當歸藤中總黃酮提取工藝研究

楊瑞云，管海波，張 革，蒙春燕，吳星燕，黃忠京，李 俊

(1.藥用資源化學與藥物分子工程教育部重點實驗室，廣西師范大學化學化工學院，廣西桂林541004;2.廣西民族大學化學與生態(tài)工程學院，廣西南寧530006;3.廣西師范大學環(huán)境與資源學院，廣西桂林541004)

當歸藤中總黃酮提取工藝研究

楊瑞云1，管海波1，張 革1，蒙春燕1，吳星燕1，黃忠京2，李 俊3

(1.藥用資源化學與藥物分子工程教育部重點實驗室，廣西師范大學化學化工學院，廣西桂林541004;2.廣西民族大學化學與生態(tài)工程學院，廣西南寧530006;3.廣西師范大學環(huán)境與資源學院，廣西桂林541004)

對當歸藤中總黃酮提取工藝進行研究。采用正交設(shè)計實驗，考察了乙醇濃度、液料比、提取時間、提取次數(shù)對當歸藤中總黃酮提取率的影響。結(jié)果表明，最佳提取工藝為60%乙醇，液料比12∶1，提取3次，每次3h，此工藝條件下總皂苷的提取率為0.28%。

當歸藤，總黃酮，正交實驗，提取工藝

當歸藤(Embelia parviflora Wall)系紫金?？扑崽僮訉僦参?，別名小花酸藤子、篩其蔃、大力王，主要分布在廣西、廣東、云南、貴州等地。當歸藤味苦、性溫，具有活血散瘀、補腎強腰之功效，常用于治療貧血、跌打損傷、骨折等多種病癥［1］。黃酮類化合物廣泛存在于植物界，在抗菌、消炎、抗突變、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老［2－3］等方面具有很好的效果。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥、食品工業(yè)的快速發(fā)展，黃酮類化合物以其活性高、作用廣泛等特點越來越受到人們的關(guān)注［4］。本課題組在對當歸藤化學成分的研究中，分離得到了大量黃酮類化合物，而針對當歸藤中總黃酮提取工藝的研究尚未見報道。本文通過正交實驗法對當歸藤總黃酮的提取工藝進行了研究，為開發(fā)和利用當歸藤中的黃酮類成分提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

當歸藤 購自桂林市藥材市場;蘆丁對照品批號Q8070812，購于成都曼斯特生物科技有限公司;亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇等試劑 均為分析純。

TU－1901雙光束紫外可見分光光度計 北京普析通儀器有限公司;BS124S型電子天平 賽多利斯(北京)科學有限公司;R－1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 鄭州長城科工貿(mào)有限公司;DZF－1B型真空干燥箱 上海躍進醫(yī)療器械廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 當歸藤總黃酮含量的測定［3］

1.2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取已干燥至恒重的蘆丁對照品5mg，置于50mL容量瓶中，用80%甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得0.10mg/mL蘆丁對照品溶液。

1.2.1.2 測定波長的選擇 精密量取蘆丁對照品液

2.0mL于10mL具塞試管中，加80%甲醇溶液至5mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min后，再加入10%硝酸鋁試液0.3mL，搖勻，放置6min，加入1.5mL 10%的氫氧化鈉溶液，加80%甲醇至刻度，搖勻。放置15min后，以不加蘆丁對照品溶液做參比，于紫外可見分光光度計400～600nm波長范圍內(nèi)進行掃描，確定其測定波長為500nm。

1.2.1.3 標準曲線的繪制 精密吸取蘆丁對照品溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL具塞試管中，各加入 80%甲醇溶液至 5mL，再加0.3mL5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6min后，加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加10%氫氧化鈉溶液1.5mL，用80%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，以相應(yīng)試劑作空白，15min后在500nm波長處測定吸光度。以蘆丁濃度(x)為橫坐標，吸光度(y)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:y=7.1312x+0.0573，相關(guān)系數(shù)R2=0.9995。

