高效液相色譜法測定刺玫果中橡槲皮素的含量

王曉林

(吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林吉林132022)

高效液相色譜法測定刺玫果中橡槲皮素的含量

王曉林

(吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林吉林132022)

目的:建立刺玫果中槲皮素含量測定的方法。方法:采用高效液相色譜法測定，色譜柱為Shim－pack VP－ODS C18(4.6mm×150mm，5μm，Shimadzu technology)，以0.2%磷酸水溶液(A)和甲醇(B)進行梯度洗脫，流速為1.0mL/min;進樣量為20μL;檢測波長為370nm;柱溫40℃。結(jié)果:槲皮素在0.05166～0.82656μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999。平均回收率為97.38%，RSD為1.79%。結(jié)論:采用高效液相色譜法測定刺玫果中槲皮素含量，方法簡便、準(zhǔn)確，可以用于刺玫果的質(zhì)量控制。

刺玫果，槲皮素，高效液相色譜法

刺玫果系薔薇科薔薇屬植物山刺玫(Rosa davurica Pall.)的成熟果實，又名野薔薇果。刺玫果形如瓶狀、色鮮紅、味酸甜，是一種經(jīng)濟價值極高的野生果類。該果實性溫，味酸，營養(yǎng)豐富，果實中含有大量的維生素、氨基酸、黃酮類和鞣質(zhì)類化合物，民間大量采食或用于泡茶、泡酒等［1－2］，目前市場上已出現(xiàn)由該果汁為主研制的保健食品及保健飲料［3］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明:該果無毒副作用，具有健脾理氣、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、抗衰老、抗疲勞、耐缺氧、增強免疫力、保肝、防癌及促智等多種功效，尤其是其中的總黃酮類物質(zhì)可加快血液流速，降低血液粘度，用于治療腦血栓、腦動脈硬化及冠心?。?］。目前，已從刺玫果中分離出金絲桃苷、銀椴苷、橙皮苷及槲皮素4種黃酮類物質(zhì)［5］。槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗過敏、抗菌、抗病毒、清除體內(nèi)自由基、抑制惡性腫瘤生長和轉(zhuǎn)移等多方面藥理作用［6］，但目前有關(guān)刺玫果中槲皮素含量的測定尚未見報道。為此，本實驗采用HPLC法測定刺玫果中槲皮素的含量，從而為刺玫果這一食藥同源的果類新嬌的進一步應(yīng)用與開發(fā)提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

刺玫果 由延吉市林業(yè)局提供，經(jīng)本院生藥學(xué)教研室鑒定為薔薇科薔薇屬植物山刺玫(Rosa davurica Pall.)的成熟果實;槲皮素對照品 購自中國藥品生物制品檢定所，批號081－9003，供含量測定用;甲醇 色譜純，天津大茂化學(xué)試劑公司;水 為重蒸餾水;其余所用試劑 均為分析純。

LC－20AB型液相色譜儀、SPD－M20A二極管陣列檢測器 日本島津儀器有限公司;BP211D型電子天平 Sartorius公司，RT－08手提式高速中藥粉碎機

大德樂機械有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱為Shim－pack VP－ODS C18(4.6mm×150mm，5μm，Shimadzu technology);流動相:A為0.2%磷酸溶液，B為甲醇;0～10min，90%A;10～20min，90%～60%A;20～40min，60%～30%A;40～55min，30%～10%A;55～58min，10%～90%A;60～65min，90%A;流速:1.0mL/min;進樣量:20μL;檢測波長:370nm;柱溫:40℃［7－8］。

1.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的槲皮素對照品0.50mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升約含槲皮素50μg的溶液，即得對照品溶液。

1.2.3 供試樣品溶液的制備 取刺玫果適量，粉碎，精密稱取10.0g，置100mL圓底燒瓶中，加70%乙醇40mL，水浴加熱回流3h，過濾，取濾液，剩余殘渣中再加入70%乙醇40mL，重復(fù)以上操作兩次，將三次濾液合并，真空濃縮回收乙醇，殘渣用40mL甲醇溶解，過濾，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

1.2.4 系統(tǒng)適用性實驗 分別取對照品溶液、供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1、圖2。在此條件下槲皮素和其它成分可達(dá)到基線分離。

圖1 槲皮素對照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取槲皮素對照品溶液(51.66μg/mL)0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL，分別置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以槲皮素對照品進樣濃度(C，μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程為:A=672.3C－689.83，R=0.9999，結(jié)果表明槲皮素在0.05166～0.82656μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 精密度實驗

精密吸取配制好的對照品溶液20μL，重復(fù)進樣5次，測定槲皮素峰面積積分值，RSD為2.68%(n=5)，實驗數(shù)據(jù)見表1，結(jié)果表明精密度良好。

表1 精密度實驗

2.3 穩(wěn)定性實驗

取供試樣品溶液，按上述色譜條件，分別于0、1、3、5、7h各進樣20μL，測定槲皮素峰面積積分值，RSD為2.31%，實驗數(shù)據(jù)見表2，結(jié)果表明樣品在7h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性實驗

