• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Na N3誘變“邯7086”后代變異研究及變異系的SSR分析

    2011-10-16 11:34:44謝淑芹張希太張彥波肖磊
    關(guān)鍵詞:鈉溶液疊氮生長點(diǎn)

    謝淑芹,張希太,張彥波,肖磊

    (邯鄲市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)中心,河北邯鄲056001)

    利用基因突變改良品種是小麥遺傳改良的重要途徑之一.化學(xué)誘變具有成本低廉、使用方便、誘變作用專一等特點(diǎn),是一種發(fā)展迅速的育種手段,近年來國內(nèi)外利用化學(xué)誘變育成的農(nóng)作物品種數(shù)量明顯增加[1].近半個(gè)世紀(jì)以來,各國學(xué)者曾試用了許多化學(xué)物質(zhì)來篩選有效低毒的化學(xué)誘變劑,疊氮化鈉(NaN3)是為數(shù)不多的能應(yīng)用于植物化學(xué)誘變的高效低毒的化學(xué)誘變劑之一,疊氮化鈉易誘發(fā)植物基因的點(diǎn)突變且對人畜無致癌副作用,近年來疊氮化鈉在應(yīng)用于小麥、大麥、水稻等誘變育種方面取得了明顯的效果[2-5].為了創(chuàng)造新的小麥品種資源并且探討疊氮化鈉對小麥誘變處理的適宜方法,進(jìn)行了疊氮化鈉誘變小麥“邯7086”的研究.

    1 材料與方法

    1.1 材料

    疊氮化鈉為天津南開大學(xué)化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的分析純產(chǎn)品,“邯7086”種子為本院小麥研究室贈送.

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 種子處理 采用磷酸緩沖系統(tǒng),緩沖液的pH值為3.0;疊氮化鈉為0 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L、2.0 mmol/L 5種濃度處理,每種疊氮化鈉濃度處理分為2個(gè),誘變時(shí)一個(gè)處理用氣泵鼓入空氣,另一個(gè)不鼓入空氣.具體操作為:當(dāng)年的9月下旬,選飽滿的“邯7086”種子,每個(gè)處理1 000粒,裝入小尼龍袋中,封緊口并懸掛記錄標(biāo)簽,先將10個(gè)種子處理袋在室溫下用自來水浸泡10 h,待種子吸足水分胚開始萌動時(shí)分別浸入裝有各種疊氮化鈉濃度處理液的燒杯中,用氣泵向相應(yīng)的燒杯中鼓入空氣,在室溫下連續(xù)處理3 h,取出種子袋用自來水反復(fù)沖洗后按不同處理播入試驗(yàn)田中,并調(diào)查出苗率.第2年小麥成熟時(shí)按不同處理收割脫粒并保存M0代種子.第2年小麥播種時(shí),從各處理的M0代種子中隨機(jī)選取3 000粒,按處理單穴單粒播種,第3年小麥?zhǔn)崭钋罢{(diào)查各處理的變異情況,并選擇優(yōu)良單株,以后每年均按株系單穴單粒播種,并逐年淘劣選優(yōu)直到獲得穩(wěn)定的株系.

    1.2.2 穎苞內(nèi)滴加 疊氮化鈉溶液的配制同1.2.1.在小麥的抽穗揚(yáng)花期,選大部分小花正在揚(yáng)花的“邯7086”的麥穗作為誘變材料,在揚(yáng)花后2 h開始整穗,去掉尚未開放的小花,在穎片內(nèi)剪去羽毛狀柱頭,立即用微量注射器滴加10~20 μL疊氮化鈉溶液于切口處,套袋并掛標(biāo)簽標(biāo)記.4 h后復(fù)滴1次,每個(gè)濃度處理50穗.

    小麥成熟后按不同處理分別收獲脫粒后保存M0代種子.當(dāng)年的9月底在大田中,將不同處理的M0種子分小區(qū)單穴單粒播種,并調(diào)查出苗率.第2年小麥成熟收割前調(diào)查各處理的變異株率,變異類型等.然后選優(yōu)良的變異單株,脫粒按株系保存M1代種子.以后每年按株系單穴單粒播種,并逐年選擇直到獲得穩(wěn)定的株系.

