兩種廣藿香精油的抗菌作用研究

莫小路，蔡岳文，袁亮，陳瑜珍，嚴(yán)振*

（廣東省中藥研究所，廣東 廣州 510 520）

兩種廣藿香精油的抗菌作用研究

莫小路，蔡岳文，袁亮，陳瑜珍，嚴(yán)振*

（廣東省中藥研究所，廣東 廣州 510 520）

目的：為廣藿香的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：以金黃色葡萄球菌等7種細(xì)菌和產(chǎn)黃青霉等3種真菌為供試微生物，用瓊脂平板打孔法測(cè)定石牌廣藿香和海南廣藿香精油的抑菌圈大小，用固體二倍稀釋法測(cè)定精油的最小抑菌濃度 （MIC）。結(jié)果：石牌廣藿香精油對(duì)7種供試細(xì)菌的抑制效果與海南廣藿香相近，而對(duì)3種供試真菌的抑菌作用顯著高于海南廣藿香精油。結(jié)論：石牌廣藿香是栽培廣藿香中的優(yōu)質(zhì)品種，其抗真菌作用顯著強(qiáng)于海南廣藿香。

廣藿香；精油；抗菌作用

廣藿香Pogoste monca blin（Blanco）Benth.為唇形科刺蕊草屬植物，原產(chǎn)于菲律賓、馬來(lái)西亞、印度等國(guó)。我國(guó)在宋代已有引種栽培，而廣東地區(qū)栽培供藥用的歷史悠久，故名“廣藿香”。廣藿香是廣東省主要道地藥材之一，是“藿香正氣丸 （水）”、“藿膽丸”及“抗病毒口服液”等中成藥的重要配方藥，主要功效為芳香化濁、開(kāi)胃止嘔、發(fā)表解暑［1］，此外還對(duì)多種人體致病菌和皮膚真菌有抑制作用［2］。

廣藿香主產(chǎn)于廣東省的石牌、高要、湛江地區(qū)及海南省的萬(wàn)寧地區(qū)，因產(chǎn)地的自然環(huán)境條件、種植習(xí)慣、栽培管理、采收加工等的不同，其產(chǎn)品形態(tài)、氣味、質(zhì)量差異較大［3-4］，因而存在有關(guān)廣藿香品種分類(lèi)方面的爭(zhēng)議，有研究根據(jù)廣藿香蛋白電泳分析及形態(tài)學(xué)方面的差異，認(rèn)為廣藿香應(yīng)分為3個(gè)栽培品種［5］，也有報(bào)道將廣藿香按其揮發(fā)油的組分劃分為“石牌”和“海南”兩個(gè)化學(xué)型［6］。

藥材生產(chǎn)傳統(tǒng)上認(rèn)為產(chǎn)于廣州石牌地區(qū)的廣藿香 （俗稱(chēng)“牌香”）品質(zhì)最好，產(chǎn)于海南萬(wàn)寧地區(qū)的廣藿香 （俗稱(chēng)“南香”）藥效最差，而原產(chǎn)于廣州石牌的廣藿香由于城市發(fā)展等原因目前已瀕臨滅絕，目前醫(yī)藥生產(chǎn)上使用的原料均為海南和湛江地區(qū)產(chǎn)的“南香”精油，有關(guān)石牌廣藿香的藥理學(xué)研究少有報(bào)道。廣藿香的藥理作用主要是調(diào)節(jié)胃腸功能和抗病原微生物兩方面，本文利用廣東省中藥研究所藥用植物標(biāo)本園內(nèi)保存的“牌香”資源，進(jìn)行體外抗菌研究，并與“南香”比較，旨在為廣藿香化學(xué)成分與藥理作用的相關(guān)性及其作用機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)，為廣藿香不同品種間的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和儀器

1.1 材料

1.1.1 供試藥材 實(shí)驗(yàn)用廣藿香材料均采自本所藥用植物標(biāo)本園，經(jīng)本所南藥研究室蔡岳文教授鑒定均為廣藿香Pogoste mon cablin（Blanco）Benth.，是分屬于原產(chǎn)石牌和海南的兩個(gè)栽培品種Pogoste mon cablin（Blanco）Benthcv.shipaiensis、Pogost emon cablin（Blanco）Benthcv.hainanensis.。上述實(shí)驗(yàn)材料的全草經(jīng)自然干燥48h后，切成1～2cm的小段，備用。

