高效液相法測(cè)定抗骨增生膠囊中淫羊藿苷的含量

蔣華科 陳純 陳仲新

抗骨增生膠囊是中國(guó)藥典載入品種［1］，由熟地黃、雞血藤、肉蓯蓉、萊菔子、狗脊、骨碎補(bǔ)、女貞子、牛膝、淫羊藿復(fù)配制成。具有補(bǔ)腰腎，強(qiáng)筋骨，活血，利氣，止痛的功效。臨床上常用于治療增生性脊椎炎(肥大性胸椎炎，肥大性腰椎炎)，頸椎綜合征，骨刺。我們按照藥典規(guī)定進(jìn)行了產(chǎn)品試制，并建立了主要有效成分淫羊藿苷的檢測(cè)方法，以控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

PERKIN ELMER高效液相色譜系統(tǒng):Series 200 LC四元低壓梯度泵;Model 785A紫外檢測(cè)器;NELSON 200 Series色譜工作站;200 Series自動(dòng)進(jìn)樣器(100 L)。淫羊藿苷對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào):110737-200413?？构窃錾z囊為自制(批號(hào):110225、110228、110311);陰性對(duì)照樣品(按處方除去淫羊藿按制法工藝制成)。分析用乙腈為色譜純，水為三重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:AgilentC18，5 μm，250×4.6 mm(Agilent公司產(chǎn));柱溫:室溫;流動(dòng)相:乙腈-水(30∶70);流速1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):270nm，進(jìn)樣量20 μl。在此色譜條件下，淫羊藿苷可達(dá)到基線分離，見(jiàn)圖1，2。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算不低于1500。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取干燥至恒重淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含淫羊藿苷對(duì)照品20 g的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品膠囊內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)1 h，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品2.35 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取此溶液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得淫羊藿苷對(duì)照品溶液(濃度為23.5 μg/ml)。精密吸取上述對(duì)照品溶液 10、20、30、40、50 μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量X(g)為橫座標(biāo)、進(jìn)樣峰面積Y(uv.s)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明淫羊藿苷對(duì)照品在0.235～1.175 g/ml范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，記錄峰面積，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD為0.69%，結(jié)果說(shuō)明儀器的精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 稱取樣品6份，每份1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.50%。結(jié)果表明，本法測(cè)定具有良好的重現(xiàn)性。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，在室溫下，分別于配制后0、2、4、18 h進(jìn)行淫羊藿苷峰面積測(cè)定，每次進(jìn)樣20 μl，測(cè)得供試品溶液于18 h內(nèi)的峰面積平均值為731445.37，RSD為0.47%。結(jié)果表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 專屬性試驗(yàn) 精密稱取缺淫羊藿的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照樣品溶液，經(jīng)同法高效液相色譜法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖3。對(duì)比圖1、2、3，抗骨增生膠囊供試品在與淫羊藿苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處有吸收峰，而陰性對(duì)照品在與淫羊藿苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，說(shuō)明陰性無(wú)干擾。

2.8 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，稱取已知含量的同一批抗骨增生膠囊(淫羊藿苷含量為0.853 mg/粒，含量折算為2.437 mg/g)0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入對(duì)照品溶液1 ml(淫羊藿苷對(duì)照品濃度為1.006 mg/ml)，照供試品溶液制備方法制備。按正文方法，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算，求得淫羊藿苷平均回收率為99.46%，RSD=1.74%，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，本法回收率較好，方法可行。

表1 淫羊藿苷回收率試驗(yàn)

表2 樣品含量測(cè)定(n=3)

2.9 樣品測(cè)定 精密稱取抗骨增生膠囊(批號(hào):110225、110228、110311)，照供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取供試品溶液20 μl，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品中淫羊藿苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 淫羊藿苷對(duì)照品的HPLC圖譜

圖2 抗骨增生膠囊樣品的HPLC圖譜

圖3 抗骨增生膠囊陰性對(duì)照樣品的HPLC圖譜

3 討論

淫羊藿苷能增加心腦血管血流量、促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、抗衰老、抗腫瘤等功效［2］，是抗骨增生膠囊配方中最重要的功效成分。通過(guò)高效液相色譜法建立淫羊藿苷的含量測(cè)定方法，可對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有較客觀的判斷。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可有效的控制抗骨增生膠囊產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］鄭虎占，董澤宏，佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用(第五卷).學(xué)苑出版社，1998.