矮生福祿考組織培養(yǎng)快速繁殖的研究

劉 陽，高 洋，蘇明月，寧淑香，姜長(zhǎng)陽

（遼寧師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，遼寧 大連116029）

1 引言

福祿考（Phlox drummondii）又稱草夾竹桃、洋梅花、桔梗石竹等，屬于花荵科福祿考屬一年生草本花卉，因其花色多樣，姿態(tài)優(yōu)雅，既可作為花壇、花叢和庭院栽培，又可上盆作為擺花，使其具有極佳的觀賞美化效果，因此受到人們的歡迎，并多有栽培。在長(zhǎng)期的栽培中，福祿考形成了很多變種。大連地區(qū)近年來把矮生福祿考（Phlox drummondii var nana）栽培到花壇上，除了具有福祿考的所有觀賞特點(diǎn)外，又因具有植株矮小特點(diǎn)而倍受人們的青睞。為此，有關(guān)園林綠化部門都要進(jìn)行栽培。但由于福祿考本身存在發(fā)芽率低［1］的特點(diǎn)，而矮生福祿考這種特點(diǎn)更加突出，使其難以獲得用于栽培所需的大量種苗，極大地限制了矮生福祿考的觀賞栽培。為解決矮生福祿考觀賞栽培所需種苗的問題，筆者對(duì)其進(jìn)行了組織培養(yǎng)及快速繁殖的研究。雖然目前多有觀賞植物組織培養(yǎng)及快速繁殖研究的報(bào)告［2～5］，但迄今未見福祿考組織培養(yǎng)及快速繁殖研究的報(bào)道。

2 材料和方法

2．1 實(shí)驗(yàn)材料

將栽培于大連市區(qū)花壇上生長(zhǎng)非常旺盛的福祿考具有葉片嫩莖采回實(shí)驗(yàn)室后，剪掉葉片，將有芽嫩莖作為研究材料。

2．2 材料的滅菌

具體的滅菌方法參見張蕾蕾等的穿龍薯蕷的研究［6］。

2．3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件參見張嵩巖徐長(zhǎng)卿等的研究［7］。

2．4 試驗(yàn)方法

2．4．1 生長(zhǎng)芽的培養(yǎng)

將無菌幼嫩切成長(zhǎng)0．4cm左右具有生長(zhǎng)點(diǎn)的莖段后，接種到以 MS、1／2MS、1／3MS、B5、N6、LS和 White為基本培養(yǎng)基，附加IBA0．1mg·L－1＋I(xiàn)AA0．2mg·L－1的培養(yǎng)基上，進(jìn)行芽的生長(zhǎng)培養(yǎng)。芽的生長(zhǎng)培養(yǎng)試驗(yàn)重復(fù)3次，每種培養(yǎng)基接種培養(yǎng)100個(gè)材料。

2．4．2 生長(zhǎng)芽分化培養(yǎng)

將上述培養(yǎng)的生長(zhǎng)芽從基部切下后，接種到以MS＋AgNO31．0mg·L－1為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度6－BA和NAA的培養(yǎng)基上，進(jìn)行不同濃度6－BA、NAA對(duì)生長(zhǎng)芽分化培養(yǎng)的試驗(yàn)。生長(zhǎng)芽分化培養(yǎng)試驗(yàn)重復(fù)3次，每種處理接種培養(yǎng)100個(gè)材料。

2．4．3 不定芽生根培養(yǎng)

將上述培養(yǎng)的不定芽從基部切下后，把不定芽下部切口在無菌的NAA20mg·L－1的溶液中處理5min，接種到 White＋I(xiàn)AA0．4mg·L－1的培養(yǎng)基上，進(jìn)行不定芽生根培養(yǎng)試驗(yàn)。不定芽生根培養(yǎng)試驗(yàn)重復(fù)4次，每種處理接種培養(yǎng)200個(gè)不定芽。

2．4．4 試管苗生根繼代培養(yǎng)

