucose regulated proteins in cancer progression, drug resistance and immunotherapy[J]. Cancer Biol Ther, 2006,5(7):741-744.

[8] Li J, Lee AS. Stress induction of GRP78/BiP and its role in cancer[J]. Curr Mol Med，2006,6(1):45-54.

[9] Misra UK, Gonzalez-Gronow M, Gawdi G,et al. The role of MTJ-1 in cell surface translocation of GRP78, a receptor for α2-macroglobulin-dependent signaling[J].J Immunol,2005,174(4): 2092-2097.

[10]Zhang J, Jiang Y, Jia Z, et al. Association of elevated GRP78 expression with increased lymph node metastasis and poor prognosis in patients with gastric cancer[J]. Clin Exp Metastasis, 2006,23(7-8):401-410.

[11]Shuda M, Kondoh N, Imazeki N, et al. Activation of the ATF6, XBP1 and grp78 genes in human hepatocellular carcinoma: a possible involvement of the ER stress pathway in hepatocarcinogenesis[J]. J Hepatol, 2003,38(5):605-614.

[12]Luk JM, Lam CT, Siu AF, et al. Proteomic profiling of hepatocellular carcinoma in Chinese cohort reveals heat-shock proteins (HSP27,HSP70, GRP78) up-regulation and their associated prognostic values[J]. Proteomics, 2006,6(3):1049-1057.

[13]趙 越, 賈戶亮，周海軍，等. 肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的微小RNAs在不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞系的定量研究[J]. 中華肝臟病雜志，2009，17(7):526-530.

[14]劉榮華，王世宣，馬湘一， 等. GRP78在三種不同乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)及其意義[J]. 中國腫瘤臨床, 2008,35(9):520-522.

[15]Lim SO, Park SG, Yoo JH，et al. Expression of heat shock proteins(HSP27, HSP60, HSP70, HSP90,GRP78, GRP94) in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinomas and dysplastic nodules[J]. World J Gastroenterol, 2005,11(14):2072-2079.

[16]葉麗平， 溫有鋒， 張 瑩. 堿性成纖維細(xì)胞生長因子對人卵巢癌CAOV3細(xì)胞凋亡及葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78表達(dá)的影響[J]. 中國病理生理雜志，2009,25(5):893-897.

EffectofGRP78expressiononbiologicalbehaviorsofhepatocellularcarcinomacellswithdifferentmetastaticpotentials

XU Zhi, YANG Shu-hua, WANG Kai, HUANG Ming-wen, ZOU Shu-bing

(DepartmentofHepatobiliarySurgery,TheSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China.E-mail:neswk@163.com)

AIM: To explore the effect of glucose-regulated protein 78(GRP78)expression on the biological behaviors of hepatocellular carcinoma cells with different metastatic potentials.METHODSThe GRP78 antisense oligonucleotide (GRP78 ASODN) was transfected into hepatocellular carcinoma cell lines, HepG2 and MHCC97-H. The mRNA expression of GRP78 in the two cell lines was assessed by RT-PCR. Transwell chamber assay was used to detect the cell invasion and migration. Cell adhesion assay was employed to investigate the cell adhesion.RESULTSThe positive GRP78 expression was observed in both HepG2 and MHCC97-H cells. The expression level of GRP78 in MHCC97-H cells was higher than that in HepG2 cells. GRP78 expression was effectively depressed by the transfection of GRP78 ASODN in both cell lines. The invasive, migratory and adhesive potentials of MHCC97-H cells after GRP78 ASODN transfection were more significantly depressed than those of HepG2 cells (P<0.05). GRP78 ASODN transfection did not affect the biological behaviors of HepG2 cells.CONCLUSIONInhibition of GRP78 expression in hepatocellular carcinoma cell lines depresses the cell invasion, migration and adhesion, indicating that GRP78 is a prospective molecular therapy target in hepatocellular carcinoma.

Glucose-regulated protein 78; HepG2 cells; MHCC97-H cells; Invasiveness; Metastasis

R735.7

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.01.021

1000-4718(2011)01-0108-05

2010-07-21

2010-11-19

江西省教育廳基金資助項(xiàng)目(No. GJJ09092)

△通訊作者 Tel:0791-6300249;E-mail: neswk@163.com