HPLC-ELSD法測定健脾益氣膠囊中黃芪甲苷的含量

邱凱鋒 李國成 張小兵

（1 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院，廣東 廣州 510120；2 廣州市花城制藥廠，廣東 廣州510555）

健脾益氣膠囊由黃芪、炒白術(shù)、茯苓、延胡索等十味藥材組成，具有健脾胃、益氣血，用于脾胃虛弱，氣血不足等癥。方中君藥黃芪的主要成分為黃芪甲苷，對于本制劑的療效發(fā)揮起到了很大作用，以此作為含量測定指標(biāo)具有合理性。為提高產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性，本文建立了測定黃芪甲苷含量HPLC-ELSD法，從而為控制該產(chǎn)品的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC20A高效液相色譜儀，蒸發(fā)光散射檢測器（SEDEX-75）；色譜柱為Hypersil BDS-C18柱；LCsolution操作系統(tǒng)。

黃芪甲苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號110781-200613），乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Hypersil BDS C18色譜柱（5μm，200mm×5.0mm）；流動相是乙腈-水（32∶68）；流速1.0mL/min；載氣為3.5mL/min；蒸發(fā)光散射檢測器漂移溫度40℃；理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品溶液制備

將黃芪甲苷對照品干燥至恒重，精密稱取適量，用甲醇溶解稀釋成濃度為0.1mg/mL的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備[1]

精密量取本品5g，置索氏提取器中，用甲醇50mL冷浸，第2天再加甲醇適量，加熱回流，待提取液無色后取出，放冷，濾過，并用少量甲醇分次洗滌容器，合并洗液和濾液，蒸干，加水50mL于殘渣，微熱使之溶解，然后用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40mL，合并正丁醇提取液，再用氨試液充分洗滌，每次40mL，2次，最后分取正丁醇液，蒸干，用甲醇溶解殘渣后移至5mL的量瓶，取甲醇加至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 陰性供試品溶液的制備

精密稱取缺少黃芪的陰性樣品5g，按2.3中相同方法制備陰性供試品溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗[2]

精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀。結(jié)果表明，供試品色譜中黃芪甲苷色譜峰與其他成分峰分離良好，其色譜峰的保留時間與對照品一致，陰性供試品溶液色譜峰未見干擾。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計應(yīng)不低于3000。見圖1。

2.6 線性關(guān)系的考察

精密量取黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解稀釋得0.50mg/mL的對照品儲備液。分別精密量取該溶液1、2、4、5、6、8、10mL于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，然后分別精密量取各濃度對照品溶液10μL，進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以對照品濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=4.0206X-6.4720，r=0.9996。結(jié)果表明，黃芪甲苷在進(jìn)樣量0.20～2.00μg范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

精密量取黃芪甲苷對照品溶液10μL，進(jìn)樣，在上述色譜條件下測定。重復(fù)進(jìn)樣6次，測得黃芪甲苷峰面積RSD為0.96%，表明此法的進(jìn)樣精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一供試液，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD為1.793%。表明方法重復(fù)性好。

2.9 回收率試驗

精密量取樣品9份，每份分別精密加入一定量對照品溶液（取樣量和加入量詳見表1），按上述供試品溶液制備方法操作，在“2.1”項色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，計算回收率和RSD（%），測得平均回收率為97.32%，RSD為2.31%。

圖1 健脾益氣膠囊的高效液相色譜圖

表1 回收率試驗測定結(jié)果

2.10 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8h進(jìn)樣測定，結(jié)果黃芪甲苷色譜峰面積RSD=2.41%（n=5），說明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.11 樣品測定

分別精密吸取對照品（0.1mg/mL）和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定即得。分別測定3批樣品，每g含黃芪以黃芪甲苷（C41H68O14）計分別是29.3μg，31.4μg，27.6μg。根據(jù)以上樣品的測定結(jié)果，本品含量限度初步定為每g含黃芪以黃芪甲苷（C15H26O）計，不得少于15.0μg。

3 討 論

3.1 提取方法的選擇，試驗過程中分別采用索氏提取器提取，80℃溫浸提取和超聲波提取，后兩種方法測得的黃芪甲苷含量略低，故選區(qū)索氏提取器提取方法。

3.2 黃芪甲苷是黃芪的主要有效成分之一，為定量分析健脾益氣膠囊中黃芪甲苷的含量，本實驗建立了黃芪甲苷的HPLC-ELSD測定法。本方法樣品處理簡單，在實驗色譜條件下色譜分離完全，加樣回收率高，精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小，測試數(shù)據(jù)可靠，能更有效的控制產(chǎn)品質(zhì)量。

[1]國家藥典委員會.中華人國共和國藥典(一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：212.

[2]國家藥典委員會.中華人國共和國藥典(一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：附錄33.