艾灸對大負(fù)荷訓(xùn)練期間男子中長跑運(yùn)動員T淋巴細(xì)胞亞群的影響

高明 吳瑛 李國強(qiáng)

1 上海體育學(xué)院（上海 200438） 2 上海中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院

國內(nèi)外研究表明［1，2］，大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練可引發(fā)運(yùn)動員免疫系統(tǒng)機(jī)能失衡。中長跑運(yùn)動員4周賽前高強(qiáng)度大負(fù)荷訓(xùn)練使CD8+細(xì)胞進(jìn)一步升高，CD4+/CD8+比值倒置［3］，優(yōu)秀男子古典式摔跤運(yùn)動員冬訓(xùn)大負(fù)荷訓(xùn)練期4周后，CD4+細(xì)胞含量及CD4+/CD8+比值明顯下降［4］，提示T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生變化，表明運(yùn)動員免疫功能紊亂，感染疾病的幾率增大。

艾灸療法能增強(qiáng)機(jī)體非特異性和特異性免疫功能的作用，在預(yù)防保健、治療免疫系統(tǒng)疾病和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)能方面有肯定作用。艾灸有利于運(yùn)動員恢復(fù)血清CK活性，促進(jìn)血乳酸消除，降低體內(nèi)血乳酸水平［5，6］，減輕運(yùn)動性疲勞，提高機(jī)體運(yùn)動能力。有研究表明，艾灸能明顯改善慢性疲勞綜合征（CFS）患者癥狀、提高臨床療效［7］；化膿灸足三里穴、懸鐘穴，可增加感冒易感患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值［8］，提高免疫機(jī)能 ；隔鹽艾灸神闕穴后，CD3+、CD4+、CD8+均明顯上升［9］，提示艾灸可調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群平衡。這些報道均提示艾灸對T淋巴細(xì)胞亞群有調(diào)節(jié)作用，可提高患者免疫功能及抗病能力。近年來提出的針灸良性預(yù)應(yīng)激假說［10］和開展的艾灸預(yù)處理相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究［11，12］，也證實(shí)了艾灸對心臟、腦保護(hù)作用與啟動機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制密切相關(guān)?；诖?，本研究以中長跑運(yùn)動員為研究對象，將中醫(yī)艾灸療法和“治未病”理論相結(jié)合，制定與運(yùn)動訓(xùn)練相適應(yīng)的防治方案，在大負(fù)荷訓(xùn)練早期階段開始干預(yù)，研究艾灸對CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)作用，并為艾灸方法在競技體育運(yùn)動訓(xùn)練中的應(yīng)用和推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 對象和方法

1.1 研究對象

上海體育學(xué)院訓(xùn)練中心男子中長跑運(yùn)動員12名，年齡16～21歲，訓(xùn)練年限3～6年，一級運(yùn)動員3名，二級運(yùn)動員9名，均身體健康，采用SAS軟件進(jìn)行完全隨機(jī)化分組，分為對照組（6名）和實(shí)驗(yàn)組（6名），兩組年齡、身高、體重、訓(xùn)練年限、運(yùn)動等級等基線情況相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05），具有可比性。

實(shí)驗(yàn)組和對照組實(shí)驗(yàn)期間均正常生活，按相同計劃訓(xùn)練。每天下午訓(xùn)練后，實(shí)驗(yàn)組使用艾灸進(jìn)行預(yù)防性治療，對照組無艾灸干預(yù)治療。實(shí)驗(yàn)前一周內(nèi)患病者如感冒、肺炎等，實(shí)驗(yàn)期間外出比賽不能繼續(xù)實(shí)驗(yàn)者，均不納入實(shí)驗(yàn)。