    1.2.3 生長點(diǎn)注射 疊氮化鈉溶液的配制同1.2.1.在小麥的起身拔節(jié)期,在生長健壯的小麥植株上選擇大的分蘗用微量注射器沿著葉鞘扎入到分蘗的生長點(diǎn)部位,注射約20~30 μL疊氮化鈉溶液到生長點(diǎn)部位,將注射后的分蘗掛標(biāo)簽記錄.隨后的逐年選擇過程同1.2.2.

    1.2.4 穗莖注射 疊氮化鈉溶液的配制同1.2.1.在小麥抽穗期,選擇尚未揚(yáng)花的“邯7086”麥穗作為誘變材料,用微量注射器將不同濃度的疊氮化鈉溶液注射到穗莖的腔內(nèi),每莖約注射30~50 μL,每個(gè)濃度處理50穗.隨后的逐年選擇過程同1.2.2.

    1.3 穩(wěn)定變異株系的SSR分子標(biāo)記檢測

    1.3.1 模板DNA的提取 采用SDS法并參照文獻(xiàn)[6]的方法從樣品小麥暗培養(yǎng)的黃花麥芽中提取DNA,純化后取少量的樣品溶于無菌的超純水中制成濃度約為20 ng/μL的模板液.

    1.3.2 PCR反應(yīng)體系的構(gòu)建與引物的選擇 根據(jù)Roder發(fā)表[7-8]的SSR引物,隨機(jī)選取分布于各對染色體上的SSR引物45對,由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成.PCR反應(yīng)采用25 μL體系,其中TaqDNA 聚合酶 5U(0.2 μL),DNA 模板液 0.5 μL,上下游引物各 1 μL,25 mmol/L MgCl22 μL,2.5 mmol dNTP 1 μL,10×buffer 2.5μL,無菌超純水16.8 μL,礦物油15 μL.PCR反應(yīng)在英國TECHNE公司生產(chǎn)的TC-5000PCR儀上進(jìn)行,反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min,94℃變性50 s,50℃退火50 s,72℃延伸1 min,30個(gè)循環(huán);72℃后延伸5 min,4℃保存.

    1.3.3 擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測 擴(kuò)增產(chǎn)物采用6%的聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測,每泳道上樣量為8 μL,在200 V恒電壓下電泳2.5 h,剝膠,銀染,照相,進(jìn)行擴(kuò)增條帶的分析.

    2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

    2.1 不同疊氮化鈉濃度、不同誘變處理方法對M 0代種子發(fā)芽率的影響

    表1 各種處理M0代種子發(fā)芽率

    表1數(shù)據(jù)顯示,疊氮化鈉溶液誘變的小麥種子,隨著疊氮化鈉濃度的提高,對種子的生理損傷加大,M0代種子的發(fā)芽率迅速下降.種子誘變處理時(shí)用氣泵鼓入空氣的處理,M0代種子的發(fā)芽率明顯高于不鼓入空氣的處理,這是因?yàn)椴还娜肟諝馓幚淼男←湻N胚除受到誘變劑疊氮化鈉的損傷外,還受到了無氧呼吸帶來的傷害,盡管無氧呼吸的損傷在0 mmol/L濃度疊氮化鈉處理時(shí)表現(xiàn)不明顯,但在含有疊氮化鈉的各處理中卻表現(xiàn)十分明顯,使處理種子的發(fā)芽率明顯降低.據(jù)田間調(diào)查,用疊氮化鈉溶液誘變處理的小麥種子,大田播種后出苗明顯推遲,長出的麥苗明顯細(xì)弱,生長發(fā)育緩慢,部分弱苗在越冬時(shí)死亡.

