老年慢性左心衰嚴(yán)重程度與循環(huán)EMP62E和Toll樣受體水平變化的關(guān)系

陳 穎,李 俠,郭 燕,胡有東,周華蘭,楊海晨,李 霞,韓雪花

(徐州醫(yī)學(xué)院附屬淮安醫(yī)院老年病科,江蘇淮安,223002)

新近研究認(rèn)為,循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒(EMP62E)、Toll樣受體 2(TLR2)和 Toll樣受體4(TLR4)水平在炎癥反應(yīng)中起著重要作用,所介導(dǎo)的信號(hào)通路與冠心病(CHD)、高血壓病、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系[1]。但EMP62E、TLR2和 TLR4水平與老年慢性心力衰竭關(guān)系的研究相對(duì)較少[2]。該項(xiàng)臨床研究旨在探討EMP62E、TLR2和 TLR4水平變化與老年慢性左心衰及其嚴(yán)重程度的關(guān)系,揭示EMP62E、TLR2和T LR4在老年慢性左心衰發(fā)生發(fā)展中的可能機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2009年1月本院左心衰患者90例,入選患者均未服用非甾體抗炎藥和類固醇激素,均符合老年慢性左心衰臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。經(jīng)病史、臨床體檢和實(shí)驗(yàn)室檢查排除急性心肌梗死、房顫、右心室功能受損、心源性休克、糖尿病、腦卒中、腫瘤、感染、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、近期手術(shù)、外傷、腎功能不全、肝臟疾病和發(fā)熱等。根據(jù)美國(guó)紐約心臟病學(xué)會(huì)(NYHA)的心功能分級(jí)方案和LVEF將所有入選者分成5組:LVEF 50%～70%為對(duì)照組,LVEF 40%～49%為Ⅰ級(jí)組,32%～39%為Ⅱ級(jí)組 LVEF,LVEF 27%～31%為Ⅲ級(jí)組,LVEF 22～26%為Ⅳ級(jí)組。心衰組病因及各組LVEF基本資料,見表1。各組間年齡和性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在分析老年慢性左心衰患者 EMP62E、TLR2和 TLR4水平時(shí),按照病因分成高血壓左心衰組、CHD左心衰組和對(duì)照組:高血壓左心衰組35例,LVEF(35.20±6.39)%;CHD左心衰組55例,LVEF(32.36±6.88)%。3組之間年齡和性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 心衰組病因及各組LVEF基本資料( ±s)

表1 心衰組病因及各組LVEF基本資料( ±s)

病因(例)組別 n 男性 年齡(歲)LVEF(%)高血壓 CHD對(duì)照組 30 12 67.13±5.70 - - 63.97±4.65Ⅰ級(jí)組 24 13 68.79±7.92 12 12 42.67±2.06Ⅱ級(jí)組 27 15 68.81±8.97 15 12 34.26±3.17Ⅲ級(jí)組 21 11 72.14±6.71 5 16 29.05±1.07Ⅳ級(jí)組 18 11 72.39±7.37 3 15 25.17±1.42

1.2 EMP62E、TLR2和 TLR4檢測(cè)方法[4]

入選者均清晨空腹采集肘靜脈血6 mL。應(yīng)用美國(guó)貝克曼庫爾特公司的EPICS?ALT RA TM Flow Cytometer with Hypersort TM流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血 EMP62E,以個(gè)/μ L表示EMP62E的表達(dá)水平。主要試劑為FITC-標(biāo)記的EMP62E單克隆抗體,PE-IgG1為同型對(duì)照;所用抗體均購自AbD serotech公司。檢測(cè)外周血單核細(xì)胞表面TLR2和TLR4的表達(dá),以平均熒光強(qiáng)度(MFI)表示T LR2和 TLR4的表達(dá)水平。主要試劑為FITC-標(biāo)記的小鼠抗人CD14抗體、PE-標(biāo)記的小鼠抗人TLR-4抗體以及FITC-標(biāo)記的小鼠抗人T LR-2抗體,并設(shè)置IgG2a為同型對(duì)照。研究所用抗體均購自AbD serotech公司。

1.3 LVEF的檢測(cè)[5]

90例老年慢性左心衰患者采用飛利浦HDI5 000多普勒超聲顯像儀測(cè)定 LVEF。判斷EMP62E、TLR2和TLR4與左心功能指標(biāo)變量間相關(guān)性和依存性。

2 結(jié) 果

2.1 EMP62E、TLR2和 TLR4在心衰組表達(dá)

左心衰患者各組中EMP62E、TLR2和TLR4表達(dá)顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且隨著左心衰程度的加重,EMP62E、TLR2和TLR4表達(dá)水平明顯上升。各組間兩兩比較,相互差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見表2。

表2 TLR2、TLR4和EMP62E在不同左心功能組間比較( ±s)

表2 TLR2、TLR4和EMP62E在不同左心功能組間比較( ±s)