1.2 訓(xùn)練計劃

根據(jù)主教練制訂的全年訓(xùn)練計劃，在準(zhǔn)備期的大負(fù)荷階段訓(xùn)練進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。具體安排如下：第1周為適應(yīng)訓(xùn)練周，第2～4周為大負(fù)荷訓(xùn)練期，第5周為調(diào)整訓(xùn)練周。大負(fù)荷訓(xùn)練期每天訓(xùn)練2次，每周訓(xùn)練6天，周日休息，共12次，其中，大負(fù)荷強(qiáng)度課3次，中負(fù)荷強(qiáng)度課5～6次，小負(fù)荷強(qiáng)度課3～4次；一次訓(xùn)練課準(zhǔn)備活動20～30分鐘，正式訓(xùn)練80～90分鐘，整理活動20～30分鐘；訓(xùn)練內(nèi)容包括一般耐力（負(fù)荷強(qiáng)度65～75%、心率150～165次/分鐘、10次/周）、專項(xiàng)耐力（負(fù)荷強(qiáng)度85～90%、心率175次/分鐘以上、2次/周）、速度耐力（負(fù)荷強(qiáng)度85～95%、心率175～180次/ 分鐘、4～5次/周）、絕對速度（負(fù)荷強(qiáng)度95～100%、心率180次/分鐘以上、2～3次/周）、專項(xiàng)速度（負(fù)荷強(qiáng)度95～105%、心率185次/分鐘以上、1次/周）、速度（負(fù)荷強(qiáng)度95～105%、心率190次/分鐘以上、1次/周）、中長跑專項(xiàng)身體素質(zhì)（力量、柔韌性、靈敏性、彈跳力）等，訓(xùn)練中交替安排有氧耐力訓(xùn)練、混氧訓(xùn)練、耐酸訓(xùn)練、專項(xiàng)抗酸訓(xùn)練。

1.3 艾灸方法

1.3.1 穴位處方：（1）關(guān)元穴（RN4）、足三里穴（ST36）（雙）；（2）關(guān)元穴（RN4）、三陰交穴（SP6）（雙）［13］。

1.3.2 操作方法：實(shí)驗(yàn)組每天下午訓(xùn)練后，6:30～7:30進(jìn)行穴位艾灸預(yù)防治療，上述（1）和（2）兩組穴位交替治療，每天灸一組；運(yùn)用3個艾灸器，內(nèi)置Φ20×33 mm純艾條，分別置于上述穴位上溫和灸刺激；治療過程中，調(diào)節(jié)艾灸器的調(diào)溫螺絲，使艾灸溫度以患者感覺舒適為度，灸后穴位局部皮膚成淡紅色紅斑為佳；每天1次，每次30 min，每周治療6次，星期日休息；從大負(fù)荷訓(xùn)練開始至調(diào)整訓(xùn)練周結(jié)束，共灸治4周。

1.4 測試指標(biāo)與方法

分別在第1周末（大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練前）、第4周末（大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練3周后）、第5周末（調(diào)整訓(xùn)練1周后），均在清晨6:30～7:00，運(yùn)動員空腹、安靜狀態(tài)下取靜脈血4 ml，2 ml不抗凝，3000 r/min離心10 min分離血清，檢測血睪酮（T）和皮質(zhì)醇（Cort）；2 ml加入肝素鈉抗凝檢測CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群含量。

采用GC-911放射免疫計數(shù)器以放免法檢測T和Cort，按試劑盒說明書操作。

肝素抗凝靜脈血分離100 μl血樣，加入流式管中，加入 20 μl CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5抗體，避光孵育15 min，加入0.5 ml全血紅細(xì)胞裂解液，10 min后，加入0.5 ml的流式專用鞘液，以前向散射（FSC）和側(cè)向散射（SSC）的dot-plot二維圖區(qū)分細(xì)胞群，開窗于淋巴細(xì)胞群，使用流式細(xì)胞儀作雙熒光檢測，測定血T 細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）相對含量。

1.5 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

EPICS-XL流式細(xì)胞儀和Q-Prep流式細(xì)胞儀標(biāo)本制備儀（美國BECKMAN COULTER公司）；放射免疫計數(shù)器（GC-911，科大創(chuàng)新股份有限公司）；可調(diào)式微煙艾灸器（廣西桂林市綠竹生物科技有限公司）；純艾條（Φ20×33 mm，廣西桂林市綠竹生物科技有限公司）；CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，全血紅細(xì)胞裂解液，試劑及抗體均購自美國BECKMAN COULTER公司；碘［125I］睪酮放射免疫分析藥盒、皮質(zhì)醇放射免疫分析藥盒（北京北方生物技術(shù)研究所）。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 T、Cort及T/C比值

表1顯示，大負(fù)荷訓(xùn)練3周后，對照組和實(shí)驗(yàn)組分別與同組大負(fù)荷訓(xùn)練前相比，T明顯降低（P< 0.05），Cort明顯增高（P < 0.01），T/C比值明顯降低（P < 0.01）；調(diào)整訓(xùn)練后，對照組和實(shí)驗(yàn)組T、Cort及其比值均恢復(fù)，但對照組T、T/C比值仍低于大負(fù)荷訓(xùn)練前（P < 0.05）。對照組和實(shí)驗(yàn)組兩組間相比無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

