花生殼藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

周 萍，楊月娥，楊 敏

（大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

花生殼藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

周 萍，楊月娥，楊 敏

（大理學(xué)院藥學(xué)院，云南大理 671000）

目的：完善花生殼藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為花生殼的合理利用和質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：對(duì)花生殼進(jìn)行性狀及顯微特征觀測；對(duì)花生殼中木犀草素采用薄層色譜法（TLC）和高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行鑒別；按水分測定法和灰分測定法檢測了花生殼中的水分、總灰分、酸不溶性灰分；用熱浸法測定了醇溶性浸出物含量，用HPLC法測定了木犀草素的含量。結(jié)果：10個(gè)不同產(chǎn)地的花生殼在與木犀草素對(duì)照品的相應(yīng)位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)及相同的保留時(shí)間?；ㄉ鷼ず譃?.66%～9.99%，總灰分為2.16%～4.23%，酸不溶性灰分為0.28%～1.79%，醇溶性浸出物為4.38%～8.25%，木犀草素為0.111%～0.371%。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，可用于花生殼藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

花生殼；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；木犀草素；HPLC

花生殼為豆科植物落花生（ArachishypogeaeL.）的干燥果殼，在我國有豐富的資源，國內(nèi)外在化工、食品、醫(yī)藥有廣泛研究和應(yīng)用〔1〕。藥理研究表明：花生殼有降低血壓、血脂，抗氧化，抗菌和治療冠心病的作用〔2-4〕，以花生殼為原料生產(chǎn)的“脈舒膠囊”是治療高血脂癥的純中藥制劑，花生殼的藥用價(jià)值和開發(fā)前景廣闊?；ㄉ鷼ぷ鳛橹兴幉囊咽蛰d于《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》〔5〕，但僅有性狀等項(xiàng)目，現(xiàn)行質(zhì)量控制指標(biāo)有待提高和完善。為了進(jìn)一步利用和開發(fā)花生殼資源，提高藥材和制劑質(zhì)量，本試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，希望為花生殼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與儀器

1.1 儀器 Agilent 1100型高效液相色譜儀（包括四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，DAD檢測器，chemstation化學(xué)工作站）；硅膠GF254預(yù)制薄層板（10 cm×20 cm，青島海洋化工廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（JC101型，南通嘉程儀器有限公司）；電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 材料 木犀草素對(duì)照品（中國生物制品檢定所，批號(hào)：111520-200201）；花生殼購于市場，產(chǎn)地分別為：賓川（2份）、昆明（1份）、開遠(yuǎn)（1份）、保山（1份）、湖南（1份）、東川（1份）、元謀（1份）、永勝（2份），經(jīng)本院生藥學(xué)教研室楊月娥老師鑒定，樣品均為豆科植物落花生（ArachishypogaeaL.）的干燥成熟果殼，樣品粉碎成粗粉后備用；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 本品呈類舟型，兩端鈍圓，可見果柄殘痕或喙?fàn)钚⊥黄?，長2～5 cm，寬1～1.5 cm，厚1～1.5 cm，外表面黃白色，向外凸起，微帶波狀起伏，有類方型或不規(guī)則的凹狀網(wǎng)紋，內(nèi)表面凹狀起伏，表面有一層白色薄膜，時(shí)有褐色斑紋，其膜層不易脫，有光澤，體輕質(zhì)脆，易折斷；斷面不整齊，有的外層可見絲狀物，氣微，味淡〔5〕。

粉末特征：灰黃色，梯紋導(dǎo)管較大，稀有網(wǎng)紋導(dǎo)管。纖維成束，壁厚。木栓細(xì)胞紅黃棕色，長方形或多角形?？梢姳”诩?xì)胞。見圖1。

圖1 花生殼粉末特征

2-網(wǎng)紋導(dǎo)管

3-木栓細(xì)胞

2.2 鑒別試驗(yàn)

