hMOF蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義

文愛平,汪海嬌,羅 樂,趙 磊,蔡 勇,金景姬,岳 瑛*

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,吉林長(zhǎng)春 130021;2.重慶市涪陵區(qū)中心醫(yī)院婦產(chǎn)科;3.都江堰市醫(yī)療中心婦產(chǎn)科;4.吉林大學(xué)生命科學(xué)院）

表觀遺傳學(xué)是研究在沒有DNA突變的情況下組蛋白(histone）的修飾變化引起某些癌基因和抑癌基因的功能變化,從而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生和發(fā)展。目前組蛋白(Histone）的修飾主要包括:乙酰化、甲基化、磷酸化等[1]。hMOF蛋白又稱人乙?；D(zhuǎn)移酶是組蛋白乙酰化家族MYST的MSL關(guān)鍵成分,作用于組蛋白4第16賴氨酸(H4K16）它在DNA的轉(zhuǎn)錄、DNA的修復(fù)及DNA的復(fù)制和重組及細(xì)胞周期的調(diào)控中發(fā)揮了重要作用。近年來相關(guān)研究表明hMOF蛋白在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要角色,目前經(jīng)研究證實(shí)表明,在乳腺癌,腦膠質(zhì)瘤等hMOF蛋白的表達(dá)較正常組織明顯下降。子宮內(nèi)膜癌是女性常見的生殖系統(tǒng)第二位惡性腫瘤,近年來子宮內(nèi)膜癌在全世界內(nèi)發(fā)病率呈上升趨勢(shì),嚴(yán)重威脅目前對(duì)于女性健康,其發(fā)病機(jī)制的研究仍不十分清楚,對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病是否有組蛋白乙?；?hMOF表達(dá)的異常有關(guān),目前尚無報(bào)道,本文結(jié)合患者的臨床數(shù)據(jù),擬探究hMOF蛋白與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及材料

選取吉林大學(xué)第一醫(yī)院病理科2008年3月-2010年12月間58例子宮內(nèi)膜癌(病理類型皆為子宮內(nèi)膜樣腺癌）及38例癌旁組織,臨床病理分期根據(jù)參照FIGO(2000）標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ期22例,Ⅱ期20例,Ⅲ期9例,Ⅳ期7例,組織分化程度根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn),子宮內(nèi)膜癌G1:高分化20例,G2:中分化18例,G3:低分化20例。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

hMOF蛋白一抗為:Bethyl公司生產(chǎn)的hMOF蛋白多克隆抗體(產(chǎn)品編號(hào):IHC-00497）;一抗稀釋比例1∶250;組織抗原修復(fù)方式:枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0）內(nèi),高壓煮沸1分鐘,并置于4°孵育過夜,剩余步驟參照S試劑盒說明書進(jìn)行。用PBS替換多克隆一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果觀察和判定

陽(yáng)性結(jié)果為隨機(jī)選取4個(gè)高倍鏡下細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色染顆粒沉著,與背景有明顯差別。根據(jù)染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞比率雙評(píng)半定量法進(jìn)行評(píng)分 :A:陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜10%為0分;10-30%為1分;31-50%為2分;51-75%為3分;＞75%為 4分;B:據(jù)切片染色程度進(jìn)行評(píng)分:未染色為0分,淺黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分。最后據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞率的得分與染色程度得分相乘作為結(jié)果進(jìn)行判定,0分定為陰性(-）,1-4分為弱陽(yáng)性(+）,5-8分為陽(yáng)性(++）,9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++）。判定結(jié)果由兩位具有經(jīng)驗(yàn)的臨床病理醫(yī)師分別判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

多組資料的單因素方差分析、Fisher檢驗(yàn)應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果

hMOF蛋白免疫組織化學(xué)結(jié)果,hMOF蛋白主要定位在細(xì)胞核內(nèi),58例患者中,23例表達(dá)為陰性(-）或弱陽(yáng)性(+）,癌旁正常組織中僅有5例表達(dá)為陰性或弱陽(yáng)性。hMOF蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)較其癌旁組織組織明顯減少,兩者具有顯著差異,(P＜0.05。見表1）。通過hMOF蛋白的表達(dá)與患者臨床資料分析發(fā)現(xiàn):hMOF蛋白的表達(dá)與患者年齡無顯著差異性(P＞0.05,見表2）,在FIGO分期中,隨著分期的不同差異越顯著,Ⅲ-Ⅳ期患者與I期患者和Ⅱ期比較hMOF蛋白的表達(dá)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,見表2）,在低分化的子宮內(nèi)膜癌組織中hMOF蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率明顯低于中分化和高分化的子宮內(nèi)膜癌組織,兩兩比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P＜0.05,見表2）。