    由表1可知,用穎苞內(nèi)滴加、生長點(diǎn)注射和穗莖注射這3種方法誘變處理的M0代種子的發(fā)芽率幾乎不受疊氮化鈉的影響,其原因可能是在種子發(fā)育的早期,受疊氮化鈉毒害嚴(yán)重的子房、合子、早期的胚胎都未能發(fā)育成種子而夭折,受誘變劑損傷較輕或未受損傷的子房、合子、早期的胚胎才發(fā)育成了健康的種子,所以它們的M0代種子的發(fā)芽率幾乎都為100%,穎苞內(nèi)滴加、生長點(diǎn)注射、穗莖注射3種誘變方法處理的“邯7086”M0代種子,播種后出苗、生長發(fā)育都很正常.

    2.2 不同疊氮化鈉濃度、不同誘變處理方法對M 1代種子變異率的影響

    表2 各種處理M1代群體變異率

    由表2可見,疊氮化鈉誘變種子的處理M1代群體植株的變異率明顯高于穎苞內(nèi)滴加、生長點(diǎn)注射、穗莖注射3種方法.且隨著疊氮化鈉濃度的提高M(jìn)1代群體的變異率也提高.種子誘變處理時(shí)用氣泵鼓入空氣的處理,M1代群體的變異率明顯高于不鼓入空氣的處理,且不鼓入空氣的處理M1代群體隨疊氮化鈉濃度增加變異率提高幅度減小.分析原因,種子誘變時(shí)鼓入空氣處理的小麥種子受無氧呼吸的損傷較小,有較多的受疊氮化鈉損傷較嚴(yán)重的種子得以存活,而在不鼓入空氣的處理中無氧呼吸和誘變劑疊同時(shí)對種子造成損傷,使得受疊氮化鈉損傷較嚴(yán)重的種子不能存活,因此鼓入空氣處理的M1代群體變異率高于不鼓入空氣的處理.

    穎苞內(nèi)滴加和生長點(diǎn)注射兩種誘變方法,當(dāng)疊氮化鈉濃度較低(0.5 mmol/L)時(shí)沒有誘變效果,只有疊氮化鈉濃度大于1 mmol/L時(shí),M1代群體中才出現(xiàn)少量的變異,且變異率隨疊氮化鈉濃度的提高增幅不大.分析原因,在穎苞內(nèi)滴加誘變時(shí),由于疊氮化鈉溶液中的-N3-1需要通過極細(xì)的花粉管才能到達(dá)胚囊中影響合子或早期的胚胎細(xì)胞,由于花粉管內(nèi)徑的限制盡管提高了滴加的疊氮化鈉濃度,可是能到達(dá)胚囊中的疊氮化鈉溶液的量是有限的,所以其誘變率較低,M1代群體的誘變率隨疊氮化鈉濃度提高變化不大;生長點(diǎn)注射誘變時(shí),雖然疊氮化鈉溶液直接注射到了生長點(diǎn)部位但注入的量較少,生長點(diǎn)部位被誘變的細(xì)胞也較少,這些被誘變的細(xì)胞在分化過程中又只有很少一部分形成生殖細(xì)胞,所以其M1代群體變異率很低.

    穗莖注射疊氮化鈉溶液的誘變方法,沒有效果.這從疊氮化鈉誘變植物的原理中不難得到解釋,疊氮化鈉本身沒有誘變作用,它的誘變作用是在植物細(xì)胞內(nèi)通過半胱氨酸合成酶代謝產(chǎn)生的,半胱氨酸合成酶能利用疊氮化鈉溶液中的-N3-1合成β-疊氮丙氨酸,而β-疊氮丙氨酸才能作用于細(xì)胞的基因組DNA使其發(fā)生變異.穗莖注射時(shí)疊氮化鈉接觸的是穗莖部位的細(xì)胞,沒有接觸穗部的生殖細(xì)胞,所以在其后代中沒有變異產(chǎn)生.

