動物性食品中β-興奮劑殘留概述

翟福麗，賴克強(qiáng)，張衍亮，黃軼群,*

(1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；2.賽默飛世爾科技(中國)有限公司，上海 201206)

動物性食品中β-興奮劑殘留概述

翟福麗1，賴克強(qiáng)1，張衍亮2，黃軼群1,*

(1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；2.賽默飛世爾科技(中國)有限公司，上海 201206)

β-興奮劑能促進(jìn)動物蛋白質(zhì)的合成，提高飼料轉(zhuǎn)化率，但其在動物性食品中的殘留物給人的身體健康帶來威脅，因此，多數(shù)β-興奮劑在畜牧業(yè)中已被禁止使用，各國政府通過一系列法律法規(guī)限制該類藥物的濫用以加大對β-興奮劑的監(jiān)管力度。通過介紹β-興奮劑在動物性食品中的殘留現(xiàn)狀及常見的β-興奮劑使用情況，比較主要國際組織和國家，包括國際食品法典委員會、歐盟、美國、日本和中國對β-興奮劑最大殘留限量、檢測標(biāo)準(zhǔn)的異同，同時總結(jié)近年來β-興奮劑殘留的檢測方法。

β-興奮劑；最大殘留限量；標(biāo)準(zhǔn)；檢測方法

β-興奮劑(β-agonist)全稱β-腎上腺素受體激動劑(β-adrenoceptor agonist)，又叫β-激動劑，是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)和生理功能類似腎上腺素和去甲腎上腺素的苯乙胺類藥物(phenethylamines，PEAs)(圖1)[1]。按照苯環(huán)上取代基的不同，可將PEAs分為苯胺型和苯酚型：苯胺型PEAs結(jié)構(gòu)中具有芳伯胺基，中等極性；苯酚型PEAs一般具有鄰(間)苯二酚或苯酚結(jié)構(gòu)，由于含有氨基和酚羥基，故極性高，苯酚型PEAs又可分為兒茶酚類、間苯二酚類和水楊醇類[2]。常見的β-興奮劑為克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、西馬特羅、馬布特羅、非諾特羅、特布他林等，其結(jié)構(gòu)式和類型如表1。

β-興奮劑能選擇性地與細(xì)胞膜上的β-腎上素受體結(jié)合，起到調(diào)節(jié)交感神經(jīng)興奮、松弛氣管平滑肌的功能，因此在臨床上常用于人和動物哮喘類病癥的治療[3]。20世紀(jì)80年代有研究表明，β-興奮劑影響營養(yǎng)物質(zhì)在動物體內(nèi)的流向和重新分配，使體內(nèi)的脂肪分解代謝增強(qiáng)、蛋白質(zhì)合成增加，顯著提高瘦肉率[4]。β-興奮劑殘留會聚集在動物可食用組織中，由于這類化合物具有口服活性，如果違法超量使用將會對人與動物的肝、腎等內(nèi)臟器官產(chǎn)生毒副作用。最早被用于提高動物瘦肉率的β-興奮劑是克倫特羅，但隨著世界范圍內(nèi)對其禁用，萊克多巴胺、沙丁胺醇等成為克倫特羅最常用替代品，而其他β-興奮劑如馬布特羅和妥洛特羅等在20世紀(jì)90年代后才上市，相對用得較少。