2.4 重復(fù)性實驗

精密稱取刺玫果樣品5份，按1.2.3項制備供試樣品溶液，按1.2.1色譜條件進行分別測定，計算槲皮素含量，實驗數(shù)據(jù)見表3，所測刺玫果樣品中槲皮素平均含量16.02μg/g，RSD為2.82%。

表3 重現(xiàn)性實驗

2.5 加樣回收率實驗

稱取已知含量的刺玫果適量(含量為16.11μg/g)，精密稱取10.0g，共5份，分別置于100mL圓底燒瓶中，加70%乙醇40mL，水浴加熱回流3h，過濾，取濾液，剩余殘渣中再加入70%乙醇40mL，重復(fù)以上操作兩次，將三次濾液合并，真空濃縮回收乙醇，每份殘渣中分別加入對照品溶液3mL，然后再加入40mL甲醇溶解，過濾，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，按1.2.1色譜條件測定，結(jié)果表明，平均回收率為97.38%，RSD為1.79%(見表4)。

表4 回收率實驗結(jié)果

2.6 樣品測定

取三份刺玫果樣品，按1.2.3方法操作，制成供試品溶液，再按1.2.1色譜條件進行測定。測得槲皮素的含量分別為16.11、15.96、16.01μg/g。

3 討論

3.1 在流動相的選擇上，根據(jù)參考文獻主要選擇0.2%磷酸水溶液－甲醇為流動相，分別采用等度洗脫和梯度洗脫兩種方法，結(jié)果表明，梯度洗脫槲皮素出峰時間約為33min左右，峰型良好，與其它組分能夠有效分離，故以0.2%磷酸水溶液(A)和甲醇(B)進行梯度洗脫，程序為0～10min，90%A;10～20min，90%～60%A;20～40min，60%～30%A;40～55min，30%～10%A;55～58min，10%～90%A;60～65min，90%A。3.2 在供試品溶液的制備中，對提取方法(乙醇回流、甲醇超聲)和供試品溶液的濃度進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)刺玫果實驗量為10.0g，采用70%乙醇熱回流法為佳。

3.3 本實驗建立的方法操作合理簡便，方法精密度高，重復(fù)性及線性關(guān)系良好，回收率令人滿意，可為含刺玫果的功能性食品的含量測定提供依據(jù)。

［1］韓云，管正學(xué).野玫瑰果的營養(yǎng)成分分析［J］.食品科學(xué)，1991，144(12):38－40.

［2］張國貞，李芳蘭，張金梅.野生刺玫果營養(yǎng)成分分析及評價［J］.食品研究與開發(fā)，2001，22(6):38－40.

［3］郭向紅，張鵬，匡海學(xué)，等.刺玫果口服液中沒食子酸甲酯葡萄糖苷的含量測定［J］.中醫(yī)藥信息，1999，16(3):53－54.

［4］俞作仁，王文莉，呂娟濤.刺玫果化學(xué)成分及藥理作用研究進展［J］.中草藥，2002，33(2):188－190.

［5］Kuang Haixue.Chemical constituents of pericarps of Rosa davurica Pall［J］.Chem Pharm Bull，1989，37(8):2232－2234.

［6］許進軍，何東初.槲皮素研究進展［J］.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，13(4):1095－1097.

［7］張萌萌，杜守穎.HPLC測定滇白珠藥材中槲皮素的含量［J］.中國中藥雜志，2007，32(1):64－65.

［8］林霄，劉布鳴，陳明生.高效液相色譜法測定崗松中槲皮素的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20(1):102－103.

Determination of quercetin in Rosa davurica.Pall by HPLC

WANG Xiao－lin
(School of Pharmaceutical Engineering and Chemistry，Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin 132022，China)

Objective:To develop a method for the determination of quercetin in Rosa davurica.Pall.Method:HPLC analysis method was applied using CH3OH－0.2%H3PO4as gradient elution mobile phase with Shim－pack VP－ODS C18(4.6mm ×150mm，5μm)column.The flow rate，injection volume of the sample and the column temperature were 1.0mL/min，20μL，40℃respectively and the UV detection wave－length was set at 370nm.Results:

There was good linear relationship between integral value of peak area and quercetin in the range of 0.05166～0.82656μg(r=0.9999).The average recovery of quercetin was 97.38%with the RSD of 1.79%.Conclusion:The determination of quercetin in Rosa davurica.Pall with HPLC method was studied in detail.The method was convenient and accurate which can be used for the quality control of Rosa davurica.Pall.

Rosa davurica.Pall;quercetin;HPLC

TS207.3

A

1002－0306(2011)04－0370－03

2010－01－27

王曉林(1969－)，男，碩士，副教授，主要從事天然藥物化學(xué)成分及其活性的研究。

吉林省教育廳重點計劃項目(吉教科合字［2006］第122號)。