1.2.1.4 樣品液的制備和黃酮含量的測定 準確稱取5g已干燥至恒重的當歸藤粗粉，進行回流提取，提取液過濾后減壓濃縮，用80%甲醇定容至100mL。精密量取樣品液0.1mL，按1.2.1.3項操作的方法測定吸光度，由回歸方程計算樣品總黃酮的含量。

1.2.2 單因素實驗

1.2.2.1 乙醇濃度的考察 稱取當歸藤藥材6份，每份10g，分別以10%、30%、50%、60%、70%、80%、95%的乙醇回流提取，第一次用10倍量的液料比提取2h，第二次提取1h，合并兩次提取液，過濾，濃縮得當歸藤提取物浸膏，按照1.2.1.4項操作，測定吸光度，由回歸方程計算總黃酮得率。

1.2.2.2 液料比的考察 稱取當歸藤藥材5份，每份10g，分別用液料比為8∶1、10∶1、12∶1、16∶1、20∶1的80%乙醇回流提取2h，過濾，濃縮得浸膏，按照1.2.1.4項操作，測定吸光度，由回歸方程計算總黃酮得率。1.2.2.3 提取時間的考察 稱取當歸藤藥材5份，每份10g，用50mL 80%乙醇回流提取，提取時間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h，過濾，濃縮得浸膏，按照1.2.1.4項操作，測定吸光度，由回歸方程計算總黃酮得率。

1.2.2.4 提取次數(shù)的考察 稱取當歸藤藥材5份，每份10g，用50mL 80%乙醇回流提取2h，提取次數(shù)分別為1、2、3、4、5次，過濾，濃縮得浸膏，按照1.2.1.4項操作，測定吸光度，由回歸方程計算總黃酮得率。1.2.3 正交實驗 根據(jù)單因素實驗結(jié)果，選取乙醇濃度(A)、液料比(B)、提取時間(C)、提取次數(shù)(D)為考察因素，以測得的提取樣品中總黃酮含量為考察指標，采用L9(34)正交表進行實驗，因素與水平見表1。

表1 因素水平表

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實驗結(jié)果

2.1.1 乙醇濃度對當歸藤總黃酮提取效果的影響

由圖1可知，在較低乙醇濃度時，隨著乙醇濃度的增加，總黃酮得率也逐漸增加，但當乙醇濃度超過60%時，總黃酮得率隨乙醇濃度的增加反而減少，可能是隨著乙醇濃度的增大，脂溶性雜質(zhì)增多的原因。因此，選擇乙醇濃度60%左右進行考察。

圖1 乙醇濃度對當歸藤總黃酮提取的影響

2.1.2 液料比對當歸藤總黃酮提取效果的影響 由圖2可知，隨著液料比增加，總黃酮得率也在不斷增大。但當液料比大于12∶1時，總黃酮得率增加緩慢，即當歸藤中黃酮類化合物溶出量已趨向最大值。從環(huán)境保護和節(jié)約溶劑的角度出發(fā)，選擇液料比12∶1左右作為考察對象。

圖2 液料比對當歸藤總黃酮提取的影響

2.1.3 提取時間對當歸藤總黃酮提取效果的影響

由圖3可知，提取時間越長，總黃酮得率越大，當提取2.5h后，總黃酮得率增長速度有所減緩?？紤]到提取時間過長，更多的雜質(zhì)被溶出而影響檢測，選擇2.5h為最佳提取時間。

圖3 提取時間對當歸藤總黃酮提取的影響

2.1.4 提取次數(shù)對當歸藤總黃酮提取效果的影響由圖4可知，隨著提取次數(shù)增加，總黃酮得率也增加。但提取3次后，總黃酮得率變化曲線已較為平緩?？紤]到生產(chǎn)工藝對時間的要求和溶劑的損耗費，提取次數(shù)以3次為宜。