    2.3 不同疊氮化鈉濃度、不同誘變處理方法的M1代群體變異類型

    表3 各種處理M1代群體變異類型

    表3顯示,種子處理(Ⅰ、Ⅱ)的M1代群體變異類型豐富,和對照相比主要性狀變異表現(xiàn)在株高、葉片蠟質(zhì)層的有無、芒的有無、穗型的改變、成熟期長短、同時(shí)還出現(xiàn)了不能成活的葉綠素缺失的白化與黃化株以及不能正常繁殖后代的不育株;穎苞內(nèi)滴加、生長點(diǎn)注射(Ⅲ、Ⅳ)兩種誘變方法處理的M1代群體變異率低,變異類型不豐富,僅出現(xiàn)了矮桿植株、葉片無蠟質(zhì)層植株、不育株、和葉綠素缺失株.

    從M1代開始對變異群體淘劣優(yōu)選優(yōu),從M3代已經(jīng)開始有穩(wěn)定的變異系出現(xiàn).經(jīng)過多代的選擇我們已經(jīng)從疊氮化鈉誘變“邯7086”的變異系統(tǒng)中選出多個(gè)各具特色的穩(wěn)定種質(zhì)系,其中Ym fl-23、Ym fl-42、Ymfl-46綜合農(nóng)藝性狀好,品比產(chǎn)量超對照.為了從分子水平上說明疊氮化鈉對“邯7086”的誘變效果,對“邯7086”、Ymfl-23、Ymfl-42、Ymfl-46進(jìn)行了SSR分子標(biāo)記檢測.

    2.4 疊氮化鈉誘變“邯7086”變異種質(zhì)系的SSR分子標(biāo)記檢測結(jié)果

    SSR分析采用的引物為:xgwm4、xgwm5、xgwm6、xgwm43、xgwm44、xgwm46、xgwm52、xgwm107、xgwm120、xgwm135、xgwm140、xgwm148、xgwm155、xgwm160、xgwm179、xgwm194、xgwm213、xgwm219、xgwm257、xgwm260、xgwm261、xgwm268、xgwm272、xgwm293、xgwm294、xgwm295、xgwm297、xgwm301、xgwm304、xgwm311、xgwm328、Xgwm334、Xgwm339、xgwm357、xgwm400、xgwm408、xgwm428、xgwm437、xgwm469、xgwm493、xgwm499、xgwm614、xgwm617、xgwm642、xgwm645.其中 xgwm148(圖1)、xgwm304(圖2)、xgwm645(圖3)檢測出了和“邯7086”不同的多態(tài)性DNA片段.

    圖1 引物xgwm148檢測結(jié)果

    圖2 引物xgwm304檢測結(jié)果

    圖3 引物xgwm645檢測結(jié)果

    3 小結(jié)與討論

    (1)疊氮化鈉是一種高效且對哺乳類動物無毒害作用的植物化學(xué)誘變劑,本試驗(yàn)結(jié)果表明,疊氮化鈉對小麥有較強(qiáng)的誘變效應(yīng),能夠使小麥在株高、蠟質(zhì)層、芒型、穗型、葉綠素、育性、生育期等方面發(fā)生性狀變異.在0~2.0 mmol/L濃度范圍內(nèi)隨著疊氮化鈉濃度的提高對小麥的誘變效應(yīng)增強(qiáng).

    (2)在本試驗(yàn)采用的誘變處理方法中,用pH值3.0的疊氮化鈉溶液處理種子并同時(shí)鼓入空氣的處理方法處理后種子出苗率高,后代性狀變異類型豐富,變異率高,是適合小麥誘變處理的一種切實(shí)可行的好方法.

    (3)通過SSR分子標(biāo)記技術(shù)檢測“邯7086”、Ymfl-23、Ymfl-42、Ymfl-46的基因組DNA,從分子水平上證明了疊氮化鈉對小麥的誘變效果.

    (4)利用疊氮化鈉進(jìn)行化學(xué)誘變的方法是創(chuàng)造小麥新種質(zhì)、選育小麥新品種的有效途徑之一,在擴(kuò)大遺傳變異、加速提高育種效率、改進(jìn)育種方法方面有著很大發(fā)展?jié)摿?

    [1]王琳清,陳秀蘭,柳學(xué)余.小麥突變育種學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2004:35-88.