表1 常見的β-興奮劑Table 1 Commonly usedβ-agonists

圖1 β-興奮劑的基本結(jié)構(gòu)Fig.1 Basic chemical structure ofβ-agonist

1 3種常見β-興奮劑簡介

克倫特羅(clenbuterol，CLB)又稱克喘素，俗稱“瘦肉精”，化學(xué)名為α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3,5-二氯苯甲醇，是最早發(fā)現(xiàn)的具有營養(yǎng)再分配作用并被大量非法使用的β-興奮劑[1]。克倫特羅會在眼組織、肺組織、毛發(fā)中顯著富集，食用組織中以肝、腎中殘留最高，肌肉組織中最低。因此，國際上檢測克倫特羅殘留的樣本主要以尿液和肝、腎、肌肉等食用組織為主[2]。有研究表明，長期攝入克倫特羅，可能導(dǎo)致染色體畸變，誘發(fā)惡性腫瘤[5]。自1990年西班牙首次爆發(fā)消費(fèi)者因食用殘留有克倫特羅的牛肉導(dǎo)致中毒的嚴(yán)重事件以來，此類食品安全事件頻繁發(fā)生。例如，2007年9月，上海市336人因食用了殘留有克倫特羅的豬肉發(fā)生集體中毒事件，是上海市最大規(guī)模的克倫特羅中毒事件[6]；2009年2月，廣東省70多人因食用豬的內(nèi)臟引起中毒[7]。為了確保消費(fèi)者食用安全，聯(lián)合國糧農(nóng)組織與世界衛(wèi)生組織的食品添加劑聯(lián)合專家委員會(The Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives，JECFA)以藥效動力學(xué)獲得的最大無作用劑量(no observed effect level，NOEL) 0.04μg/kg體質(zhì)量為基礎(chǔ)，加上10倍的安全系數(shù)，建立的每日允許攝入量(acceptable daily intake，ADI)為 0～0.004μg/kg 體質(zhì)量[2]。歐盟和美國先后在1988年、1991年禁止將克倫特羅作為獸藥飼料添加劑，中國政府在1997年也明確禁止將該藥物添加在飼料中使用。隨著各個國家和組織對克倫特羅的限制和公共關(guān)注度提高，以及檢測方法的不斷完善和成熟，克倫特羅的使用得到了較好的控制，而克倫特羅替代品開始越來越多地添加于飼料中。

萊克多巴胺(ractopamine，RAC)，商品名稱“培林”，其化學(xué)名為4-[3-[2-羥基-2-(4-羥基苯基)-乙基]氨基丁基]苯酚，是瘦肉精的廣泛替代產(chǎn)品[8]。萊克多巴胺代謝速度很快，平衡代謝研究表明，95%的萊克多巴胺代謝物能在攝入的前3d排出體外[8]。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)在1999年12月22日正式批準(zhǔn)萊克多巴胺作為豬的飼料添加劑，另外有20多個國家如日本、澳大利亞、加拿大、巴西、泰國等也允許在飼養(yǎng)食用動物中使用萊克多巴胺[8]。美國規(guī)定：對于體質(zhì)量為68～109kg的成豬，飼料中允許的添加量為5～20mg/kg；體質(zhì)量大于109kg的成豬，只允許添加5～10mg/kg的萊克多巴胺[8]。JECFA在最大無作用劑量為67μg/kg體質(zhì)量的基礎(chǔ)上，建立的ADI為0～1μg/kg體質(zhì)量[8]。由于萊克多巴胺能夠促進(jìn)動物蛋白質(zhì)合成，提高飼料轉(zhuǎn)化率，但對人的健康存在潛在的危害，因此包括歐盟、中國、馬來西亞在內(nèi)的150多個國家禁止使用萊克多巴胺促進(jìn)動物生長[8]。由于不同國家在萊克多巴胺法規(guī)上存在差異，因此引起了許多貿(mào)易糾紛事件：如2007年5月中國查處了美國進(jìn)口的豬肉，就是由于豬肉中含有萊克多巴胺殘留引起的貿(mào)易糾紛；同年，臺灣檢出美國進(jìn)口的豬肉有萊克多巴胺殘留，引起爭議[9]。

沙丁胺醇(salbutamol，SAL)又名舒喘寧，化學(xué)名為4-羥基-5-羥甲基-α-(叔丁胺)甲基苯乙醇胺，用于治療人的哮喘、慢性支氣管炎等[10]。近年來不法分子將沙丁胺醇用于畜牧業(yè)中作為營養(yǎng)再分配劑，提高動物蛋白質(zhì)合成。與克倫特羅相比，沙丁胺醇的促進(jìn)作用略弱，體內(nèi)清除時間較短，毒副作用也略弱，因此成為克倫特羅首選的替代品之一。但沙丁胺醇?xì)埩粑飳θ梭w也有副作用，如肌肉戰(zhàn)栗、心悸、頭疼、目眩、惡心、嘔吐等[11]。中國農(nóng)業(yè)部235號公告[12]及農(nóng)牧發(fā)[2002]1號文件[13]規(guī)定，禁止將沙丁胺醇及其鹽、酯用于所有食用動物中。另外，中國農(nóng)業(yè)部還明確規(guī)定禁止將西馬特羅(cimaterol)用于所有食用動物中[13]。