1.1.2 供試菌種 供試細(xì)菌菌種大腸桿菌（Escherichiacoli），枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis），普通變形桿菌（Proteusvu lgaris），金黃色葡萄球菌（Staphylo coccusaureus），表皮葡萄球菌（Staphylococ cusepidermidis），糞腸球菌（Enterococcusfaecalis），綠膿桿菌（Pseudo monasaeruginosa）及供試真菌白色念珠菌（Candida albicans）購(gòu)自廣東省微生物菌種保藏中心。供試真菌產(chǎn)黃青霉（Pencicilliu mchrysogenum）和黑曲霉（As pergillusniger）為本實(shí)驗(yàn)室保藏菌種。

1.1.3 主要試劑 營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂和沙堡氏培養(yǎng)基 （廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.2 主要儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （RE-52A型，上海亞榮生化儀器廠），超凈工作臺(tái) （美國(guó)T hermo公司），霉菌培養(yǎng)箱（MJP-250型，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司），高壓滅菌器（MLS-3750型，SANYO公司），微量移液器（Finnpipette）及漩渦混合器（XW-80 A型，上海琪特分析儀器公司）等。

2 方法

2.1 精油提取及測(cè)定方法

按 《中國(guó)藥典》（2010版）附錄ⅩD操作，精油得率：石牌廣藿香為1.4%，海南廣藿香為3.2%。

2.2 供試菌液的制備

2.2.1 供試細(xì)菌菌液的制備 挑取在新鮮斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h的供試菌種，接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，搖勻后于37℃培養(yǎng)20h，菌液濃度約為108C FU·m L－1（用平板稀釋菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定），將此菌液用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至1.5×105CFU·m L－1，備用。

2.2.2 供試真菌菌液的制備 供試真菌在沙堡氏瓊脂（Sabourau d’sagar）斜面培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)5d左右，待孢子長(zhǎng)出后，用2m L0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液將孢子洗下，將此真菌孢子液稀釋到1.5×105C FU·m L－1，備用。

2.3 體外抑菌試驗(yàn)方法及最小抑菌濃度（MI C）的測(cè)定

參照中國(guó)生物藥品檢驗(yàn)法操作［7］，采用平板打孔法進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。孔的直徑為5mm，每孔加濃度為10μ L·m L－1（用含1%聚山梨酯－80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋?zhuān)┑膹V藿香精油20μL，陰性對(duì)照加含1%聚山梨酯－80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液20μ L，37℃培養(yǎng)24h后觀察、測(cè)定抑菌圈大小，根據(jù)抑菌圈的大小判斷抑菌活性，抑菌圈大小與抑菌活性、敏感程度的關(guān)系見(jiàn)表1。每個(gè)濃度處理6次重復(fù)，測(cè)定結(jié)果取平均值。廣藿香精油的最小抑菌濃度 （MIC）用固體二倍稀釋法［7］測(cè)定，取50μ L·m L－1的廣藿香精油做倍比稀釋?zhuān)瑴y(cè)定M I C。

表1 抑菌圈大小與抑菌活性、敏感程度的關(guān)系

3 結(jié)果與分析

3.1 石牌廣藿香和海南廣藿香精油對(duì)細(xì)菌的抑制作用

本試驗(yàn)以10μ L·m L－1的石牌廣藿香和海南廣藿香精油對(duì)7株供試細(xì)菌菌株進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。由表2抑菌圈測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)，在該濃度下兩種精油對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌均無(wú)抑制作用，石牌廣藿香對(duì)7種供試菌的抑制作用與海南廣藿香無(wú)顯著差異，僅是對(duì)表皮葡萄球菌的抑菌效果強(qiáng)于海南廣藿香。

從表2精油最低抑菌濃度 （MIC）的測(cè)定結(jié)果看，石牌廣藿香對(duì)同種細(xì)菌的抑制作用稍強(qiáng)于海南廣藿香。

表2 不同廣藿香精油對(duì)供試細(xì)菌的抑制作用

3.2 石牌廣藿香和海南廣藿香精油對(duì)真菌的抑制作用

由表3不同廣藿香精油對(duì)供試真菌的抑制結(jié)果可見(jiàn)，石牌廣藿香對(duì)皮膚致病菌 （白色念珠菌）和條件致病真菌 （產(chǎn)黃青霉和黑曲霉）的抑制作用都顯著強(qiáng)于海南廣藿香，海南廣藿香精油對(duì)白色念珠菌幾乎沒(méi)有抑制；M I C的測(cè)定結(jié)果顯示石牌廣藿香精油對(duì)白色念珠菌具有較強(qiáng)抗菌作用。