    [2]李社榮,王琳清,施巾幗.疊氮化鈉處理預(yù)輻照冬小麥適宜方法的研究[J].核農(nóng)學(xué)報(bào)1991,5(2):65-71.

    [3]張超美.疊氮化鈉對小麥的誘變效應(yīng)[J].湖北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),1994,14(3):96-60.

    [4]曹欣,楊煜峰,錢強(qiáng)華.疊氮化鈉對不同大麥品種的誘變效應(yīng)[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),1991,3(3):143-146.

    [5]彭紹民.疊氮化鈉誘變水稻生物學(xué)效應(yīng)研究[J].湖北省作物學(xué)會會刊,1987(1):21-23.

    [6]王關(guān)林,方宏筠.植物基因工程原理與技術(shù)[M].北京:科學(xué)出版社,1998:598-599.

    [7]Roder M S,Plaschke J,Konig S U,et al.Abundance,variability and chromosomal location ofmicrosatellites in wheat[J].Mol Gen Genet,1995,246(3):327-333.

    [8]Roder M S,Korzun V,Wendehake K,et al.Amicrosatellite map ofwheat[J].Genetics,1998,149(4):2007-2023.

    猜你喜歡
    鈉溶液疊氮生長點(diǎn)
    從鉬酸鈉溶液中選擇性沉磷研究
    混合:教學(xué)模式的生長點(diǎn)
    教書育人(2020年11期)2020-11-26 06:00:22
    降低乏燃料后處理工藝中HN3 含量的方法研究
    用焦磷酸鈉溶液從土壤中提取腐植酸的規(guī)律
    腐植酸(2019年6期)2019-03-24 07:08:22
    次氯酸鈉溶液清凈乙炔氣的實(shí)驗(yàn)研究
    中國氯堿(2018年6期)2018-07-27 02:50:26
    兩種不同結(jié)構(gòu)納米疊氮化銅的含能特性研究
    火工品(2018年1期)2018-05-03 02:27:56
    齊多夫定生產(chǎn)中疊氮化工藝優(yōu)化
    不斷蓬勃發(fā)展 不斷涌現(xiàn)新生長點(diǎn)的無機(jī)材料
    --先進(jìn)無機(jī)材料論壇例記(Ⅱ)
    不斷蓬勃發(fā)展 不斷涌現(xiàn)新生長點(diǎn)的無機(jī)材料
    --先進(jìn)無機(jī)材料論壇例記(Ⅰ)
    3-疊氮基丙基-β-D-吡喃半乳糖苷的合成工藝改進(jìn)
    非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美xxxx性猛交bbbb| 欧美一区二区国产精品久久精品| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美高清成人免费视频www| aaaaa片日本免费| 嫁个100分男人电影在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 精品福利观看| 99久久精品一区二区三区| 99热这里只有精品一区| bbb黄色大片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 岛国在线免费视频观看| 听说在线观看完整版免费高清| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产中年淑女户外野战色| 欧美色视频一区免费| 亚洲黑人精品在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲黑人精品在线| 免费高清视频大片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 悠悠久久av| 成年女人看的毛片在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 联通29元200g的流量卡| 精品久久久噜噜| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲不卡免费看| 亚洲欧美清纯卡通| 床上黄色一级片| 色在线成人网| 男女那种视频在线观看| 久久九九热精品免费| 听说在线观看完整版免费高清| 热99在线观看视频| av在线蜜桃| 成人永久免费在线观看视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产美女午夜福利| 免费观看人在逋| 最新中文字幕久久久久| 国产一区二区三区视频了| 窝窝影院91人妻| 桃色一区二区三区在线观看| videossex国产| 久久久久久大精品| 免费高清视频大片| 在线免费观看的www视频| 我的女老师完整版在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 日日啪夜夜撸| h日本视频在线播放| 直男gayav资源| 免费看av在线观看网站| 国内精品久久久久久久电影| 午夜亚洲福利在线播放| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 精品久久国产蜜桃| 少妇的逼好多水| 天堂动漫精品| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 精品久久国产蜜桃| or卡值多少钱| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美三级亚洲精品| 中文字幕av在线有码专区| 如何舔出高潮| 日韩av在线大香蕉| avwww免费| 小说图片视频综合网站| 亚洲成av人片在线播放无| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美潮喷喷水| 看片在线看免费视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品电影一区二区三区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 午夜日韩欧美国产| 成人综合一区亚洲| 在线看三级毛片| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲不卡免费看| 能在线免费观看的黄片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 少妇高潮的动态图| 99久久精品一区二区三区| 久久久久精品国产欧美久久久| 免费看日本二区| 国内精品久久久久久久电影| 久久久国产成人免费| 欧美在线一区亚洲| 久久精品国产清高在天天线| 