2.2.1 高效液相色譜法（HPLC） 在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖（圖2）中，結(jié)果顯示供試品主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間一致。

圖2 HPLC色譜圖

2.2.2 薄層色譜法

2.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg木犀草素的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.2.2.2 供試品溶液的制備 取10個(gè)不同產(chǎn)地樣品粉末2 g，分別加70%乙醇20mL，浸泡1 h，水浴加熱回流提取2 h，趁熱過濾，濾液蒸干溶劑，加入10 mL甲醇溶解后過濾，濾液作為供試品溶液。

2.2.2.3 薄層色譜條件及結(jié)果 吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μL分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板（使用前在110℃下活化30min，保存在干燥器中備用）上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-甲醇（8∶5∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。結(jié)果顯示供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)（Rf=0.76）。

2.3 雜質(zhì)檢查

2.3.1 水分 照“水分測定法”（中國藥典2010年版一部附錄ⅨH第一法）〔6〕測定花生殼的水分含量，結(jié)果見表1。

2.3.2 總灰分和酸不溶性灰分 照“灰分測定法”〔6〕，測定總灰分和酸不溶性灰分，結(jié)果見表1。

2.4 含量測定

2.4.1 浸出物含量測定 花生殼中主要藥理活性物質(zhì)為黃酮類等脂溶性成分，其含量多少關(guān)系到藥材質(zhì)量的好壞。將樣品按照“浸出物測定法”〔6〕，以70%乙醇為溶劑，采用熱浸法，測得花生殼的醇溶性浸出物含量，結(jié)果見表1。

2.4.2 木犀草素的HPLC含量測定法

2.4.2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Agilent ZorBax SB C18色譜柱（4.6mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸（54∶46），流速1.0 mL/min，檢測波長350 nm，柱溫30 ℃〔7〕，進(jìn)樣量10 μL。色譜柱的理論板數(shù)按木犀草素對(duì)照品色譜峰計(jì)算不低于5 000。重復(fù)性：取同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，測得木犀草素峰面積的RSD=0.55%。木犀草素對(duì)照品與供試品的HPLC色譜圖見圖2。

2.4.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含1.476 mg木犀草素的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.4.2.3 供試品溶液的制備 取“2.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液2mL，臨用前以0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4.2.4 線性關(guān)系 取“2.4.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.2mL，用甲醇定容至25mL，即得濃度為70.85μg/mL的木犀草素對(duì)照品溶液，將此溶液分別用流動(dòng)相稀釋0，2，4，8，16，32倍，將不同濃度的對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣10μL，以濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為A=16.881C+0.959 6（r=0.999 7）。結(jié)果表明木犀草素在2.21~70.85μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0，1，6，12，24，36 h進(jìn)樣測定，木犀草素峰面積的RSD=1.76%。表明供試品溶液在36 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.4.2.6 精密度 取同一樣品（開遠(yuǎn)）6份，精密稱定，按“2.4.2.3”項(xiàng)制備供試品，在規(guī)定色譜條件下測得木犀草素含量的RSD=1.8%（n=6）。

2.4.2.7 準(zhǔn)確度 精密稱取已測知含量的花生殼（開遠(yuǎn)）粗粉9份，每3份一組，按高、中、低3個(gè)水平分別精密加入木犀草素對(duì)照品，然后按“2.4.2.3”項(xiàng)制備供試品，按“2.4.2.1”色譜條件測定木犀草素含量，計(jì)算加樣回收率，木犀草素平均回收率為100.7%，RSD=2.6%（n=9）。

2.4.2.8 樣品測定 將不同產(chǎn)地花生殼樣品，分別按“2.4.2.3”項(xiàng)制備供試品，在規(guī)定色譜條件下分別測定峰面積，根據(jù)線性回歸方程求出供試品濃度，并計(jì)算含量，結(jié)果見表1。結(jié)果表明：不同產(chǎn)地花生殼中木犀草素含量差別較大。