表3 不同廣藿香精油對(duì)供試真菌的抑制作用

4 討論

精油是廣藿香的主要藥用成分，廣藿香精油的藥理作用之一就是抗菌作用，而精油組分在廣藿香的不同品種間存在較大差異，導(dǎo)致了廣藿香不同栽培品種間的藥效差異。在有關(guān)廣藿香精油成分與抗菌效果的研究中，楊得坡等［2］認(rèn)為廣藿香醇、異愈創(chuàng)木烯和廣藿香烯是廣藿香油抗真菌作用的關(guān)鍵所在，而張廣文等［8］認(rèn)為廣藿香精油抗菌主要成分之一是廣藿香酮，而α-愈創(chuàng)木烯的抗菌活性較差。從本研究的結(jié)果看，石牌廣藿香的抗菌效果與海南廣藿香沒(méi)有顯著差異，但在抗真菌方面的藥效顯著優(yōu)于海南廣藿香，這可能與石牌廣藿香的廣藿香酮含量較高有關(guān)［9-10］，即廣藿香酮是其抗真菌的有效成分，與文獻(xiàn)［8］的觀點(diǎn)相同，也與傳統(tǒng)藥材市場(chǎng)上認(rèn)為石牌的藥效較高的觀點(diǎn)相一致。

本研究結(jié)果表明，石牌廣藿香是廣藿香中的優(yōu)良種質(zhì)，但目前該種質(zhì)資源已瀕臨滅絕，規(guī)?；N植已不存在，僅在廣東省中藥研究所內(nèi)有活體保存。導(dǎo)致石牌廣藿香瀕臨滅絕的一個(gè)重要原因是其農(nóng)藝性狀不優(yōu)：植株分枝較少、生長(zhǎng)較慢，即鮮藥產(chǎn)量不高，并且藥材的含油量低于廣藿香等栽培品種，藥農(nóng)的種植積極性不高。鑒于石牌廣藿香特殊的地位，對(duì)其加以保護(hù)并借助現(xiàn)代生物技術(shù)加以改良，提高生物產(chǎn)量和含油量，將是今后廣藿香研究的一個(gè)重要方向。

［1］廣東中藥志編委會(huì).廣東中藥志［M］.第一卷.廣州：廣東科技出版社，1994：13-16.

［2］楊得坡，Chau montJP，MilletJ，等.藿香和廣藿香揮發(fā)油對(duì)皮膚癬菌和條件致病真菌的抑制作用［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2000，35（1）：9-11.

［3］羅集鵬，曾梅華.廣藿香的形態(tài)組織學(xué)鑒別研究［J］.中藥材，20 0 2，25（3）：166-171.

［4］李微，潘超美，徐良，等.不同產(chǎn)地廣藿香特征的觀察和比較［J］.中藥材，20 0 2，25（7）：463-465.

［5］徐頌軍，王曉峰，徐祥浩，等.藥用植物廣藿香的品種分類(lèi)探討［J］.華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），20 0 3，（1）：82-86.

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［7］馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)［M］.北京：科學(xué)出版社，20 0 1：211-212.

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Antimicrobial and Antifungal Effects of Essential Oil from Shipai Cultivar of Pogostemon cablin

MOX iao-lu，CAI Yue-wen，YUAN Liang，CHENYu-zhen，YAN zhen
（Guangdong Research Institute of Tcm，Guangzhou 510520，China）

Objective：To provide research data in basic pharmacology to the qualitye valuation of Shipai culti-var of P．cablin，the essential oil from Shipai cultivar of P．cablin were investigated of antibacterial and antifungal effect in vitro.MethodsEssential oil diffusion through the holes in nutrient agar plate；the minimal inhabitation concentra-tion（MIC）were determined by agar dilution method，in comparison to the essential oil from Hainan cultivar of P．cab-lin.ResultsThe antibacterial activity of essential oil from Shipai cultivar is similar with Hainan cultivar，butt he anti-fungal effect of Shipai cultivar is markedly stronger than Hainan cultivar.ConclusionAs a P．cablin cultivar with high quality，Shipai has higher anti fungal activity than Hainan cultivar.

Pogostemon cablin；Essential oil；Antimicrobial effect

廣東省科技廳粵港關(guān)鍵領(lǐng)域重點(diǎn)突破項(xiàng)目（2009A030901011），廣州市科技計(jì)劃基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（2009J1-C201）

*嚴(yán)振，Tel：（020）22854883，E-mail：yanz＠gdyzy.edu.cn

2011-0 6-02）