黄色女人牲交| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲18禁久久av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久久成人免费电影| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产欧美日韩一区二区精品| 精品久久久久久久末码| 国产精品女同一区二区软件 | 久久精品国产亚洲av天美| 日韩欧美在线二视频| 成人美女网站在线观看视频| 天堂网av新在线| 少妇的逼水好多| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品亚洲美女久久久| 麻豆成人av在线观看| 欧美日韩黄片免| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 91精品国产九色| 在现免费观看毛片| 国产成人福利小说| 午夜免费成人在线视频| 国产熟女欧美一区二区| 一区二区三区激情视频| 小说图片视频综合网站| 日本黄大片高清| 三级国产精品欧美在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 美女大奶头视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 少妇的逼好多水| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日本-黄色视频高清免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 午夜日韩欧美国产| 日日夜夜操网爽| 国产高清三级在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 日韩欧美在线二视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | .国产精品久久| 亚洲最大成人中文| 国产黄片美女视频| 国产高清不卡午夜福利| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 91狼人影院| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产精品久久久久久久电影| 又粗又爽又猛毛片免费看| 一a级毛片在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 色综合站精品国产| 日韩强制内射视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 色综合站精品国产| 一个人免费在线观看电影| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 好男人在线观看高清免费视频| 成人性生交大片免费视频hd| 两人在一起打扑克的视频| 国产综合懂色| 欧美日本视频| 99视频精品全部免费 在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 精品久久久久久,| 国产精品免费一区二区三区在线| 在线免费观看的www视频| 免费观看人在逋| 国内精品宾馆在线| 麻豆国产97在线/欧美| 国产男人的电影天堂91| 色噜噜av男人的天堂激情| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久热精品热| 亚洲av五月六月丁香网| 又黄又爽又免费观看的视频| 国内精品一区二区在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 国产美女午夜福利| 欧美高清性xxxxhd video| 麻豆一二三区av精品| 亚洲av二区三区四区| 一区二区三区高清视频在线| av国产免费在线观看| 黄色女人牲交| 精品久久久久久久久亚洲 | 夜夜爽天天搞| av视频在线观看入口| 成人午夜高清在线视频| 成人午夜高清在线视频| 亚洲黑人精品在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美色视频一区免费| 99热这里只有是精品在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 成人av在线播放网站| av女优亚洲男人天堂| 午夜老司机福利剧场| 嫩草影院入口| 精品人妻熟女av久视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一区二区三区激情视频| 精华霜和精华液先用哪个| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 97热精品久久久久久| 国产麻豆成人av免费视频| 干丝袜人妻中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产乱人视频| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲av第一区精品v没综合| 精品人妻熟女av久视频| 国产在视频线在精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产av在哪里看| 高清日韩中文字幕在线| 天美传媒精品一区二区| bbb黄色大片| 中文在线观看免费www的网站| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产探花在线观看一区二区| 黄色一级大片看看| 在线观看av片永久免费下载| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久中文看片网| 哪里可以看免费的av片| 国产精品女同一区二区软件 | 国产亚洲精品综合一区在线观看| 日本黄大片高清| 国产精品久久久久久精品电影| 免费观看人在逋| 俄罗斯特黄特色一大片| 免费大片18禁| 最后的刺客免费高清国语| 成人鲁丝片一二三区免费| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲av二区三区四区| av在线蜜桃| 精品一区二区免费观看| 69av精品久久久久久| 99热6这里只有精品| 精品一区二区三区av网在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产三级在线视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 禁无遮挡网站| 日韩欧美在线二视频| 免费看光身美女| 村上凉子中文字幕在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 日本 欧美在线| av视频在线观看入口| 欧美zozozo另类| 免费观看的影片在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 