3 討論

花生殼中以木犀草素為代表的黃酮類含量較高〔8-10〕，適合作為指標(biāo)成分對(duì)藥材進(jìn)行質(zhì)量控制，故本研究選擇木犀草素為指標(biāo)成分。

根據(jù)不同產(chǎn)地花生殼的實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果，按平均值的±20%浮動(dòng)的指導(dǎo)意見，建議花生殼的水分不得超過10%，總灰分不得超過4%，酸不溶性灰分不得超過1%，醇溶性浸出物不得少于7%，按干燥品計(jì)算，含木犀草素不得低于0.3%。

花生殼中木犀草素的含量隨產(chǎn)地的不同，差異很大，因此在提取花生殼中木犀草素時(shí)，應(yīng)注意選取原材料。

〔1〕楊莉，謝宇，胡立明.花生殼在食品、醫(yī)藥、化工方面的研究與開發(fā)〔J〕.花生學(xué)報(bào)，2008，37（3）：24-28.

〔2〕周萍，王海燕，胡燕.花生的藥用價(jià)值研究進(jìn)展〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20（11）：2854-2855.

〔3〕張斌，孫蘭萍，馬龍，等.花生殼提取物的體外抗氧化活性研究〔J〕.資源開發(fā)與市場，2009，25（7）：586-589.

〔4〕夏滿莉，王敏，周新妹.花生殼總黃酮的舒血管作用機(jī)制初步探討〔J〕.嘉興學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，20（6）：18-21.

〔5〕云南省衛(wèi)生廳.云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)〔M〕.昆明：云南大學(xué)出版社，1996：58.

〔6〕國家藥典委員會(huì).中國藥典：一部〔M〕.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄50-62.

〔7〕周萍，胡碧波，朱倩，等.花生殼總黃酮及木犀草素含量〔J〕.中藥材，2006，29（8）：769-771.

〔8〕李芳清，徐衛(wèi)東.花生殼中黃酮類化合物的提取及其純化〔J〕.食品科學(xué)，2009，30（8）：101-105.

〔9〕陽文輝，李衛(wèi)彬，黃鎖義，等.超聲波提取花生殼總黃酮及其鑒別〔J〕.微量元素與健康研究，2006，23（5）：28-30.

〔10〕唐麗萍，龔云麒，吳小燕，等.不同產(chǎn)地花生殼中木犀草素的HPLC測定〔J〕.花生學(xué)報(bào)，2005，34（2）：1-4.

（責(zé)任編輯 蔣 康）

Study on Quality Standard of Peanut Hull

ZHOU Ping，YANG Yue'e，YANGMin
（College of Pharmacy，DaliUniversity，Dali，Yunnan 671000，China）

Objective：To perfect the quality standard of peanut hull.It can provide scientific basis for the utilization and development of peanut hull.MethodsCharacteristics and micro-features of peanut hull samples were observed.The samples were identified by TLC and HPLC with luteolin standard as reference.Water，total ash and acid-insoluble ash in peanut hull were examined by determination ofwater and ash.The contentof ethanol-soluble extractiveswasmeasured by hotextractionmethod and of luteolin was determined by HPLC.ResulteThe 10 samples from different habitats and kinds presented the spots of the same colors and same retention time at the corresponding position.The content of water，total ash ，acid-insoluble ash，ethanol-soluble extractives and luteolin were 7.66%~9.99% ，2.16%~4.23% ，0.28%~1.79% ，4.38%~8.25%and 0.111%~0.371%respectively.ConclusionThemethods are simple，convenient，and accurate and can be used for the quality control of peanuthull.

peanuthull；quality standard ；luteolin；HPLC

Q949.751.9

A

1672-2345（2011）02-0001-03

云南省教育廳科研基金資助項(xiàng)目（07Z10589）

2010-12-29

2011-01-14

周萍，副教授，主要從事藥物質(zhì)量控制研究.