2 國內(nèi)外最大殘留限量的制定

2.1 克倫特羅(CLB)

1996年第47屆JECFA會議通過了關(guān)于克倫特羅最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，即克倫特羅在馬、牛肌肉和脂肪的最高殘留限量(maximum residue limit，MRL)為0.2μg/kg，在腎臟、肝臟中的MRLs為0.6μg/kg，在牛乳中為0.05μg/L，推薦的檢測方法為氣相色譜-質(zhì)譜法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)[14]。2003年，第26屆國際食品法典委員會(Codex Alimentarius Commission，CAC)決議通過了此標(biāo)準(zhǔn)，至今仍被采用。日本于2006年起實施“肯定列表制度”(Positive List System)，執(zhí)行新的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。其中，對克倫特羅殘留標(biāo)準(zhǔn)實施“暫定標(biāo)準(zhǔn)”，即參考CAC標(biāo)準(zhǔn)，但又明確規(guī)定在豬的肝臟、腎臟、肌肉、脂肪中，克倫特羅不得檢出[15]。歐盟發(fā)布的克倫特羅最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(EC 2377/90)，均低于CAC標(biāo)準(zhǔn)，馬、牛肌肉中的最高殘留限量為0.1μg/kg，內(nèi)臟中為0.5μg/kg。歐盟于2007年12月出臺EC 16129/07條例，旨在制定更低水平的MRL，廢除現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)，可見歐盟對克倫特羅殘留要求更為嚴(yán)格(表2)，且越來越高。中國農(nóng)業(yè)部于1999年在關(guān)于發(fā)布《動物性食品中獸藥最高殘留限量》的通知(農(nóng)牧發(fā)[1999]17號)中規(guī)定克倫特羅在馬、牛肌肉、內(nèi)臟、腎臟及奶中的MRLs為0.1、0.5、0.5、0.05μg/kg[16]。但自2002年12月起，農(nóng)業(yè)部第235號公告[12]修訂了《動物性食品中獸藥最高殘留限量》，同時廢除農(nóng)牧發(fā)[1999]17號，新的公告規(guī)定，克倫特羅在所有動物性食品中不得檢出。

表2 動物肌肉、內(nèi)臟和牛乳中克倫特羅的最大殘留限量Table 2 Maximum residue limits of clenbuterol in milk, animal muscles and organs μg/kg(*μg/L)

2.2 萊克多巴胺(RAC)

第62屆JECFA會議制定了萊克多巴胺的殘留標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了萊克多巴胺在牛和豬的肌肉、脂肪中的最大殘留限量均為10μg/kg，肝臟中為40μg/kg，而腎臟中為90μg/kg，推薦的檢測方法為液相色譜法(liquid chromatography，LC)[8]。同美國制定的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)相比，CAC對萊克多巴胺的限制較為嚴(yán)格。美國規(guī)定在豬肝臟中萊克多巴胺的最大殘留量為150μg/kg，牛肝臟中為90μg/kg，豬肌肉中為50μg/kg，牛肌肉中為30μg/kg，均高于CAC殘留標(biāo)準(zhǔn)[18]。日本肯定列表規(guī)定，萊克多巴胺殘留標(biāo)準(zhǔn)仍然參照CAC標(biāo)準(zhǔn)制定(表3)。歐盟、中國禁止將萊克多巴胺用于畜牧業(yè)中，但目前尚未建立最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)[8]。

表3 動物肌肉和內(nèi)臟中萊克多巴胺的最大殘留限量Table 3 Maximum residue limits of ractopamine in animal muscles and organs μg/kg

2.3 其他β-興奮劑

世界各國對其他的β-興奮劑也有相應(yīng)的規(guī)定。例如，中國農(nóng)業(yè)部235號公告[12]規(guī)定，沙丁胺醇、西馬特羅及其鹽、酯在所有動物性食品中不得檢出；美國規(guī)定齊帕特羅(zilpaterol)在牛肝臟中最大殘留限量為12μg/kg[19]。

3 國內(nèi)外檢測標(biāo)準(zhǔn)

3.1 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)

