IgD型多發(fā)性骨髓瘤患者實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果分析

耿紅蓮,王淇泓,趙文靜,竺 蓓,仲人前

(第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科、全軍臨床免疫中心,上海200003)

多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是漿細(xì)胞單克隆增生的惡性腫瘤,實(shí)驗(yàn)室檢查以血清蛋白電泳中出現(xiàn)異常濃集區(qū)帶,即M蛋白帶最有診斷價(jià)值。根據(jù)其增生的漿細(xì)胞分泌的免疫球蛋白重鏈的不同,可將MM分為IgG型 、IgA 型、IgM 型、IgD型和IgE型。其中IgG型、IgA型、IgM型較為常見,其實(shí)驗(yàn)室診斷方法和結(jié)果分析較為成熟,而IgE型非常罕見。本研究主要針對(duì)臨床出現(xiàn)但較為少見的IgD型MM的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行分析,以期發(fā)現(xiàn)其特點(diǎn),避免漏診。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2009.5至2010.10符合MM診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者血清分別收集20例,本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到的IgD型、IgG型、IgA型、IgM型MM患者血清標(biāo)本,盡量包括κ輕鏈型和λ輕鏈型。30例體檢健康者血清,為免疫球蛋白定量的正常對(duì)照組。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 免疫球蛋白定量:采用西門子公司Dade Behring BNII免疫生化分析儀及配套試劑,利用免疫散射比濁法,定量測(cè)定免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和kappa、lambda輕鏈的濃度。

1.2.2 血清蛋白電泳:采用Helena公司的Spife3000電泳儀及掃描儀進(jìn)行血清蛋白電泳,具體操作包括加樣(每孔19ul)、染色(acid blue)、脫色(5%乙酸)、烘干等,最后在掃描儀上進(jìn)行掃描,自動(dòng)計(jì)算出各區(qū)帶所占百分比。

1.2.3 免疫固定電泳:采用Helena公司的Spife3000電泳儀及配套試劑,特別注意加IgD泳道。具體操作包括瓊脂糖凝膠電泳、免疫沉淀及顯色三個(gè)部分。免疫沉淀即應(yīng)用固定劑和各型免疫球蛋白及輕鏈抗血清,加于凝膠表面的泳道上,經(jīng)孵育讓固定劑和抗血清的在凝膠內(nèi)滲透并擴(kuò)散后,若有對(duì)應(yīng)的抗原存在,則在適當(dāng)位置形成抗原抗體復(fù)合物。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得免疫球蛋白和輕鏈濃度采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組之間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血清免疫球蛋白及輕鏈定量 20例IgD型MM患者血清免疫球蛋白及輕鏈定量結(jié)果顯示,IgG、IgA和 IgM 含量顯著減低(18例,占90%),其余兩例3種免疫球蛋白含量處于正常下限。輕鏈定量發(fā)現(xiàn),IgD型MM患者以λ輕鏈升高為主(19例,占95%),且20例中有19例是輕鏈比值異常的。與IgG、IgA和IgM型MM定量結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),IgG型MM以IgG升高為主,其它免疫球蛋白下降,輕鏈型中κ型和λ型均有;IgA和IgM型結(jié)果類似;IgD型MM患者血清IgG、IgA和IgM均顯著低于正常對(duì)照組,輕鏈型以λ升高,κ/λ比值下降為主。以 IgG/λ型MM患者為例,IgG/λ型和IgD/λ型MM患者血清免疫球蛋白及輕鏈定量結(jié)果比較如表1所示。

表1 IgG/λ型和IgD/λ型MM患者定量測(cè)定結(jié)果比較

2.2 血清蛋白電泳M帶檢出率

MM患者經(jīng)血清蛋白電泳后,IgG、IgA、IgM和IgD型MM的血清蛋白電泳M帶檢出率分別為19(95%)、18(90%)、19(95%)和 18(90%),檢出率無顯著差異。另外,各型MM的血清蛋白電泳陽性條帶的位置分布包括β區(qū)、γ區(qū)以及位于β和γ之間的區(qū)域,各型之間無明顯差異。

2.3 免疫固定電泳分型

IgG、IgA、IgM和IgD型MM患者血清經(jīng)免疫固定電泳均呈現(xiàn)異常濃集區(qū)帶,分型結(jié)果顯示IgD型MM,以IgD/λ為主(19/20,95%);6例經(jīng)血清蛋白電泳未檢出M帶而免疫固定電泳檢出M帶的患者中,有2例為IgD型MM患者,其余4例為各型MM患者化療后樣本。以一例典型的IgD型MM患者為例,其實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果如圖1所示:

圖1 IgD型MM患者實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤是惡性漿細(xì)胞單克隆增殖性疾病[1,2],單克隆增殖是一個(gè)細(xì)胞在某一分裂階段發(fā)生突變,然后急劇分化、增殖,并大量表達(dá)某種單一的免疫球蛋白。MM在人群中發(fā)病機(jī)率和免疫球蛋白本身含量一致[3],因?yàn)镮gG含量最高,因此IgG型最多,IgA型次之,IgM型少見,IgD更少。本文以少見的IgD型MM實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行分析,目的是減少IgD型MM的漏診和誤診。

MM患者的實(shí)驗(yàn)室檢查中以M蛋白鑒定最有診斷價(jià)值,所謂M蛋白帶即單一的免疫球蛋白增殖在血清蛋白電泳時(shí)表現(xiàn)為一條狹窄濃集的異常區(qū)帶。本研究發(fā)現(xiàn)IgD型MM患者的IgG、IgA和 IgM含量均減低者,而由于試劑限制,無法進(jìn)行 IgD定量。MM患者一個(gè)顯著特點(diǎn)是難治性感染的反復(fù)發(fā)作[4,5],可能是當(dāng)某種免疫球蛋白特異性升高時(shí),其它正常成分的免疫球蛋白就會(huì)相應(yīng)的減少,失去正常的免疫功能。因此推斷,IgD型MM患者三種免疫球蛋白減少,IgD免疫球蛋白含量升高。輕鏈定量發(fā)現(xiàn),20例IgD型MM患者有19例為IgD型λ輕鏈型,占95%,而IgD型κ輕鏈型僅1例,這可能是因?yàn)檎Ｈ丝偟拿庖咔虻鞍爪?λ比值為2左右,而IgD型免疫球蛋白κ/λ比值僅為0.3,因此是以λ型為主的。IgD型MM患者的血清蛋白電泳陽性率與其余類型無顯著差異,免疫固定電泳顯示IgD泳道有特異性的抗原抗體沉淀帶。

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