將以上培養(yǎng)的試管苗切成長(zhǎng)1．5cm左右、具有2個(gè)葉片（實(shí)際上是具有2個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)）的莖段后，采用不定芽生根培養(yǎng)的方法，進(jìn)行試管苗的生根繼代培養(yǎng)。試管苗生根繼代培養(yǎng)試驗(yàn)重復(fù)3次，每次繼代培養(yǎng)5代，每次繼代接種培養(yǎng)200個(gè)莖段。

2．4．5 試管苗的移栽與定植

把培養(yǎng)著繼代培養(yǎng)試管苗的培養(yǎng)瓶瓶塞打開，在直射光下煉苗3d，取出試管苗，移栽到上半層為干凈河沙的營(yíng)養(yǎng)缽中。移栽后前10d要保持濕度90%以上、無直射光的環(huán)境條件。移栽試驗(yàn)重復(fù)2次，每次移栽800株。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

3．1 不同培養(yǎng)基對(duì)芽生長(zhǎng)培養(yǎng)的影響

培養(yǎng)到35d時(shí)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表1。由表1可見，不同的培養(yǎng)基對(duì)芽的生長(zhǎng)影響不同。以B5、N6、LS為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)芽不能生長(zhǎng)；以 MS、1／2MS、1／3MS、White為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)芽均能生長(zhǎng)；其中以1／2MS、1／3MS為基本培養(yǎng)基不僅培養(yǎng)芽生長(zhǎng)率達(dá)到了92%以上，而且生長(zhǎng)芽長(zhǎng)勢(shì)好。觀察也表明，在這2種培養(yǎng)基上，培養(yǎng)8d左右可見培養(yǎng)芽開始生長(zhǎng)，接著，伴隨著生長(zhǎng)芽的不斷生長(zhǎng)，芽的生長(zhǎng)率也不斷增加。培養(yǎng)到35d時(shí)，培養(yǎng)的生長(zhǎng)芽就會(huì)生長(zhǎng)為高0．8cm以上、莖粗0．2cm左右、具有3～6個(gè)葉片的生長(zhǎng)芽。3次重復(fù)試驗(yàn)的結(jié)果基本相同。以上結(jié)果說明，1／3MS或1／2MS＋I(xiàn)BA 0．1mg·L－1＋I(xiàn)AA0．2mg·L－1這一培養(yǎng)基是矮生福祿考芽生長(zhǎng)的理想培養(yǎng)基。

表1 不同培養(yǎng)基對(duì)芽生長(zhǎng)的影響

3．2 不同濃度6－BA、NAA對(duì)生長(zhǎng)芽分化培養(yǎng)的影響

觀察表明，培養(yǎng)到11d時(shí)，可見在有的生長(zhǎng)芽基部分化出不定芽，隨后，隨著分化數(shù)的增加，在先分化的生長(zhǎng)芽基部又會(huì)分化出多個(gè)不定芽。培養(yǎng)到45d時(shí)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表2。由表2可見，不同的6－BA和NAA對(duì)生長(zhǎng)芽分化的影響不同。當(dāng)基本培養(yǎng)基中不加任何6－BA和NAA，或6－BA的濃度達(dá)到了1．6mg·L－1，或 NAA 的濃度為1．0mg·L－1時(shí)，所培養(yǎng)的生長(zhǎng)芽不能分化；在6－BA的濃度為0．4mg·L－1和1．2mg·L－1、NAA 的濃度為0．5mg·L－1時(shí)，所培養(yǎng)的生長(zhǎng)芽分化效果也不理想；在6－BA的濃度為0．8mg·L－1、NAA的濃度為0．1mg·L－1時(shí)，分化效果最理想，不僅分化率為92%、每個(gè)培養(yǎng)生長(zhǎng)芽能分化出4．5個(gè)不定芽，而且外觀上分化的不定芽長(zhǎng)勢(shì)好。觀察還表明，培養(yǎng)到45d時(shí)，在6－BA的濃度為0．8mg·L－1、NAA的濃度為0．1mg·L－1的培養(yǎng)基上，分化的不定芽呈叢生狀，每個(gè)分化的不定芽不僅高0．8cm左右、莖粗0．2cm左右，而且葉色嫩綠、葉片伸展。3次重復(fù)試驗(yàn)的結(jié)果基本一致。以上結(jié)果說明，MS＋Ag－NO31．0mg· L－1＋ 6 － BA0．8mg · L－1＋NAA0．1mg·L－1這種培養(yǎng)基是矮生福祿考生長(zhǎng)芽分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