我國衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部和國家質(zhì)監(jiān)總局發(fā)布了關(guān)于檢測克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等β-興奮劑的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(表4)[20-24]。其中GB/T 5009.192—2003《動物性食品中克倫特羅殘留量的測定》[20]，是修改采用了歐盟標(biāo)準(zhǔn)EUR 15127-EN“Veterinary Drug Residues,Residues in food producing animals and their products”(《動物性食品及其制品中獸藥殘留的分析》)。該標(biāo)準(zhǔn)確定了從酶聯(lián)免疫法、高效液相色譜法定量到氣質(zhì)聯(lián)機(jī)法確證和定量這一套方法用于我國動物性食品中克倫特羅殘留的監(jiān)控[20]。出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中優(yōu)化了前處理方法，采用了C18和強(qiáng)陽離子交換柱(SCX)雙固相萃取柱凈化，LC-MS-MS檢測，將克倫特羅的檢出限提高到0.5μg/kg[22]，但是仍不能滿足歐盟、CAC規(guī)定的動物肌肉中克倫特羅的殘留不超過0.1～0.2μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)。中國農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008《動物性食品中萊克多巴胺殘留檢測方法 酶聯(lián)免疫吸附法》[23]中提出了檢測多殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，采用混合型陽離子交換固相萃取柱(MCX)柱萃取，將檢出限提高到0.25μg/kg，仍然不能達(dá)到國際上對β-興奮劑殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求[24]。

3.2 國外標(biāo)準(zhǔn)

歐盟對β-興奮劑多殘留的測定方法有兩套。一套是篩選方法(screening methods) (Sg 2.1～2.4)：Sg 2.1和Sg 2.4是GC-MS方法；Sg 2.2是ELISA方法；Sg 2.3是酶免疫法。另一套是確證方法(confirmatory methods)(Cy 2.1～Cy 2.3)：Cy 2.1采用免疫親和色譜柱(IAC)-GCMS測定生物樣品和飼料中的β-興奮劑；Cy 2.2用GCMS測定牛血漿和組織樣品中的克倫特羅殘留，液液萃取，經(jīng)五氟丙酸酐衍生后，負(fù)離子化模式測定；Cy 2.3采用GC-MS測定牛尿中的β-興奮劑殘留，尿液樣品中加入美托洛爾內(nèi)標(biāo)，N,O-雙(三甲基硅基)-三氟乙酰胺衍生，正離子化學(xué)電離模式，檢測每種β-興奮劑的4個主要特征離子[25]。

美國農(nóng)業(yè)部(USDA)于2004年發(fā)布了“ELISA Screening for β-Agonist Residues in Animal Retinal Tissue”《ELISA篩選檢測動物組織視網(wǎng)膜組織中β-興奮劑殘留》(SOP：CLG-CLN3.01)。本方法適用于檢測牛、羊、豬眼球視網(wǎng)膜組織中克倫特羅(檢測水平≥3μg/kg)，牛、豬視網(wǎng)膜組織中沙丁胺醇(檢測水平≥3μg/kg)、西馬特羅(檢測水平≥6μg/kg)。該方法采用一步提取步驟，切離的視網(wǎng)膜色素上皮與磷酸緩沖液(pH6.8)混合，經(jīng)高速離心獲取上清液，用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測，依據(jù)650nm波長處光密度值計算分析物濃度[26]。USAD于2007年發(fā)布“Identification of Beta-Agonists by HPLCMS-MS”《高效液相色譜-質(zhì)譜法檢測β-興奮劑》(SOP：CLG-AGON1.02，代替CLG-RAC1.01[27])標(biāo)準(zhǔn)，用于檢測動物組織中殘留的克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、西馬特羅、齊帕特羅。本方法適用于檢測牛的視網(wǎng)膜、牛豬羊肝臟和牛豬肌肉中克倫特羅、沙丁胺醇和西馬特羅(檢測水平≥3μg/kg)，齊帕特羅(檢測水平≥6μg/kg)及萊克多巴胺(檢測水平≥21μg/kg)[28]。

日本肯定列表中檢測獸藥殘留方法為“HPLC獸藥等同時檢測方法I(畜、水產(chǎn)品)”，前處理方法為液液萃取法，克倫特羅的檢出限為1μg/kg。肯定列表規(guī)定動物肌肉、肝臟、腎臟、脂肪組織中萊克多巴胺的檢測方法為LC-MS。

4 檢測方法

β-興奮劑殘留的主要檢測方法有色譜法，如氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GCMS)、液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)；免疫分析法，如酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫法、時間分辨免疫熒光測定等；毛細(xì)管電泳法及電化學(xué)法等。

