應(yīng)用QF-PCR產(chǎn)前診斷1例48，XXYY綜合征

劉娜 李東至

（廣州市婦女兒童醫(yī)療中心 產(chǎn)前診斷中心，廣東 廣州 510623）

48，XXYY綜合征是一種罕見的性染色體異常，其發(fā)生率在新生兒中約為1／50 000，但在需要治療的智障者中為1／300［1］。患者常見的體征包括身材高大、乳腺發(fā)育、向心性肥胖、皮膚潰瘍、智力障礙和“拳擊手”面容（pugilistic face）。目前文獻(xiàn)報(bào)道的48，XXYY綜合征已超過70例，其中只有1例在產(chǎn)前通過母血甲胎蛋白（AFP）篩查而診斷，妊娠隨即終止［2］。本文報(bào)道應(yīng)用熒光定量PCR（QF-PCR）技術(shù)產(chǎn)前診斷1例48，XXYY綜合征。

1 染色體微衛(wèi)星分析

1.1 樣本DNA制備 胎兒DNA從羊水細(xì)胞提取，父母DNA分別從外周血提取，使用德國(guó)QIAGEN公司DNA提取試劑盒。

1.2 QF-PCR擴(kuò)增的微衛(wèi)星（STR）位點(diǎn) 2對(duì)X染色體的特異性引物，擴(kuò)增 HPRT（Xq26.1）和DXS6809（Xq）；2對(duì)13號(hào)染色體特異性引物，擴(kuò)增D13S305（13q12.1-q14.1）和 D13S258（13q21.2-q31）；2對(duì)18號(hào)染色體特異性引物，擴(kuò)增D18S535（18染色體）和 D18S386（18q22.1-q22.2）；2對(duì)21號(hào)染色體特異性引物，擴(kuò)增D21S1435（染色體21）和D21S1446（染色體21）；2對(duì)在X和Y染色體上均表達(dá)的位點(diǎn)引物，擴(kuò)增AMXY和X22。所有STR位點(diǎn)的引物序列來自Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)，片段分析的儀器為ABI3100遺傳分析儀，內(nèi)在分子量標(biāo)準(zhǔn)35～500bp（單鏈），GENESCAN基因分型軟件掃描分析凝膠上擴(kuò)增產(chǎn)物及內(nèi)標(biāo)的位置，確定產(chǎn)物片段的大小。

1.3 QF-PCR結(jié)果判斷 在QF-PCR圖譜中，一個(gè)正常的雙等位基因的樣本顯示出2個(gè)STR峰，其比值非常接近1∶1；染色體三體樣本顯示出比值為1∶1∶1的3個(gè)STR峰或?yàn)楸戎禐?∶1的2個(gè)峰。AMXY擴(kuò)增后，正常男性顯示為1∶1的2個(gè)峰，正常女性顯示為單個(gè)峰。X22擴(kuò)增后，若為雜合子，46，XY的男性和46，XX的女性顯示比值為1∶1的2個(gè)峰，47，XXY的男性顯示為比值1∶1∶1的3個(gè)峰或2∶1的2個(gè)峰；若為純合子，男性（46，XY）和女性（46，XX）顯示為1個(gè)峰。

2 病例報(bào)道

孕婦，28歲，妊娠18周，G2P1。一子3歲，為前次婚姻所生?，F(xiàn)丈夫56歲。雙方體健，孕前及孕期無不良接觸史，妊娠12周時(shí)超聲檢查正常，妊娠16周時(shí)血清學(xué)篩查陰性。孕18周時(shí)由于擔(dān)心丈夫高齡而焦慮，堅(jiān)持要求產(chǎn)前診斷，行羊膜腔穿刺術(shù)，抽吸羊水20ml。

15ml羊水常規(guī)送檢細(xì)胞培養(yǎng)，5ml羊水行QFPCR快速核型分析。QF-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)（圖1）：胎兒的AMXY顯示2個(gè)峰，提示為男性胎兒。DXS6809顯示為1∶1雙等位基因峰，一個(gè)位于256bp，對(duì)應(yīng)于父源性的X染色體，一個(gè)位于260bp，對(duì)應(yīng)于母源性的X染色體，提示有2個(gè)X染色體的存在。因此，AMXY和X22顯示X和Y的峰值比為1∶1，類似46，XY核型，但DXS6809又提示胎兒存在2條X染色體。據(jù)此預(yù)測(cè)，胎兒同時(shí)存在2條Y染色體，核型為48，XXYY。因?yàn)?，如果胎兒核型?7，XXY，那么X和Y的比值是2∶1而不是1∶1。染色體13，18和21上的標(biāo)記物顯示為雙親二體型。羊水培養(yǎng)后的細(xì)胞遺傳學(xué)分析證實(shí)了QF-PCR結(jié)果。48，XXYY源自于含1條X染色體的卵子和XXY核型的精子受精，后者是由于在精子發(fā)生中，性染色體的第1次和第2次減數(shù)分裂連續(xù)不分離所致。

孕婦選擇終止妊娠。引產(chǎn)胎兒生殖器為男性，外觀無異常發(fā)現(xiàn)，家屬拒絕胎兒尸解。取胎盤組織行QF-PCR檢查，同樣顯示核型48，XXYY。夫婦雙方外周血核型分析正常。

圖1 QF-PCR圖譜：胎兒AMXY為1∶1雙峰，X22為1∶1雙峰，DXS6809為為1∶1雙峰。

3 討論

在產(chǎn)前診斷臨床，高齡孕婦通常定義為年齡≥35歲。但在生育問題上，父親的年齡很少受到關(guān)注。目前尚無高齡父親的明確定義，一般指在生育時(shí)父親的年齡至少超過40歲。母親年齡是非整倍體妊娠的一個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)因素，相對(duì)來說，父親年齡的相關(guān)性并不顯著。源自于父親的21三體只占唐氏綜合征病例的5%～10%，已有的研究也未證實(shí)21三體存在父親的年齡效應(yīng)［3，4］。同樣，其他幾種常染色體非整倍體（如13、15、16和18三體）的發(fā)生率也未發(fā)現(xiàn)與父親年齡相關(guān)［5］。但是和常染色體不同，性染色體非整倍體（如 47，XXY、47，XYY、47，XXX、45，X）有更多的父源性［6］。本文病例中，胎兒性染色體異常源自于高齡父親也支持了這一觀點(diǎn)。

應(yīng)用QF-PCR快速產(chǎn)前診斷性染色體數(shù)目異常的文 獻(xiàn) 不 多，Chen等［7］產(chǎn) 前 診斷 1 例 49，XXXXY。近年來，許多細(xì)胞遺傳中心已將QF-PCR作為檢測(cè)常見染色體三體的有效手段［8，9］。我們相信，通過X／Y染色體上的STR標(biāo)記物，如X 2 2，AMXY和HPRT，QF-PCR同樣可用于產(chǎn)前快速診斷性染色體的非整倍體。本文結(jié)果也證實(shí)了QFPCR用于診斷性染色體數(shù)目異常的精確性。

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