表2 不同培養(yǎng)基對(duì)芽生長(zhǎng)的影響

3．3 不定芽生根培養(yǎng)

接種培養(yǎng)26d時(shí)觀察統(tǒng)計(jì)證明：4次重復(fù)試驗(yàn)的平均生根率為95．4%，并且培養(yǎng)的試管苗高4．2～5．3cm，每株試管苗具有5～8個(gè)葉片，且外觀上生長(zhǎng)非常旺盛。以上結(jié)果說明，用濃度為20mg·L－1的NAA溶液對(duì)不定芽基部處理5min后，接種到 White＋I(xiàn)AA0．4mg·L－1培養(yǎng)基上生根的方法是矮生福祿考不定芽生根培養(yǎng)的理想方法。

3．4 試管苗生根繼代培養(yǎng)

觀察統(tǒng)計(jì)證明：每次繼代培養(yǎng)的周期為24d，3次重復(fù)試驗(yàn)的平均生根率為97．8%，其繼代培養(yǎng)的試管苗長(zhǎng)勢(shì)與不定芽生根培養(yǎng)的長(zhǎng)勢(shì)基本一致。平均每代的繁殖系數(shù)為2．9。

3．5 試管苗的移栽與定植

移栽后9d可見成活并長(zhǎng)出新葉，移栽后30d統(tǒng)計(jì)，2次移栽共成活1 538株，移栽的平均成活率為96．1%。

將移栽成活的試管苗于5月上旬定植到大連市區(qū)的花壇上。共定植了1 500株，成活1 472株，定植成活率為98．1%。定植于花壇上的試管苗不僅保持了矮生福祿考的所有植物學(xué)性狀，而且出現(xiàn)了生長(zhǎng)旺盛、根系增加1倍左右、平均花期延長(zhǎng)7d、秋末冬初枯萎晚10d左右的特點(diǎn)。

4 結(jié)語

在本研究的試管苗生根繼代培養(yǎng)階段，1株試管苗一年能繁殖出2．915（約為85萬）株。除掉各種不利因素，一年能保證繁殖50萬株試管苗，達(dá)到了快速繁殖的目的。并且試管苗移栽成活率較高，容易定植成活。這證明本研究所獲得的快速繁殖技術(shù)，能滿足人們對(duì)矮生福祿考觀賞栽培種苗的需求。

在本研究中，出現(xiàn)了試管苗生長(zhǎng)旺盛、根系增加1倍左右、平均花期延長(zhǎng)7d、秋末冬初枯萎晚10d左右的特點(diǎn)。產(chǎn)生這些特點(diǎn)主要是由以下原因引起的，包括研究所用的實(shí)驗(yàn)材料是選擇生長(zhǎng)非常旺盛植株的嫩莖，這種材料本身具有生長(zhǎng)旺盛的遺傳性，在試管苗的培養(yǎng)過程中，使用了較高濃度的生長(zhǎng)素。試管苗定植后其體內(nèi)的生長(zhǎng)素仍發(fā)揮著后效作用，從而促進(jìn)了植株生長(zhǎng)，使得植株生長(zhǎng)旺盛；生長(zhǎng)素的后效作用促進(jìn)定植的試管苗形成非常發(fā)達(dá)的根系，既能促進(jìn)吸收更多的營(yíng)養(yǎng)，也促進(jìn)了營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，使之出現(xiàn)花期延長(zhǎng)的現(xiàn)象。

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