表4 國內(nèi)對β-興奮劑的檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 4 Chinese standards ofβ-agonist analyses

4.1 色譜法

GC-MS是β-興奮劑殘留測定中最常用的定量和確證方法。由于β-興奮劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)中有不易氣化的羥基和氨基，因此需要對處理后的樣品衍生化，常用的衍生化試劑有N-甲基-N-三甲基硅基-三氟乙酰胺和N,O-雙(三甲基硅基)-三氟乙酰胺。GC-MS具有較高的特異性，但樣品在進(jìn)入質(zhì)譜之前需要衍生化，其過程繁瑣且耗時。因此，提高GC-MS檢測方法的速度及靈敏度是近年來較為活躍的研究領(lǐng)域，如Daniele等[29]用較高的載氣速度、快速升溫(6.5min)實現(xiàn)了快速檢測15種β-興奮劑，同時降低了信噪比并保持了很好了色譜分離效果；Pasquale等[30]通過優(yōu)化前處理方法大大提高檢測的靈敏度，他們用固相萃取法(SPE)和α1-酸性蛋白(AAG)親和色譜柱兩步凈化尿液中的克倫特羅及類似物，結(jié)合GCMS，將檢出限提高到0.5μg/kg，且AAG親和色譜柱穩(wěn)定性好。

LC-MS-MS方法能提供更詳細(xì)的結(jié)構(gòu)信息，且背景干擾少，在特異性和靈敏性方面均優(yōu)于GC-MS。但是LC-MS-MS設(shè)備價格昂貴，樣品預(yù)處理較復(fù)雜，檢測速度較慢。為了縮短前處理時間，提高β-興奮劑的檢出限，Crescenzi等[31]將基質(zhì)固相分散技術(shù)與分子印跡固相萃取法相結(jié)合，提取凈化牛肝臟中的克倫特羅，萃取速度快，回收率高達(dá)90%，結(jié)合LC-MS-MS，檢出限＜0.1μg/kg。

4.2 免疫分析法

免疫分析方法是利用抗原與抗體特異性反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)。按照標(biāo)記物或檢測體系，免疫分析法可分為放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫測定法、熒光免疫測定法、化學(xué)發(fā)光免疫測定法[32]、膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)[33]、免疫傳感器[34]、時間分辨免疫熒光測定[35]、毛細(xì)管電泳免疫分析等。

酶聯(lián)免疫法(ELISA)是最常用的免疫分析技術(shù)，操作方便，檢測迅速，歐盟將ELISA作為首選的篩選方法，但也存在著假陽性率較高、不能實現(xiàn)在線檢測等缺點[1]。近年來，新的免疫技術(shù)如膠體金標(biāo)記技術(shù)和時間分辨免疫熒光測定技術(shù)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)成為有效的研究手段。膠體金標(biāo)記法中，樣品無需預(yù)處理，分析速度快，可實現(xiàn)在線檢測，如Zhang等[33]用膠體金標(biāo)記法快速、定量分析豬尿中殘留的克倫特羅和萊克多巴胺，膠體金標(biāo)記多抗后噴涂到玻璃纖維膜上，特異性抗原包被在硝酸纖維素膜上，制成快速檢測試紙條，分析過程僅需要5min，檢出限均為1μg/L。時間分辨免疫熒光測定用三價稀土離子及其鰲合物作為示蹤物，代替熒光物質(zhì)、同位素、酶和化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，標(biāo)記抗原、抗體、核酸探針等物[36]。該方法具有示蹤物穩(wěn)定、定量分析量程寬、無放射性污染和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。Bacigalupo等[35]用Eu3+標(biāo)記的抗克倫特羅單克隆抗體，檢出限為10μg/L。