夜夜爽天天搞| 在线观看午夜福利视频| 久99久视频精品免费| 精品日产1卡2卡| 国产精品人妻久久久久久| 成人特级黄色片久久久久久久| 日本色播在线视频| 亚洲av一区综合| 日本欧美国产在线视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 又爽又黄a免费视频| av在线亚洲专区| 成人av一区二区三区在线看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲五月天丁香| 熟女人妻精品中文字幕| 内地一区二区视频在线| 99久久精品一区二区三区| 99久久九九国产精品国产免费| 成人毛片a级毛片在线播放| 一区福利在线观看| 综合色av麻豆| 久久久久九九精品影院| 亚洲欧美精品综合久久99| 啦啦啦韩国在线观看视频| 少妇高潮的动态图| 日本色播在线视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品欧美国产一区二区三| 成人精品一区二区免费| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲最大成人av| 简卡轻食公司| 中文字幕av在线有码专区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 黄色欧美视频在线观看| 国产乱人伦免费视频| 久久中文看片网| 午夜激情福利司机影院| 欧美人与善性xxx| 国产三级在线视频| 制服丝袜大香蕉在线| 美女高潮的动态| 不卡视频在线观看欧美| www日本黄色视频网| 毛片一级片免费看久久久久 | 久久精品国产亚洲av涩爱 | 久99久视频精品免费| 午夜精品一区二区三区免费看| av在线蜜桃| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 日本三级黄在线观看| 在线a可以看的网站| 精品一区二区免费观看| 国产成人影院久久av| 男女那种视频在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 色吧在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 婷婷亚洲欧美| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本在线视频免费播放| 国产精品亚洲美女久久久| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲精品色激情综合| 亚洲黑人精品在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 午夜视频国产福利| 国产精品一区二区性色av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看 | 精品欧美国产一区二区三| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| av天堂在线播放| 少妇的逼好多水| 在现免费观看毛片| 国产 一区 欧美 日韩| 黄色日韩在线| 黄片wwwwww| 美女xxoo啪啪120秒动态图| x7x7x7水蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美三级亚洲精品| 久久精品综合一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 尾随美女入室| 男人舔女人下体高潮全视频| 俺也久久电影网| 国产成人a区在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 超碰av人人做人人爽久久| 色av中文字幕| 精品不卡国产一区二区三区| 长腿黑丝高跟| 干丝袜人妻中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 久久久久久国产a免费观看| bbb黄色大片| 色5月婷婷丁香| 国产不卡一卡二| 最后的刺客免费高清国语| 中文字幕久久专区| 国产男靠女视频免费网站| 日本 欧美在线| 欧美潮喷喷水| 男女啪啪激烈高潮av片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 99久国产av精品| 熟女电影av网| АⅤ资源中文在线天堂| 一本一本综合久久| 中文字幕高清在线视频| 色在线成人网| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产av一区在线观看免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| a级毛片a级免费在线| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久这里只有精品中国| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲无线观看免费| 99久久精品热视频| bbb黄色大片| 亚洲人成网站高清观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品久久国产蜜桃| 三级毛片av免费| 中国美白少妇内射xxxbb| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美日韩乱码在线| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产乱人伦免费视频| 亚洲综合色惰| 成年人黄色毛片网站| 精品国内亚洲2022精品成人| 午夜福利高清视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 免费看av在线观看网站| 黄色一级大片看看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 一个人免费在线观看电影| 国产高清三级在线| 亚洲美女黄片视频| 欧美色视频一区免费| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一区二区三区激情视频| 久久久久久大精品| 亚洲图色成人| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 91久久精品国产一区二区成人| 联通29元200g的流量卡| 午夜影院日韩av| 欧美成人a在线观看| 免费在线观看日本一区| 搡老岳熟女国产| 久久久色成人| 中文资源天堂在线| 99久久精品热视频| 午夜爱爱视频在线播放| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲欧美激情综合另类| av天堂中文字幕网| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲成人久久性| 99国产精品一区二区蜜桃av| 91在线观看av| 