飼料添加不同劑型蛋氨酸對凡納濱對蝦生長性能和生化指標的影響

楊志強 曹俊明 趙紅霞 朱 選 黃燕華 胡俊茹 藍漢冰 陳 燕

魚粉具有蛋白含量高、富含動物必需氨基酸以及易被動物消化吸收等優(yōu)點，一直以來是水產(chǎn)飼料特別是肉食性水產(chǎn)動物飼料中不可缺少的優(yōu)質(zhì)蛋白源。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，魚粉需求量的急劇上升，魚粉資源的短缺已經(jīng)成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展的瓶頸,替代技術(shù)的開發(fā)成為人們關(guān)注的焦點。植物性蛋白價格低廉且來源廣泛，是替代魚粉的理想蛋白源之一。但是，大部分動植物蛋白源存在氨基酸不平衡和抗營養(yǎng)因子等問題，制約了其在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用。

豆粕是應(yīng)用最廣泛的植物蛋白源，但使用豆粕替代魚粉需要添加精氨酸、蛋氨酸和苯丙氨酸等必需氨基酸以滿足對蝦氨基酸需求[1-2]。花生粕作為我國常見的飼料原料，產(chǎn)量豐富且穩(wěn)定，凡納濱對蝦對花生粕蛋白質(zhì)的表觀消化率達79.82%，采用花生粕可替代凡納濱對蝦飼料中20%的魚粉（劉立鶴等，2008）[3]。本試驗以凡納濱對蝦為研究對象，將豆粕和花生粕按2：1比例混合，替代魚粉用量的85.7%，同時將飼料蛋白質(zhì)含量從43.61%下降至35.55%，通過補充外源蛋氨酸滿足凡納濱對蝦氨基酸需要，探討凡納濱對蝦對植物蛋白源的利用情況，以期為植物蛋白源在實用飼料中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

以魚粉、豆粕、花生粕為主要蛋白源，魚油和豆油為主要脂肪源，面粉為主要糖源配制飼料，作為魚粉組和試驗組，參照Akiyama等（1989）[4]對蝦商品配合飼料蛋白質(zhì)含量推薦值，蛋氨酸含量占蛋白質(zhì)的2.4%，飼料配方見表1。向基礎(chǔ)飼料中分別添加晶體蛋氨酸（L-Met）、硬脂酸包被蛋氨酸（SAC-Met）和羥基蛋氨酸鈣（MHA-Ca），使蛋氨酸比例與魚粉組相同（添加0.22%）、比魚粉組高出50%（添加0.60%）。各組飼料原料全部粉碎過60目篩，充分混合均勻后用SLX-80型雙螺桿擠壓制粒直徑為1.0 mm的顆粒，55℃烘干后，于-20℃的冰箱中保存，備用。L-Met來源于上海源聚生物科技有限公司；SAC-Met來源于飛禧特水產(chǎn)科技有限公司；MHA-Ca來源于諾偉司國際有限公司。

1.2 試驗蝦及飼養(yǎng)管理

試驗在廣東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧研究所水產(chǎn)研究中心實驗基地進行，試驗對蝦由恒興蝦苗場提供。選取體重 (0.33±0.01)g的健康活潑的凡納濱對蝦1 260尾隨機分為7組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)60尾，馴養(yǎng)1周。每天分別在8:00、14:00和20:00分3次投喂，日投喂率為凡納濱對蝦體重的9%，并根據(jù)對蝦攝食情況調(diào)節(jié)投喂率。試驗采用循環(huán)過濾水系統(tǒng)，pH值7.8～8.6，水溫 27.0～30.0 ℃，鹽度 5.1‰左右，溶解氧＞6.0 mg/l。

表1 魚粉組和基礎(chǔ)飼料的組成及營養(yǎng)成分分析(%)

1.3 樣品采集與分析

1.3.1 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，停飼24 h，稱取每缸蝦體重，統(tǒng)計每缸蝦尾數(shù)，計算增重率（weight gain ratio，WGR）、特定生長率（specific growth ratio，SGR）和存活率（survival rate，SR）。每個重復(fù)隨機取 20 尾蝦，用250 μl的滅菌玻璃注射器自對蝦頭胸甲后部插入凡納濱對蝦心腔取血，置于2 ml Eppenddorf管中于4℃冰箱中過夜，4℃低速離心（3 000 r/min,10 min），取血清放入 -78℃超低溫冷凍冰箱，備用。