免疫分析法一般作為篩選方法，所提供的待測物的結(jié)構(gòu)信息太少，易出現(xiàn)假陽性，還需要采用其他方法對待測物進(jìn)行定量和確證。

4.3 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法是以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離、分析的液相分離技術(shù)[37]。該技術(shù)具有高分離效率(可達(dá)幾百萬理論塔板數(shù))、低試劑耗費(fèi)、操作靈活性高等優(yōu)點。但進(jìn)樣量少限制了樣品的濃度，從而降低了靈敏度，并且該方法分析時間長。為了縮短分析時間，Chen等[38]用毛細(xì)管區(qū)帶電泳快速分離檢測克倫特羅和沙丁胺醇，采用了60.5cm×75μm熔融石英毛細(xì)管，檢測過程僅需要4.5min。為了提高檢測靈敏度，Chen等[39]首次用安培檢測法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的紫外檢測法，該方法在分離和檢測多殘留物質(zhì)上有明顯的優(yōu)勢，具有設(shè)備簡單、成本低、檢出限低等優(yōu)點。他們將毛細(xì)管電泳技術(shù)與安培檢測法結(jié)合，分離和檢測3種常見的β-興奮劑，克倫特羅的檢出限為1μg/kg，沙丁胺醇為0.4μg/kg，西馬特羅為0.5μg/kg。Chu等[40]用微型化的毛細(xì)管電泳-安培法檢測克倫特羅和沙丁胺醇，與毛細(xì)管電泳-安培法相比，提高了分析速度，且該設(shè)備易攜帶。

4.4 其他方法

電化學(xué)分析法是將待測對象組成一個化學(xué)電池，通過測量電池的電位、電流、電導(dǎo)等物理量實現(xiàn)對待測物質(zhì)的分析[37]。由于克倫特羅等化學(xué)結(jié)構(gòu)式中含有電活性的芳香基團(tuán)，因此可以用電化學(xué)法分析檢測，如Guo等[41]首次用多壁碳納米管修飾電極檢測痕量的克倫特羅，此修飾電極表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性、靈敏度、重現(xiàn)性和低檢測限，克倫特羅檢出限可達(dá)到0.1μg/kg。

另外，Liu等[42]根據(jù)克倫特羅對NaIO4氧化曙紅有顯著的催化效應(yīng)，建立了超靈敏催化固體基質(zhì)室溫磷光法測定痕量克倫特羅的新方法，檢出限達(dá)5.2×10-20g/mL；Visser等[43]用冷凝阱氣相色譜-傅里葉變換紅外光譜分析(GC-FTIR)β-興奮劑多殘留物，檢出限為2.5μg/kg。

5 結(jié) 語

盡管國內(nèi)外都建立了相應(yīng)的法律法規(guī)限制β-興奮劑的濫用，但仍有許多養(yǎng)殖戶在飼料中添加該類藥物，因此，由β-興奮劑引起的食品安全事件時有發(fā)生。根據(jù)國內(nèi)外對β-興奮劑的監(jiān)管及使用現(xiàn)狀情況，建立全面、簡單、快速的β-興奮劑檢測方法勢在必行。檢測方法的發(fā)展應(yīng)主要集中在以下方面：樣品預(yù)處理高效快速、溶劑耗費(fèi)少；檢測范圍由單一檢測轉(zhuǎn)向多殘留檢測；深入研究儀器化操作簡單、快速的檢測方法。

[1] 汪慧蓉. β-興奮劑克倫特羅、沙丁胺醇的免疫檢測方法研究[D]. 西安: 西北大學(xué), 2006.

[2] 吳永寧. 獸藥殘留檢測與監(jiān)控技術(shù)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2007:511-513.

[3] SHELLEY R, SALPETER M D, NICHOLAS S, et al. Meta-analysis:effect of long-actingβ-agonists on severe asthma exacerbations and asthma-related deaths[J]. Annals of Internal Medicine, 2006, 144(12):904-912.

[4] RICHS C A, BAKER P K, DALRYMPLE R H. Use of repartitioning agents to improve performance and body composition of meat animals[J]. Reciprocal Meat Conf Porc, 1984, 37: 5-11.

[5] 王選年. β-腎上腺素受體激動劑克倫特羅的免疫特性及中毒病理學(xué)研究[D]. 長春: 中國人民解放軍軍需大學(xué), 2002．

[6] AFP. Pigs fed on bodybuilder steroids cause food poisoning in Shanghai[EB/OL]. (2006-09-19)[2010-06-19]. http://www.breitbart.com/article.php?id=060919065258.qtzm4eom&show_article=1.

[7] CNN. China: 70 ill from tainted pig organs[EB/OL]. (2009-02-23)[2010-06-19]. http://edition.cnn.com/2009/WORLD/asiapcf/02 /22/china.poisonings/index.html.

[8] European Food Safety Authority. Safety evaluation of ractopamine scientific opinion of the panel on additives and products or substances used in animal feed[J]. The EFSA Journal, 2009, 1041: 1-52.