2.2 T淋巴細(xì)胞亞群含量

表2顯示，實(shí)驗(yàn)組大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練后CD3+T細(xì)胞比大負(fù)荷訓(xùn)練前明顯增加（P < 0.01），且比同期對照組明顯增高（P < 0.05）；調(diào)整訓(xùn)練1周后，對照組和實(shí)驗(yàn)組CD3+T細(xì)胞與同組大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練后相比顯著降低（P < 0.05，P < 0.05），且實(shí)驗(yàn)組明顯高于同期對照組（P < 0.05）。

實(shí)驗(yàn)組大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練后CD4+T細(xì)胞比同組大負(fù)荷訓(xùn)練前明顯增加（P < 0.05），調(diào)整訓(xùn)練1周后，實(shí)驗(yàn)組和對照組CD4+T細(xì)胞較同組大負(fù)荷訓(xùn)練后均顯著降低（P < 0.05，P < 0.01）。

實(shí)驗(yàn)組大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練后CD8+T細(xì)胞比同組大負(fù)荷訓(xùn)練前明顯增加（P < 0.05）；調(diào)整訓(xùn)練1周后，對照組和實(shí)驗(yàn)組CD8+T細(xì)胞與同組大負(fù)荷訓(xùn)練后相比均顯著降低（P < 0.05，P < 0.05），且實(shí)驗(yàn)組顯著高于同期對照組（P < 0.05）。

表1 兩組運(yùn)動員T、Cort及其比值比較

表2 兩組運(yùn)動員T淋巴細(xì)胞亞群含量比較

對照組大負(fù)荷訓(xùn)練后CD4+/CD8+比值較同組大負(fù)荷訓(xùn)練前明顯上升（P < 0.05），調(diào)整訓(xùn)練1周后仍繼續(xù)上升，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；實(shí)驗(yàn)組CD4+/CD8+大負(fù)荷訓(xùn)練后升高，調(diào)整訓(xùn)練1周后恢復(fù)趨勢，且3次檢測值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P> 0.05）。

3 討論

本研究在訓(xùn)練第1周小強(qiáng)度、小運(yùn)動量的適應(yīng)性訓(xùn)練之后，即大負(fù)荷訓(xùn)練前，空腹安靜狀態(tài)取肘靜脈血，并檢測相關(guān)指標(biāo)作為基礎(chǔ)值。結(jié)果顯示：T、Cort及其比值，CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞含量及其CD4+/CD8+比值，對照組和實(shí)驗(yàn)組兩組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，且均在運(yùn)動員正常值范圍內(nèi)，故兩組有可比性。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3周大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練后，T明顯下降，Cort明顯上升，對照組和實(shí)驗(yàn)組T/C下降幅度分別達(dá)到（48.4±11.5）%和（55.6±8.58）%，當(dāng)運(yùn)動員T/C比原來水平下降25～30%，或持續(xù)下降則為疲勞或過度疲勞表現(xiàn)［14］，表明本研究的3周大負(fù)荷訓(xùn)練造成了運(yùn)動員疲勞，訓(xùn)練負(fù)荷已達(dá)到大負(fù)荷的要求。調(diào)整1周后，對照組和實(shí)驗(yàn)組分別恢復(fù)至（75.2±15.7）%和（78.2±26.2）%，表明1周調(diào)整使運(yùn)動員機(jī)能有所恢復(fù)，但未完全恢復(fù)到訓(xùn)練前水平，對照組T、T/C比值仍低于大負(fù)荷訓(xùn)練前，實(shí)驗(yàn)組大負(fù)荷訓(xùn)練前后相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示艾灸對運(yùn)動員T、C有一定調(diào)節(jié)作用，有利于運(yùn)動員對大負(fù)荷訓(xùn)練的適應(yīng)。