2.2 正交實驗結(jié)果

正交實驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。根據(jù)表2中的極差R值分析可知，影響當歸藤總黃酮提取的主次因素為B>A>C>D，即液料比>乙醇濃度>提取時間>提取次數(shù)。從表3方差分析可知，B為顯著因素，其它三個為不顯著因素。綜合以上因素，在所選因素水平范圍內(nèi)，最佳提取參數(shù)組合為A2B3C3D2，即60%乙醇、液料比12∶1、提取時間3h/次、提取3次。

圖4 提取次數(shù)對當歸藤總黃酮提取的影響

表2 正交實驗結(jié)果

2.3 最佳提取工藝條件的驗證

按上述最佳提取工藝條件進行3次驗證實驗，其結(jié)果見表4。由驗證結(jié)果可知，按最佳工藝條件得到的總黃酮含量為0.28%，均高于其他各正交實驗值，RSD=1.32%(n=3)，說明此工藝條件穩(wěn)定、可行。

表3 方差分析結(jié)果

表4 驗證實驗結(jié)果

3 結(jié)論

通過正交實驗法對當歸藤總黃酮的提取工藝進行了優(yōu)化，得到最佳提取條件為60%乙醇、液料比12∶1、每次提取3h、提取3次;當歸藤總黃酮提取效果影響最大的是液料比，其次是乙醇濃度和提取時間，影響最小的是提取次數(shù)。因此，在進行當歸藤總黃酮的提取時，必須注意各工藝參數(shù)的調(diào)控。按此工藝重復(fù)驗證提取3次，總黃酮得率為0.28%，說明此工藝合理、簡單、穩(wěn)定性好。

［1］陳家源，盧文杰，王雪芬，等.小花酸藤子化學成分的研究［J］.華西藥學雜志，1998，13(2):95－96.

［2］馬陶陶，張群林，李俊.中藥總黃酮的含量測定方法［J］.安徽醫(yī)藥，2007，11(11):1030－1032.

［3］楊瑞云，何瑞杰，李遠，等.正交實驗法優(yōu)選廣豆根中總黃酮的提取工藝［J］.中藥材，2009，32(3):441－443.

［4］王桂玲，房建強，李歡，等.正交實驗法優(yōu)選拳參中總黃酮的提取工藝［J］.西北藥學雜志，2009，24(2):107－109.

Study on the extraction condition of total flavonoids from Embelia parviflora Wall

YANG Rui－yun1，GUAN Hai－bo1，ZHANG Ge1，MENG Chun－yan1，WU Xing－yan1，HUANG Zhong－jing2，LI Jun3
(1.Key Laboratory for Chemistry and Molecular Engineering of Medincinal Resources，Ministry of Education of China，School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi Normal University，Guilin 541004，China;2.School of Chemistry and Ecological Engineering，Guangxi University for Nationalities，Nanning 530006，China;3.School of Environment and Resources Science，Guangxi Normal University，Guilin 541004，China)

The extraction techniques of the total flavonoids in Embelia parviflora Wall were studied.Orthogonal test was carried out to investigate the effects of concentration of solvent，the radio liquid to material，time length of extraction，and frequency of extraction on extraction results of total flavonoids from Embelia parviflora Wall.The optimum extraction technique was extracted Embelia parviflora Wall in 60%ethanol with the ratio of liquid to material at 12∶1 for 3 times，with 3h for each time.Under these conditions the extraction yield was 0.28%.

Embelia parviflora Wall;total flavonoids;orthogonal test;extraction techniques

TS201.2

B

1002－0306(2011)04－0217－03

2010－03－22

楊瑞云(1978－)，女，博士，副教授，主要從事天然有機化學研究。

973計劃前期研究專項(2007CB516805);藥用資源化學與藥物分子工程教育部重點實驗室主任基金(桂科能0630006－5D08);廣西科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究(桂科基0731050);廣西師范大學大學生創(chuàng)新實驗計劃項目。