[9] Wikepadia. Ractopamine [EB/OL]. (2007-05-14)[2011-01-19]. http://en.wikipedia.org/wiki/Ractopamine.

[10] MAZHARA S H R A, CHRYSTYNB H. New HPLC assay for urinary salbutamol concentrations in samples collected post-inhalation[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2009, 50(2): 175-182.

[11] 劉宣兵, 龐玉芳, 侯玉澤, 等. 沙丁胺醇的毒副作用及其殘留檢測[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊, 2008(4): 83-85.

[12] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第235號公告 動物性食品中獸藥最高殘留限量[B]. 2002-12-24.

[13] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)牧發(fā)[2002]1號 關(guān)于發(fā)布《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》的通知[B]. 2002-03-05.

[14] 國家食品藥品監(jiān)督局. 國際食品法典標(biāo)準(zhǔn)匯編: 第二卷[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 2008: 353.

[15] 國家質(zhì)監(jiān)總局進(jìn)出口食品安全局. 中華人民共和國WTO/TBT-SPS通報咨詢網(wǎng)[EB/OL]. (2010-03-19)[2010-06-15]. http://www.tbt-sps.gov.cn/jpmrl/MRLS/Pages/MRLSsearch.aspx.

[16] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)牧發(fā)[1997]7號 關(guān)于發(fā)布《動物性食品中獸藥最高殘留限量》的通知[B]. 1997-09-04.

[17] FAO and WHO. Codex Alimentarius[EB/OL]. [2010-06-19]. http://www.codexalimentarius.net/vetdrugs/data/vetdrugs/details.htm l? id=13.[18] United States Food and Drug Administration[EB/OL]. [2010-06-19].http://www.accessdata.fda.gov/scripts/a nimaldrugsatfda/d etails. cfmd n=41-172.

[19] 國家質(zhì)監(jiān)總局進(jìn)出口食品安全局. 中華人民共和國WTO/TBT-SPS通報咨詢網(wǎng)[EB/OL]. (2010-03-19)[2010-06-15]. http://www.tbt-sps.gov.cn/foodsafe/xlbz/Pages/veterinary.aspx.

[20] 中華人民共和國衛(wèi)生部, 中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 5009.192—2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定[S]. 北京: 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2003.

[21] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. NY/T 468—2006 動物組織中鹽酸克倫特倫的測定 氣相色譜/質(zhì)譜法[S]. 2006.

[22] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. SN/T 1924—2007進(jìn)出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S]. 北京: 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2007.

[23] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)業(yè)部1025號公告-6-2008動物性食品中萊克多巴胺殘留檢測方法 酶聯(lián)免疫吸附法[S]. 2008.

[24] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部. 農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S]. 2008.

[25] European Union. EUR 15127-EN: Veterinary drug residues, residues in food producing animals and their products-reference materials and methods[S]. 2nd ed. 1999.

[26] United States Department of Agriculture. SOP: CLG-CLN3.01 ELISA screening for β-agonist residues in animal retinal tissue[S]. Washington,DC: USDA, 2004.

[27] United States Department of Agriculture. SOP: CLG-RAC1.01 Determination of ractopamine hydrochloride by high performance liquid chromatography[S]. Washington, DC: USDA, 2007.

[28] United States Department of Agriculture. SOP: CLG-RAC1.02 Identification of beta-agonists by HPLC/MS/MS[S]. Washington, DC: USDA,2007.

[29] DANIELE D C, VERONICA M, MARCO P, et al. Screening of β2-agonists in human urine by fast-GC/MS[J]. Biomed Chromatogr, 2010,24(4): 358-366.

[30] PASQUALE G, GIANFRANCO B, BRUNO N. Purification of clenbuterol-likeβ2-agonist drugs of new generation from bovine urine and hair byα-acid glycoprotein affinity chromatography and determination by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta, 2007, 587(1): 67-74.

[31] CRESCENZI C, BAYOUDH S, CORMACK P A G, et al. Determination of clenbuterol in bovine liver by combining matrix solid-phase dispersion and molecularly imprinted solid-phase extraction followed by liquid chromatography/electro spray ion trap multiple-stage mass spectrometry[J]. Anal Chem, 2001, 73(10): 2171-2177.