T淋巴細(xì)胞直接反映特異性免疫功能，訓(xùn)練監(jiān)控中常作為反映運(yùn)動員機(jī)能狀況和免疫功能的有效指標(biāo)［14］，CD3+表示T細(xì)胞總數(shù)，CD4+T細(xì)胞具有輔助和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的作用，發(fā)揮正反饋調(diào)節(jié)作用，CD8+T細(xì)胞亞群有免疫殺傷或抑制作用，發(fā)揮負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，這兩個功能相互拮抗的T細(xì)胞亞群在免疫應(yīng)答中相互協(xié)調(diào)，保持免疫系統(tǒng)功能的平衡。兩種T細(xì)胞亞群比例失調(diào)產(chǎn)生免疫功能障礙，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降，對各種疾病易感性增加。本研究中，對照組3周大負(fù)荷訓(xùn)練后CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞含量上升，與大負(fù)荷訓(xùn)練前相比無統(tǒng)計學(xué)意義，調(diào)整訓(xùn)練后恢復(fù)并下降，CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞與同組大負(fù)荷訓(xùn)練后相比均明顯降低，且CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞低于運(yùn)動員正常值范圍（58.6～83.1%、27.1～49.8%、19.4～41.1%），表明本實(shí)驗(yàn)的大負(fù)荷訓(xùn)練導(dǎo)致男子中長跑運(yùn)動員T淋巴細(xì)胞免疫機(jī)能低下。經(jīng)艾灸防治的實(shí)驗(yàn)組大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練后CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞上升且較大負(fù)荷訓(xùn)練前明顯增加，調(diào)整訓(xùn)練后，實(shí)驗(yàn)組CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞較大負(fù)荷訓(xùn)練后降低，且實(shí)驗(yàn)組大負(fù)荷訓(xùn)練后CD3+、調(diào)整后CD3+和CD8+與同期對照組相比，均明顯增高；實(shí)驗(yàn)組CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞均在正常范圍，表明艾灸對男子中長跑運(yùn)動員T淋巴細(xì)胞有調(diào)節(jié)作用，提高其大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練期間CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群含量，預(yù)防CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群低下。這與其它臨床報道［7-9］一致。

本研究中，實(shí)驗(yàn)組CD4+/CD8+比值變化無統(tǒng)計學(xué)意義，表現(xiàn)為動態(tài)平衡；對照組CD4+/CD8+持續(xù)上升趨勢，且大負(fù)荷訓(xùn)練后與同組大負(fù)荷前相比明顯上升，對照組調(diào)整訓(xùn)練后仍繼續(xù)上升，與以往相關(guān)報道［3，4，14］不相符。分析原因，本研究中，對照組調(diào)整訓(xùn)練后CD4+和CD8+明顯下降，低于正常值范圍，CD8+下降更甚，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值上升。理論上分析，運(yùn)動訓(xùn)練中，常使用CD4+/CD8+比值對運(yùn)動員免疫機(jī)能評估，CD4+與CD8+T細(xì)胞相互協(xié)調(diào)，相互制約，維持機(jī)體免疫系統(tǒng)機(jī)能的相對平衡，大負(fù)荷訓(xùn)練后上升或下降，經(jīng)過一定時間調(diào)整或休息后，CD4+和CD8+應(yīng)恢復(fù)至大負(fù)荷訓(xùn)練前水平或變化不大，其比值也應(yīng)恢復(fù)至大負(fù)荷訓(xùn)練前水平或變化不大，即保持動態(tài)平衡，經(jīng)過平衡－失衡－新平衡建立的變化，再進(jìn)行下一周期的大負(fù)荷訓(xùn)練。如果在機(jī)體免疫系統(tǒng)機(jī)能尚未完全恢復(fù)時進(jìn)入下一周期大負(fù)荷運(yùn)動，則加深對它的抑制。如此反復(fù)，會造成運(yùn)動性免疫機(jī)能抑制。臨床上分析，實(shí)驗(yàn)組變化在正常范圍內(nèi)波動，對照組調(diào)整1周后CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞含量均下降且低于正常范圍，CD4+/CD8+比值調(diào)整1周后并未恢復(fù)到大負(fù)荷訓(xùn)練前水平，綜合分析，進(jìn)一步表現(xiàn)失調(diào)趨勢。

綜上，艾灸能提高男子中長跑運(yùn)動員大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練期間CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群含量，防止CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群低下，預(yù)防CD4+/CD8+失衡。艾灸對大負(fù)荷運(yùn)動訓(xùn)練階段運(yùn)動員T淋巴細(xì)胞亞群有良性調(diào)節(jié)作用，有助于提高運(yùn)動員對大負(fù)荷訓(xùn)練應(yīng)激的適應(yīng)。

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