1.3.2 凡納濱對蝦血清生化指標測定

天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、堿 性 磷 酸 酶 （alkaline phosphatase，AKP）、 膽 固 醇（cholesterol，CHOL）、甘油三酯（triglyceride，TG）、葡萄糖（glucose，GLUO）、總蛋白（total protein，TP）等血清生化指標，采用全自動日立生化分析儀（HITACHI.7170A）測定。

1.4 計算公式

增重率(%)=[(末重-初重)/初體質(zhì)量]×100；

特定生長率(%)=[exp(ln末重-ln初重)/飼養(yǎng)天數(shù)-1]×100；

存活率(%)=試驗結(jié)束時蝦尾數(shù)×100/實驗開始時放蝦尾數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗結(jié)果均采用平均值±標準差(Mean±SE)表示，用SAS 8.0分析軟件經(jīng)單因素方差分析（ANOVA）后，若存在顯著性差異，則采用Duncan's法進行多重比較。顯著性差異的水平P設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同劑型蛋氨酸對凡納濱對蝦WGR、SGR、SR的影響(見表2)

表2 不同劑型蛋氨酸對凡納濱對蝦SGR、WGR、SR的影響（M±SE，n=3）

從表2可見，不同劑型和劑量蛋氨酸組凡納濱對蝦的SGR、WGR、SR與魚粉組之間無顯著性差異（P＞0.05）。魚粉組WGR和 SGR均高于添加 0.22%和0.60%的L-Met、SAC-Met和MHA-Ca組。在不同劑型蛋氨酸中，SGR和WGR依次為：MHA-Ca＞L-Met＞SAC-Met，隨著蛋氨酸添加量上升，SGR和WGR呈現(xiàn)下降趨勢。添加0.60%的L-Met和SAC-Met組對蝦的SR分別比魚粉組高28.68%、5.74%。

2.2 不同劑型蛋氨酸對凡納濱對蝦血清AST、ALT和AKP活性的影響(見表3)

表3 凡納濱對蝦血清中AST、ALT和AKP活性(M±SE，n=3)

從表3中可以看出，不同劑型和劑量蛋氨酸組凡納濱對蝦血清AST、ALT和AKP活性與魚粉組之間無顯著性差異(P＞0.05)。魚粉組的AST均低于添加0.22%和 0.60%的 L-Met、SAC-Met和 MHA-Ca組。L-Met和MHA-Ca添加量增加AST和ALT活性下降，SACMet添加量增加AST和ALT活性升高。添加0.22%LMet、SAC-Met和MHA-Ca組的AKP活性均高于魚粉組，添加0.60%L-Met、SAC-Met和MHA-Ca組的 AKP活性均低于魚粉組。隨著蛋氨酸添加量的升高，L-Met、SAC-Met和MHA-Ca組的AKP活性呈下降趨勢。

2.3 不同劑型蛋氨酸對凡納濱對蝦血清CHOL、TG、GLUO、TP含量的影響(見表4)

表4 各試驗組凡納濱對蝦血清 CHOL、TG、GLUO、TP 含量（mmol/l）（M±SE，n＝3）

從表4可見，不同劑型和劑量蛋氨酸組凡納濱對蝦血清CHOL、TG、GLUO和TP活性與對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)。魚粉組的TG均低于添加0.22%和0.60%的 L-Met、SAC-Met和 MHA-Ca組。除 0.22%SAC-Met組外，各試驗組的TP含量均低于魚粉組。

3 討論

3.1 實用飼料添加Met對凡納濱對蝦幼蝦生長性能的影響

有研究報道，適當降低鯽魚實用飼料蛋白水平，添加合成氨基酸（DL-Met、L-Lys）能夠改善飼料適口性和提高經(jīng)濟效益[5]。程宗佳（2004a、2004b）[6-7]在虹鱒飼料中只補充Lys，結(jié)果所有植物蛋白飼料的轉(zhuǎn)化率都比魚粉飼料差，但是在蛋白質(zhì)含量從42%降低至37%，并添加蛋氨酸、蘇氨酸和色氨酸后，植物蛋白飼料的轉(zhuǎn)化率與魚粉飼料無顯著差異。與上述結(jié)果一致，本試驗在低蛋白水平實用飼料添加不同形式蛋氨酸，各試驗組增重率和特定生長率與魚粉組無顯著差異，可能與添加的外源蛋氨酸提高了飼料蛋白質(zhì)品質(zhì)有關(guān)。