與對(duì)照組比較,＊＊P<0.01;與Ⅰ級(jí)組比較,##P<0.01;與Ⅱ級(jí)組比較, P<0.01;與Ⅲ級(jí)組比較,△△P<0.01。

組別 n TLR2(MFI)T LR4(M FI)EM P62E(個(gè)/μ L)對(duì)照組 30 2.75±0.83 1.45±0.4 165.83±29.82Ⅰ級(jí)組 24 4.24±2.48＊＊ 2.58±1.82＊＊ 291.04±21.95＊＊Ⅱ級(jí)組 27 4.16±0.93＊＊ 2.61±0.53＊＊ 493.19±42.36＊＊##Ⅲ級(jí)組 21 6.36±0.74＊＊ 5.03±0.74＊ 605.14±49.37＊＊Ⅳ級(jí)組 18 7.99±1.10＊＊△△ 6.34±1.46＊＊△△ 1092.72±102.82＊＊△△

2.2 TLR2、TLR4和EMP62E在不同病因心衰組的表達(dá)

TLR2、T LR4和EMP62E 在對(duì)照組、CHD 左心衰組和高血壓心衰組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或 P<0.01),TLR2、T LR4和EMP62E水平變化趨勢(shì)為:冠心病組>高血壓組>對(duì)照組。見表3。

表3 TLR2、TLR4和EMP62E在不同病因心衰組間的比較( ±s)

表3 TLR2、TLR4和EMP62E在不同病因心衰組間的比較( ±s)

與對(duì)照組比較,＊＊P<0.01;與冠心病組比較,#P<0.05,##P<0.01

組別 n T LR2(MFI)T LR4(M FI)EM P62E(個(gè)/μ L)對(duì)照組 30 2.75±0.83 1.45±0.42 156.83±29.81冠心病組 55 6.06±2.14＊＊ 4.21±2.13＊＊ 637.51±316.04＊＊高血壓組 35 4.58±1.71＊＊## 3.37±1.75＊＊ 485.40±213.97＊＊#

2.3 TLR2、TLR4和EMP62E與左心衰嚴(yán)重程度的相關(guān)性

TLR2、TLR4與LVEF均成負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05),即隨著左心功能的降低(LVEF值不斷減小),外周血單核細(xì)胞表面T LR2、TLR4表達(dá)增多。EMP62E與LVEF呈負(fù)相關(guān)(P<0.01),即隨著 LVEF值的下降,外周血EMP62E表達(dá)增多。

3 討 論

研究證實(shí)[6],內(nèi)皮細(xì)胞損傷在動(dòng)脈粥樣硬化形成和粥樣斑塊的穩(wěn)定性中有著重要的作用,而其作用機(jī)制為內(nèi)皮細(xì)胞損傷后氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng),促使冠心病、高血壓病、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)生發(fā)展。急性冠脈綜合征(ACS)、穩(wěn)定性心絞痛(SAP)和頸動(dòng)脈硬化患者的循環(huán)單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和粥樣硬化斑塊中T LR2和TLR4的表達(dá)明顯升高。因此,TLR2和 TLR4與內(nèi)皮損傷、動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展以及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性有關(guān)[7-8]。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),TLR信號(hào)通路的激活可通過有害炎癥反應(yīng)促使白細(xì)胞聚集、細(xì)胞因子異常表達(dá)、心肌缺血、再灌注損傷、活化促凋亡信號(hào)反應(yīng)通路、心肌梗死后心肌細(xì)胞凋亡、心肌梗死面積擴(kuò)大、心臟幾何構(gòu)型異常和心臟功能障礙[9]。

EMP62E、TLR2和TLR4三種危險(xiǎn)因素共同促使老年慢性左心衰發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制是[10],氧化應(yīng)激(OS)導(dǎo)致能量代謝障礙引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,促使內(nèi)皮損傷和內(nèi)皮功能失調(diào)。OS激活內(nèi)皮表面附著的中性粒細(xì)胞,釋放炎性蛋白S100A12并與內(nèi)皮細(xì)胞表面晚期糖基化終末產(chǎn)物受體相互作用,通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和核轉(zhuǎn)錄因子κ B(NF-κ B)信號(hào)途徑,誘導(dǎo)促炎信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)上調(diào)血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)和細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)表達(dá),導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷。氧化應(yīng)激狀態(tài)促使內(nèi)皮細(xì)胞激活和凋亡,釋放EMP62E,通過一氧化氮(NO)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑降低NO依賴性血管舒張作用,引起嚴(yán)重內(nèi)皮功能失調(diào)。TLR2和TLR4的共刺激作用促使 NF-κ B表達(dá),活化 NF-κ B信號(hào)通路,導(dǎo)致心肌缺血和心肌細(xì)胞收縮功能失調(diào)。TLR2和TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑還可通過共同的下游銜接蛋白,即髓樣分化因子88,導(dǎo)致內(nèi)皮損害更加嚴(yán)重,老年慢性左心衰進(jìn)一步惡化。本研究認(rèn)為,早期檢測(cè)EMP62E、TLR2和TLR4表達(dá)水平的變化判斷內(nèi)皮細(xì)胞功能,可能有助于老年慢性左心衰診斷、治療和預(yù)后的評(píng)估。

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