[32] 徐曉嬰, 盧慶鋆, 徐艷力. 化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測鹽酸克倫特羅殘留[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報: 農(nóng)業(yè)科學(xué)版, 2009(2): 125-128.

[33] ZHANG Mingzhou, WANG Minzi, CHEN Zonglun, et al. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine[J].Anal Bioanal Chem, 2009, 395(8): 2591-2599.

[34] JOHANSSON, ANNETTE M, HELLEN S. Matrix effects in immunobiosensor determination of clenbuterol in urine and serum[J].Analyst, 2004, 129(5): 438-442.

[35] BACIGALUPO M A, MERONI G, SECUNDO F. Antibodies conjugated with new highly luminescent Eu3+and Tb3+chelates as markers for time resolved immunoassays, application to simultaneous determination of clenbuterol and free cortisol in horse urine[J]. Talanta, 2009, 80(2): 954-958.

[36] 雷紅濤, 高秀潔, 潘科, 等. 鹽酸克倫特羅時間分辨熒光免疫檢測方法的建立[J]. 中國食品學(xué)報, 2006, 6(1): 6-10.

[37] 劉密信, 羅安國, 張新榮, 等. 儀器分析[M]. 2版. 北京: 清華大學(xué)出版社, 2002: 1; 289.

[38] CHEN Qian, FAN Liuyin, ZHANG Wei, et al. Separation and determination of abused drugs clenbuterol and salbutamol from complex extractants in swine feed by capillary zone electrophoresis with simple pretreatment[J]. Talanta, 2008, 76(2): 282-287.

[39] CHEN Ying, WANG Wei, DUAN Jianping. Separation and determination of clenbuterol, cimaterol and salbutamol by capillary electrophoresis with amperometric detection[J]. Electroanalysis, 2005, 17(8): 706-712.

[40] CHU Qingcui, GENG Chenghuai, ZHOU Hui. Fast determination of clenbuterol and salbutamol in feed and meat products based on miniaturized capillary electrophoresis with amperometric detection[J]. Chinese Journal of Chemistry, 2007, 25(12): 1832-1835.

[41] GUO Renxia, XU Qin, WANG Deyan, et al. Trace determination of clenbuterol with an MWCNT-Nafion nanocomposite modified electrode[J]. Microchimica Acta, 2008, 161(1/2): 265-272.

[42] LIU Jiaming, ZENG Liqing, LI Zhiming, et al. Solid substrate-room temperature phosphorimetry for the determination of residual clenbuterol hydrochloride based on the catalysis of sodium periodate oxidizing eosine Y[J]. Analytica Chimica Acta, 2009, 638(1): 69-74.

[43] VISSER T, VREDENBREGT M J. Confirmational analysis of betaagonists by cryotrapping gas chromatography-fourier transform infrared spectrometry[J]. Analyst, 1994, 119(12): 2681-2685.

General Introduction to β-Agonists Residues in Foodstuffs of Animal Origin

ZHAI Fu-li1，LAI Ke-qiang1，ZHANG Yan-liang2，HUANG Yi-qun1,*
(1. College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China；2. Thermo Fisher Scientific(Shanghai) Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

β-Agonists can increase protein synthesis rates and promote animal growth, but its residues in foodstuffs of animal origin may pose health risks to human. Most of β-agonists are banned to be used in animal feeds, and many countries have passed a series of laws and regulations to limit the use of β-agonists in animal feed and to enhance the control and monitoring of β-agonists used in farm animals. This article discusses the safety issues of β-agonist residues in foodstuffs of animal origin and compares the regulations on β-agonists among main international organizations and countries including Codex Alimentarius Commission, EU, USA, Japan and China, and summarizes the technologies used for qualitative and quantitative analyses of β-agonists.

β -agonists；maximum residue limit；standard；detection method

TS201.6

A

1002-6630(2011)05-0351-06

2010-07-13

上海市浦江人才計劃項目(09PJ1405200)；上海市科學(xué)技術(shù)委員會支撐項目(09320503800)；

上海市教育委員會重點學(xué)科建設(shè)項目(J50704)

翟福麗(1988—)，女，碩士研究生，研究方向為食品質(zhì)量與安全。E-mail：flzhai0818@gmail.com

*通信作者：黃軼群(1969—)，女，教授，博士，研究方向為食品質(zhì)量與安全。E-mail：yqhuang@shou.edu.cn