黄色女人牲交| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 色视频www国产| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日日撸夜夜添| 国产成人aa在线观看| 日韩国内少妇激情av| 色吧在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品乱码一区二三区的特点| 啪啪无遮挡十八禁网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产亚洲精品av在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲成av人片在线播放无| 少妇人妻一区二区三区视频| 午夜免费激情av| 亚洲无线观看免费| 高清日韩中文字幕在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品国产高清国产av| 国产亚洲91精品色在线| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久久久久久久黄片| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美高清成人免费视频www| 少妇人妻一区二区三区视频| 一本久久中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久亚洲精品不卡| 最近在线观看免费完整版| 日韩欧美在线乱码| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 成人国产综合亚洲| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 不卡视频在线观看欧美| 最新中文字幕久久久久| 久久久久九九精品影院| 中文资源天堂在线| 久久这里只有精品中国| 一本一本综合久久| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品一区二区三区四区久久| 99热这里只有是精品在线观看| 全区人妻精品视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 精品一区二区三区人妻视频| 嫩草影院精品99| 亚洲av电影不卡..在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| or卡值多少钱| 精品久久久久久成人av| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精品国产成人久久av| 色av中文字幕| 国产一区二区三区视频了| 18禁在线播放成人免费| 在线播放国产精品三级| 欧美一区二区精品小视频在线| 日本免费a在线| 九色国产91popny在线| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 午夜免费男女啪啪视频观看 | 美女免费视频网站| 午夜爱爱视频在线播放| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 简卡轻食公司| 又紧又爽又黄一区二区| 一级毛片久久久久久久久女| 中文字幕久久专区| 久久久成人免费电影| 欧美3d第一页| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲,欧美,日韩| 麻豆国产97在线/欧美| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产真实伦视频高清在线观看 | 中文亚洲av片在线观看爽| 狠狠狠狠99中文字幕| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国国产精品蜜臀av免费| 久久人妻av系列| 一区福利在线观看| 国产视频内射| 日本免费一区二区三区高清不卡| 成人性生交大片免费视频hd| 99视频精品全部免费 在线| 毛片一级片免费看久久久久 | 欧美又色又爽又黄视频| 精品人妻熟女av久视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲av免费在线观看| 九色国产91popny在线| 亚洲精品色激情综合| 国产69精品久久久久777片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久国内精品自在自线图片| 九九在线视频观看精品| 在线观看午夜福利视频| 在线观看66精品国产| 久久久久国内视频| 在线观看免费视频日本深夜| 久久午夜福利片| 亚洲经典国产精华液单| а√天堂www在线а√下载| 伦精品一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久精品影院6| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 男女边吃奶边做爰视频| 免费人成在线观看视频色| 99在线人妻在线中文字幕| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久久久久久久大av| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品一及| 乱码一卡2卡4卡精品| 免费av毛片视频| 中文在线观看免费www的网站| 一进一出好大好爽视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品无大码| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲美女黄片视频| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产精品sss在线观看| 精品日产1卡2卡| 国产伦精品一区二区三区视频9| 免费黄网站久久成人精品| 黄色女人牲交| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久精品国产亚洲av天美| 久久这里只有精品中国| 欧美高清性xxxxhd video| 在线观看一区二区三区| 亚洲精品456在线播放app | 日韩欧美精品免费久久| 一级黄色大片毛片| 俺也久久电影网| 全区人妻精品视频| 99久久精品国产国产毛片| 欧美三级亚洲精品| 午夜精品在线福利| 色哟哟哟哟哟哟| 国产淫片久久久久久久久| 成人av一区二区三区在线看| 久久久国产成人免费| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲国产色片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一区二区三区高清视频在线| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲精品亚洲一区二区|