潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血 T細(xì)胞及腸上皮細(xì)胞中 CD98的表達(dá)

張建立,馮百歲

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科 鄭州 450052 2)鄭州市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科鄭州 450052

(2010-01-12收稿 責(zé)任編輯 徐春燕)

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種原因不明的慢性非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病。免疫紊亂在 IBD發(fā)病中起重要作用。CD98在胃腸道組織中高水平表達(dá),可能是炎癥發(fā)生和持續(xù)化的重要因素之一[1]。作者分別采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) UC患者外周血 T細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞中 CD98的表達(dá),報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 收集 2008年 8月至 2009年 11月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院門(mén)診和住院 UC患者 60例,診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[2]。采用 Sutherland疾病活動(dòng)指數(shù)[2]均診斷為初發(fā)型活動(dòng)性。采用 Truelove和Witts潰瘍性結(jié)腸炎分度[2],分為中重度 UC組 30例,輕度 UC組 30例,其中男性分別為 14和 13例,女性分別為 16和 17例,年齡分別為 18～50(36.2±8.5)歲和21～49(38.2±6.8)歲。另選 30例健康志愿者為對(duì)照組,其中男 13例,女 17例,年齡 18～45(31.4±9.2)歲。3組間年齡及性別分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.540,χ2=0.956,P均 ＞0.05)。上述對(duì)象受試前 3個(gè)月內(nèi)均未接受氨基水楊酸、糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療,未合并其他自身免疫性疾病、腫瘤、病毒性肝炎或 HIV感染,并均簽訂知情同意書(shū)。

1.2 主要試劑 小鼠抗人 CD98單克隆抗體、PE標(biāo)記的羊抗小鼠抗體和兔抗人 CD98單克隆抗體購(gòu)于 Santa Cruz公司,FITC標(biāo)記的小鼠抗人 CD3抗體和紅細(xì)胞裂解液購(gòu)于 Becton-Dickinson公司,免疫組織化學(xué)試劑盒和濃縮型 DAB顯色試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 標(biāo)本采集 分別采集 UC患者和對(duì)照組外周靜脈血 1 mL加入抗凝管中;結(jié)腸鏡下取 UC患者病灶處腸黏膜活檢,甲醛溶液固定。

1.4 T細(xì)胞 CD98陽(yáng)性細(xì)胞百分率測(cè)定 外周血樣本加入紅細(xì)胞裂解液,離心并洗滌后,再分別加入小鼠抗人 CD98單克隆抗體、PE標(biāo)記的羊抗小鼠抗體和 FITC標(biāo)記的小鼠抗人 CD3抗體,利用流式細(xì)胞儀對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)。選用波長(zhǎng) 488 nm的氬離子激光,以“門(mén)技術(shù)”劃定淋巴細(xì)胞,測(cè)定每個(gè)標(biāo)本門(mén)內(nèi) 10 000個(gè)細(xì)胞。測(cè)定結(jié)果用 Cellquest 3.0軟件(美國(guó) Becton-Dickinson公司)進(jìn)行雙色熒光參數(shù)的獲取和分析。記錄 CD3和 CD98雙陽(yáng)性細(xì)胞占 CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的百分比,即為 T細(xì)胞中 CD98陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。

1.5 腸上皮細(xì)胞中 CD98的檢測(cè) 甲醛溶液固定后的腸黏膜組織,脫水制成蠟塊。切片后烤片、脫蠟、水化及抗原修復(fù),加山羊血清封閉液,再先后加入兔抗人 CD98單克隆抗體、生物素化二抗及試劑SABC,DAB顯色,蘇木素染色,鹽酸乙醇分化,脫水、封片并鏡檢。選擇 10個(gè)不重復(fù)視野(×400)觀察,每個(gè)視野計(jì)數(shù) 50個(gè)細(xì)胞。參照文獻(xiàn)[3]判定結(jié)果。陽(yáng)性細(xì)胞百分比:～25%計(jì) 0分,～50%計(jì) 1分,～75%計(jì) 2分,＞75%計(jì) 3分;著色強(qiáng)度:輕度著色計(jì) 1分,中度著色計(jì) 2分,重度著色計(jì) 3分。以上兩項(xiàng)得分之和≥3分為陽(yáng)性,＜3分為陰性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)用 SPSS 16.0進(jìn)行分析。對(duì)照組、輕度 UC組和中重度UC組外周血T細(xì)胞 CD98表達(dá)的比較采用單因素方差分析和 LSD-t檢驗(yàn),其相關(guān)性采用 Spearman秩相關(guān)分析;輕度 UC組和中重度 UC組腸上皮細(xì)胞 CD98表達(dá)的比較采用 χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 外周血 T細(xì)胞中 CD98的表達(dá) 中重度 UC組、輕度 UC組和對(duì)照組T細(xì)胞 CD98陽(yáng)性細(xì)胞的百分率分別為(43.40±5.09)%、(32.45±6.71)%和(28.42±4.31)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=60.501,P＜0.001),3組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均 ＜0.05)。T細(xì)胞 CD98陽(yáng)性細(xì)胞的百分率與UC的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)(rs=0.739,P＜0.001)。

2.2 腸上皮細(xì)胞中 CD98的表達(dá) 見(jiàn)圖 1。中重度UC組病灶部位腸上皮細(xì)胞中 CD98的表達(dá)(20/30,66.7%)高于輕度 UC組(11/30,36.7%)(χ2=5.406,P=0.020)。

圖 1 輕度 UC(A)和中重度UC(B)腸上皮細(xì)胞 CD98的表達(dá)(SABC,×400)

3 討論

IBD是一種病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確的免疫相關(guān)性疾病,大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并伴有免疫功能紊亂是其主要特征。在對(duì) IBD發(fā)病機(jī)制的研究中,包括整合素在內(nèi)的黏附分子參與的免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一[4]。CD98是一個(gè)發(fā)現(xiàn)和研究時(shí)間不長(zhǎng)的白細(xì)胞分化抗原,目前認(rèn)為它有調(diào)節(jié) β1整合素、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)及細(xì)胞融合與增殖等功能[5]。研究[6]發(fā)現(xiàn),活化的 CD98上調(diào) β1整合素的表達(dá)及與胞外配合基的親和力,引起細(xì)胞黏附增加。另外,CD98可以使 β1整合素聚集為高密度的復(fù)合物,導(dǎo)致整合素活化[7]、整合素樣信號(hào)傳導(dǎo)和非貼壁依賴(lài)性生長(zhǎng)[1],促進(jìn)腸道炎癥的發(fā)生。

作者發(fā)現(xiàn),外周血 T細(xì)胞中 CD98的表達(dá)與 UC的發(fā)生有關(guān),并與其嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。因此,可以嘗試檢測(cè)外周血 T細(xì)胞 CD98的表達(dá)來(lái)輔助診斷UC及其嚴(yán)重程度。此外,研究結(jié)果還顯示,輕度UC組腸上皮細(xì)胞中 CD98的表達(dá)亦低于中重度 UC組。

綜上所述,CD98在外周血 T細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)可反映 UC的病情變化,CD98可能參與了 UC的發(fā)病過(guò)程,并且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。

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[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化分會(huì)炎癥性腸病協(xié)作組.中國(guó)炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見(jiàn)[J].中華內(nèi)科雜志,2008,47(1):73

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