Alam等在全植物蛋白飼料中添加0.36%緩釋賴氨酸，鯉魚的生長性能與含4%魚粉組基本一致；在實用飼料中添加包膜賴氨酸0.1%，草魚增重率從192.3%提高到 222.0%（P＜0.05）；在異育銀鯽、牙鲆仔魚、日本對蝦的研究均表明了添加包膜氨基酸較晶體氨基酸具有顯著的促生長效果[8-10]。本試驗中，L-Met或SACMet的增重率和特定生長率無顯著差異，而添加同一蛋氨酸水平的L-Met的生長性能高于SAC-Met，這可能是飼料替代魚粉用量大，導(dǎo)致飼料的誘食性下降，而通過添加L-Met可能提高其誘食效果，這與晶體氨基酸比包被氨基酸更具誘食效果一致[11-13]。添加MHACa組存活率比L-Met或MHA-Met組低，但WGR和SGR卻比后兩者高，可能是對蝦個體減少，攝食量增加，導(dǎo)致了WGR和SGR上升。

3.2 實用飼料添加Met對凡納濱對蝦幼蝦血液生化指標的影響

堿性磷酸酶（AKP）是動物代謝過程中重要的調(diào)控酶，它是一種非特異性磷酸水解酶，AKP對水中鈣質(zhì)吸收、磷酸鈣形成、甲殼素分泌及形成均具有重要作用，甲殼動物蝦在生長過程中都要經(jīng)歷蛻殼過程，該酶對蝦的生存具有特別的重要意義[14]。譚利偉等(2007)[15]研究認為，AKP不僅能促進磷酸酶分解，水解各種磷酸酯鍵而釋放出無機磷，而且還能將釋放出的無機磷直接轉(zhuǎn)移到受體中去，提高磷酸根離子濃度，磷酸根與鈣代謝中過剩的鈣結(jié)合利用。本試驗中，隨著蛋氨酸添加量增加，凡納濱對蝦血清AKP活性呈下降趨勢，與凡納濱對蝦生長情況的變化趨勢相一致。因此，可能是AKP活性的上升促進了鈣質(zhì)吸取，從而有利于對蝦蛻殼和生長。

生化指標的變化是以機體組織細胞機能改變和新陳代謝變化為基礎(chǔ)的，是反映動物體內(nèi)物質(zhì)代謝和某些組織器官機能狀態(tài)變化的一個重要特征[16]。丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶是廣泛存在于動物組織細胞線粒體內(nèi)的重要氨基轉(zhuǎn)移酶，研究認為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶含量升高是肝細胞、心臟和肌肉受損的標志[17]。本試驗中，各試驗組凡納濱對蝦血清AST、ALT均無顯著差異，表明豆粕和花生粕大量替代魚粉后添加0.22%～0.60%不同劑型游離蛋氨酸，對蝦肝臟代謝功能沒有顯著改變。

血清蛋白成分及其含量變化與機體健康、營養(yǎng)和疾病等狀況有密切關(guān)系，當機體受外界因素的影響而發(fā)生生理或病理變化時，可以在血清蛋白中得到反映[18-19]。膽固醇是體內(nèi)重要的脂類物質(zhì)，可以合成各種類固醇激素，膽固醇濃度的高低反映了脂類吸收狀況，同時可以反映肝臟脂肪代謝狀況[17]。血液中甘油三酯的濃度與外源性供給、內(nèi)源性產(chǎn)生和分解代謝的速度有關(guān)，血脂濃度可間接反映脂類在肝臟的沉積情況。在本試驗中，除0.22%SAC-Met組外，各試驗組的血清蛋白含量均低于魚粉組；魚粉組的甘油三酯均低于添加 0.22%和 0.60%的 L-Met、SAC-Met和 MHA-Ca組。添加不同劑型劑量蛋氨酸組與魚粉組的凡納濱對蝦血清甘油三酯和蛋白出現(xiàn)差異，可能與飼料中蛋白質(zhì)和脂肪水平的差異相關(guān)。同樣，Alam在日本對蝦日糧中同時補充賴氨酸及蛋氨酸沒有發(fā)現(xiàn)對脂肪及蛋白含量有顯著性影響，并認為這與基礎(chǔ)日糧中蛋白及脂肪水平的高低有關(guān)。

4 結(jié)論

本試驗中，用豆粕和花生粕按2：1的比例混合，部分替代魚粉組中的魚粉用量，使魚粉用量由35%降至5%，粗蛋白含量從43.61%下降至35.55%，在此基礎(chǔ)飼料中分別添加0.22%和0.60%兩個水平的晶體蛋氨酸、硬脂酸包被蛋氨酸和羥基蛋氨酸鈣對凡納濱對蝦的生長性能和血清生化指標沒有顯著影響。因此，在凡納濱對蝦飼料中，降低飼料配方中蛋白含量的18.5%，以豆粕和花生粕混合植物源替代85.7%魚粉是可行的。

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