結(jié)直腸癌患者血清IL-23和IL-10水平的檢測及其意義

呂 坤,張鶯鶯

(皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院,安徽蕪湖241001)

結(jié)直腸癌(Colorectal carcinoma,CRC)是世界第三常見惡性腫瘤,近年來在我國的發(fā)病呈上升趨勢。促炎性細胞因子IL-23、IL-17和抗炎性細胞因子IL-10在胃腸道腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。IL-23能誘導(dǎo)活化記憶T細胞增殖并產(chǎn)生IFN-γ和IL-17,而后者能促進血管生成并調(diào)節(jié)各種血管生成因子的產(chǎn)生(如VEGF)[1-3]。IL-10,Th2型細胞因子,能抑制Th1介導(dǎo)的免疫應(yīng)答及宿主抗腫瘤免疫應(yīng)答。然而,有研究認(rèn)為,IL-10在腫瘤免疫中可能發(fā)揮雙重作用,即腫瘤促進或抑制因子[4-5]。IFN-α,多細胞來源的細胞因子,具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性,已應(yīng)用于腫瘤的臨床治療[6]。然而,血清細胞因子水平與CRC進展的相關(guān)性仍未見報道。

本研究中,我們檢測了不同臨床分期CRC患者血清IL-23、IL-17、IL-10和IFN-α的表達水平,從而為探討細胞因子在CRC發(fā)展過程中的作用提供臨床證據(jù)。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 本研究納入50例CRC患者,全部病例均經(jīng)組織病理學(xué)診斷確診,無明顯的臟器功能損害。其中男26例,女24例;年齡54歲-72歲,平均63歲;臨床分期(CRC-TNM分期法):Ⅰ期7例,Ⅱ期18例,Ⅲ期16例,Ⅳ期9例。另取20例同期健康志愿者作為對照組,年齡、性別具有可比性。所有病人分別在術(shù)前1天和術(shù)后10天取空腹外周靜脈血3 ml,常規(guī)分離血清,-20℃保存?zhèn)溆?。并?0例健康志愿者血清作對照組,同樣條件下保存。受試者在充分了解并完全自愿的基礎(chǔ)上簽署知情同意書,且研究方案通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核、批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫雙抗夾心法(ELISA)檢測人IL-23、IL-17、IL-10、IFN-α水平(R&D 公司)。方法如下:實驗前將試劑和樣品放置到室溫;在各孔中加入50 μ l稀釋液 ;吸取100 μ l已稀釋至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品放入相應(yīng)各孔,輕搖5 s鐘混勻,室溫孵育2 h;棄去孔內(nèi)樣品,用洗滌液洗滌5遍,最后一遍應(yīng)盡量棄盡孔內(nèi)液體;各孔內(nèi)加入100 μ l檢測液,室溫孵育1 h;棄去孔內(nèi)樣品,用洗滌液洗滌7遍,最后一遍應(yīng)盡量棄盡孔內(nèi)液體;各孔內(nèi)加入100 μ l TMB一步法底物反應(yīng)液,室溫避光孵育30 min;每孔加入50 μ l終止液;30 min內(nèi)在酶標(biāo)儀(Bio-Rad公司)450 nm處讀取OD值;以標(biāo)準(zhǔn)OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣本OD值得出樣本中細胞因子的濃度。

1.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS12.0軟件,兩個樣本均數(shù)的比較采用 t檢驗,多個樣本均數(shù)的比較采用方差分析。P＜0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-23水平的變化

通過測定不同時期患者與健康對照組血清中IL-23的水平(圖1),發(fā)現(xiàn)患者血清IL-23水平明顯高于對照組(P＜0.01),而且不同臨床分期腫瘤患者血清IL-23水平也顯著高于對照組(P＜0.01);比較不同臨床分期腫瘤患者血清IL-23水平無顯著性差異。與術(shù)前相比,術(shù)后患者血清IL-23水平并未發(fā)生顯著性改變,但仍高于對照組(P＜0.01)。

