反相高效液相色譜法測定清肝二十七味丸中梔子苷的含量

鄒繼紅

（赤峰學院 醫(yī)學院，內蒙古 赤峰 024000）

反相高效液相色譜法測定清肝二十七味丸中梔子苷的含量

鄒繼紅

（赤峰學院 醫(yī)學院，內蒙古 赤峰 024000）

目的：建立測定清肝二十七味丸中梔子苷的方法.方法：采用HPLC法，色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱，流動相為 0.1%三乙胺（10%磷酸調 pH7.0）- 乙腈（83:17），流速為 1mL·min-1，檢測波長為238nm.結果：梔子苷的進樣量在0.784-3.920μg與峰面積呈良好的線性，回歸方程為：Y＝1419.8X+3.095，（r＝0.9998）；平均加樣回收率為 99.1%，RSD=0.79%.結論：所用方法簡便、快速、準確，適用于清肝二十七味丸中梔子苷的質量控制.

反相高效液相色譜法；清肝二十七味丸；梔子苷；含量測定

清肝二十七味丸又名欽那德貢斯樂，是根據蒙醫(yī)藥學配方理論及現(xiàn)代藥理研究方法研制而成的傳統(tǒng)名方，具有疏肝清熱、健胃消食、殺粘蟲、抑制肝炎病毒、促使HBsAg轉陰的作用[1].主要用于急、慢性肝炎，脾胃虛熱，骨蒸煩悶，食欲不振，惡心嘔逆等癥[2]，是治療肝病的良藥.為了有效控制其質量，作者參考有關文獻[3-5]，采用反相高效液相色譜法對清肝二十七味丸中的梔子苷進行測定，操作簡單、省時，結果準確、可信，精密度、重復性較好.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜系統(tǒng)（美國安捷倫公司）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLER AE240電子天平（瑞士梅特勒公司）；梔子苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110748-200512）；乙腈為色譜純(美國Fisher)；水為娃哈哈純凈水；甲醇為分析純（天津市福晨化學試劑廠）.

蒙藥清肝二十七味丸（內蒙古庫倫蒙藥廠，批號：090413，090414，090415）；陰性對照品的藥材（內蒙古赤峰市中蒙醫(yī)院）.

1.2 方法與結果

1.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫為室溫，流動相為0.1%三乙胺（10%磷酸調pH7.0）-乙腈 （83:17），流速為 1.0mL·min-1，檢測波長為238nm，進樣量20μL.

1.2.2 溶液的制備 精密稱取4.9mg梔子苷對照品，置25mL量瓶中，用流動相溶解，并稀釋至刻度，即得196mg·L-1的對照品貯備溶液.精密吸取貯備溶液2mL，置10mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得39.2mg·L-1的對照品溶液.精密稱取1.5g已研細的清肝二十七味丸，置具塞錐形瓶中，加入25mL50%甲醇，密塞，精密稱定重量，超聲處理（功率：250w，頻率：40KHz）30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液.按處方要求制備不含梔子苷藥材的樣品，同法制成陰性樣品溶液，備用.

1.2.3 陰性對照試驗 取梔子苷對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，在“1.2.1”項的色譜條件下分別進樣 20μL，測定（圖 1）.由圖可知：陰性樣品對梔子苷的測定無干擾，且梔子苷與其他組分可達基線分離.

1.2.4 標準曲線的制備 精密吸取4、8、12、16、20 μL梔子苷對照品貯備溶液，進樣，測定峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為:Y=1419.8X+3.095，（r=0.9998）.結果表明：梔子苷進樣量在0.784～3.920μg與峰面積具有良好的線性關系.

圖 1 對照品（A）、陰性對照（B）、供試品（C）溶液的高效液相色譜圖 1．梔子苷

1.2.5 精密度試驗 取濃度為39.2mg·L-1的對照品溶液及供試品溶液各20μL，分別進樣，重復5次測定峰面積.計算得對照品的RSD=0.76%，樣品的RSD=0.92%，表明儀器精密度良好.

1.2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液，分別于 0、4、8、12、24h 時進樣，測定峰面積.計算得梔子苷峰面積的RSD=1.3%，表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定.

1.2.7 重復性試驗 精密稱取同一批樣品，按“1.2.2”項下方法制備6份供試品溶液，按“1.2.1”項的色譜條件進樣測定.計算得樣品中梔子苷的平均含量為 0.660mg·g-1，RSD=1.1%，表明方法的重復性良好.

1.2.8 加樣回收率試驗 分別精密稱取1.5g已知梔子苷含量的同一批 (批號為090414，含量為0.660mg·g-1)樣品粉末6份，分別精密加入一定量196mg·L-1的梔子苷對照品貯備溶液，按“1.2.2”項方法處理后進樣20μL測定，計算梔子苷回收率，結果見表1.

1.2.9 樣品的測定 取3個批號6份樣品，按“1.2.2”項方法進行處理，然后分別精密吸取20μL對照品溶液和供試品溶液，進樣，測定峰面積，按外標法計算梔子苷的含量，結果見表2.

2 討論

以分光光度計掃描梔子苷對照品溶液，其最大吸收波長為238nm，故選取檢測波長為238nm.

在流動相選擇的過程中，參考有關文獻[6-9]嘗試用乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-水、甲醇-0.2%冰醋酸溶液和水-乙腈-磷酸作為流動相，但梔子苷峰形不佳.經反復試驗，最后當采用文中的條件時，梔子苷的峰形對稱，且與其他組分分離良好.

表2 樣品測定結果（n=3）

樣品的預處理，曾經采用甲醇和50%甲醇溶液分別進行提取，結果發(fā)現(xiàn)50%甲醇溶液的提取效率比較高，所以最終采用50%甲醇溶液為提取溶劑.

分別測定了超聲提取20min、30min和40min的樣品，結果提取30min和40min的樣品測得的結果比較接近，所以最后采用超聲30min.

〔1〕哈森高娃，白恒慧.清肝二十七味丸(欽那德貢斯樂)治療病毒性乙型肝炎[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2007(6):20.

〔2〕陳東龍.清肝二十七味丸治療肝病的臨床觀察[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2007(6):16.

〔3〕熊野娟.HPLC測定復腎寧片中梔子苷的含量[J].江西化工，2007（4）：97-98.

〔4〕席海山.HPLC測定蒙藥沏其日甘-5中梔子苷的含量[J].光譜實驗室，2009，26(3)：711-713.

〔5〕郝玉霞,王中彥,曹侃，等.HPLC 法測定梔子柏皮軟膠囊中梔子苷和小檗堿的含量[J].藥物分析雜志，2007，27（12）：1913-1916.

〔6〕李健，饒凡，吳逢波，等.HPLC測定鼻竇炎顆粒中的梔子苷[J].中國藥師，2008，11（9）：1076-1077.

〔7〕拉喜那木吉拉，胡春.HPLC測定蒙藥六味木香散中梔子苷含量[J].中成藥，2008，30（1）：147-148.

〔8〕蘇明武，王坤玲，鄧超，等.高效液相色譜法測定炎熱清膠囊藥材浸膏梔子苷含量[J].醫(yī)藥導報，2008，27（11）：1386-1387.

〔9〕肖培云，楊永壽，劉光明.高效液相色譜法測定小兒導赤片中梔子苷的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（5）：1110-1111.

R286.0

A

1673-260X（2011）11-0097-03