2.2 血清IL-17水平的變化

通過測定不同時期患者與健康對照組血清中IL-17的水平(圖2),發(fā)現(xiàn)患者血清IL-17水平較對照組有一定升高(P=0.107),但兩者相比無顯著性差異。比較不同臨床分期腫瘤患者血清IL-17水平也無顯著性差異。此外,與術(shù)前相比,術(shù)后患者血清IL-17水平顯著降低(P＜0.05)。

2.3 血清IL-10水平的變化

通過測定不同時期患者與健康對照組血清中IL-10的水平(圖3),發(fā)現(xiàn)患者血清IL-10水平顯著高于對照組(P＜0.01),而且不同臨床分期腫瘤患者血清IL-10水平也高于對照組(P＜0.05)。比較不同臨床分期腫瘤患者血清IL-10水平發(fā)現(xiàn),Ⅳ期腫瘤患者血清IL-10水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P＜0.01)。此外,與術(shù)前相比,術(shù)后患者血清IL-10水平顯著降低(P＜0.05)。

圖1 血清IL-23水平的變化

圖2 血清IL-17水平的變化

圖3 血清IL-10水平的變化

圖4 血清IFN-α水平的變化

2.4 血清IFN-α水平的變化

我們僅檢測到3例術(shù)前患者、11術(shù)后患者及17例健康志愿者血清IFN-α水平,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,患者血清IFN-α水平顯著降低了(P＜0.01)。與術(shù)前相比,術(shù)后患者血清IFN-α水平有一定的增加,但兩者相比無顯著性差異(P=0.76)。

3 討論

細胞因子可直接作用于腫瘤細胞,或作用于腫瘤血管生成和營養(yǎng)供應(yīng)系統(tǒng)而影響機體與腫瘤關(guān)系,也可調(diào)節(jié)機體對腫瘤的免疫應(yīng)答,從而影響腫瘤進程。

研究發(fā)現(xiàn),細胞因子紊亂在CRC的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用:Chung等發(fā)現(xiàn) IFN-α和IL-6能促進CRC的生長,而IL-12水平的降低與CRC的發(fā)展呈正相關(guān)[7-8]。然而,IL-23在CRC中的作用仍不清楚:有研究發(fā)現(xiàn),在小鼠腫瘤模型中IL-23具有抗腫瘤活性;而Langowski等發(fā)現(xiàn),IL-23促進了人CRC的發(fā)展[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn),CRC患者血清IL-23水平的增加促進了腫瘤的發(fā)展。綜上,我們推測IL-23水平的增加可能與CRC患者差的預(yù)后密切相關(guān)。

此外,有研究發(fā)現(xiàn)IL-23能驅(qū)動IL-17介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,而后者能促進血管生成和腫瘤發(fā)生。而Wagsater等[11]發(fā)現(xiàn),CRC患者腫瘤組織中IL-17的水平與健康組并無差異。與后者結(jié)果一致,本研究發(fā)現(xiàn),患者與對照組及不同臨床分期腫瘤患者血清IL-17水平并無顯著性差異。

目前認(rèn)為,IL-10不僅能通過抑制促炎性細胞因子的產(chǎn)生發(fā)揮抗腫瘤作用,還能刺激腫瘤細胞增殖并抑制凋亡,從而促進腫瘤的生長[4-5]。本研究發(fā)現(xiàn),血清IL-10與CRC的臨床分期呈一定的相關(guān)性。Ⅳ期CRC患者血清IL-10水平最高,提示IL-10促進了CRC的發(fā)展。此外,與術(shù)前相比,術(shù)后患者血清IL-10水平顯著降低,提示IL-10主要來源于腫瘤細胞或腫瘤浸潤淋巴細胞。

最后,我們檢測了CRC患者血清IFN-α水平,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,患者血清IFN-α水平顯著降低了;與術(shù)前相比,術(shù)后患者血清IFN-α水平有一定的增加,但兩者相比無顯著性差異,提示IFN-α在抗腫瘤免疫中的重要作用。

綜上,本研究發(fā)現(xiàn),與 IL-17和IFN-α相比,CRC患者血清IL-23和IL-10顯著高于對照組,這種細胞因質(zhì)譜的改變可能在腫瘤進程中發(fā)揮重要作用;而且,血清IL-10的增加與CRC的臨床分期呈一定的相關(guān)性。

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