表1 hMOF蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)情況

表2 hMOF蛋白表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床特點(diǎn)的分析

3 討論

現(xiàn)普遍認(rèn)為癌癥是在多種病因作用下的一種遺傳和表觀遺傳的疾病,由于絕大多數(shù)的表觀遺傳在癌癥的變化是可逆轉(zhuǎn)的,所以近年來表觀遺傳學(xué)研究是遺傳學(xué)家研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。所謂表觀遺傳學(xué)是在沒有DNA突變的情況下組蛋白(Histone）的修飾變化引起某些癌基因和抑癌基因的功能變化,從而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生和發(fā)展。目前組蛋白(Histone）的修飾主要包括:乙?；?、甲基化、磷酸化等。hMOF是組蛋白乙?；易錗YST的MSL關(guān)鍵成分,作用于組蛋白4第16賴氨酸(H4K16）,它在DNA的轉(zhuǎn)錄、DNA的修復(fù)及DNA的復(fù)制和重組中發(fā)揮了重要作用[2-4],Frega[5]等研究發(fā)現(xiàn)在癌細(xì)胞株及原發(fā)惡性腫瘤中組蛋白4的第16賴氨酸(H4K16）和組蛋白4第20賴氨酸甲基化的表達(dá)水平較正常細(xì)胞明顯下降,并同時(shí)發(fā)現(xiàn)其減少發(fā)生于DNA重復(fù)區(qū)域;Ste fan[6]等在對(duì)乳腺癌和成神經(jīng)細(xì)胞瘤患者的研究顯示hMOF的mRNA及蛋白在乳腺癌與成神經(jīng)細(xì)胞瘤患者的表達(dá)水平均較相應(yīng)正常組織明顯下降,同時(shí)在有淋巴及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、組織分化較差的患者的hMOF蛋白及mRNA的表達(dá)水平較無淋巴及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、組織分化較好的患者低,通過長(zhǎng)期的跟蹤隨訪發(fā)現(xiàn)hMOF蛋白及mRNA低表達(dá)患者的總體生存率明顯降低,其認(rèn)為hMOF蛋白的表達(dá)水平可作為一個(gè)判斷患者預(yù)后的一個(gè)生物標(biāo)志。

圖1 hMOF蛋白在子內(nèi)膜癌的表達(dá):高分化(A）、中分化(B）、低分化(C）,D-F為癌旁正常組織(×200）

近年來表觀遺傳研究發(fā)現(xiàn),hMOF蛋白為組蛋白乙?；傅闹匾拇呋瘉喕?其主要作用對(duì)象為組蛋白H4K16,Fraga[5]等通過hMOF蛋白和H4K16在正常組織和癌癥組織中研究發(fā)現(xiàn)二者在癌癥組織的表達(dá)明顯減少。子宮內(nèi)膜癌(carcinoma of endometrium）是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的癌變,其絕大多數(shù)為腺癌,本文討論的所有標(biāo)本的病理組織類型是是子宮內(nèi)膜腺癌。為女性生殖器三大惡性腫瘤之一,多見于絕經(jīng)后的女性,高發(fā)年齡為58-61歲,約占女性癌癥總數(shù)的7%,占女性生殖器官惡性腫瘤的20-30%,近年來發(fā)病率有上升的趨勢(shì),其發(fā)病率趨于接近甚至超過宮頸癌[7],在美國(guó),子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道最常見的惡性腫瘤,子宮內(nèi)膜癌中75%是子宮內(nèi)膜腺癌,其發(fā)生是在多種條件下由正常子宮內(nèi)膜、復(fù)雜性增生、不典型增生、原位癌直至侵潤(rùn)性癌的一個(gè)漫長(zhǎng)的、復(fù)雜的過程。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),在初潮年齡較小、絕經(jīng)延遲、不孕不育、肥胖、高血壓、糖尿病和長(zhǎng)期服用雌激素等密切相關(guān),同時(shí)大約20%內(nèi)膜癌的患者有家族遺傳傾向。據(jù)估計(jì)在2008年大約有 40100新近此病被診斷,約 7470人死于此病[8]。子宮內(nèi)膜癌的主要治療手段仍是手術(shù)治療,根據(jù)患者的病理分級(jí)及具體情況給予術(shù)后放療、化療及激素治療(HRT,Hormone Replacement Therapy）,經(jīng)化療的患者總的生存期約13個(gè)月[9]。其臨床病理分期根據(jù)病理結(jié)果和臨床所見的FIGO(2009）分為I—Ⅳ期,同時(shí)子宮內(nèi)膜癌的WTO分級(jí)系統(tǒng)是根據(jù)組織在鏡下腺管的排列、細(xì)胞的異性程度以及核分裂的多少分為高分化(G1）、中分化(G2）、低分化(G3）三級(jí).近年來其發(fā)病率上升趨勢(shì)較為明顯,目前對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的患者主要治療手段為手術(shù)治療的基礎(chǔ)上根據(jù)患者的耐受情況和組織病理學(xué)分級(jí)予以化療或者放療,但長(zhǎng)期生存率未明顯改善[10]。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示在hMOF蛋白在23例子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)較癌旁組織明顯下降(P=0.005＜0.05）,同時(shí)在分化不一的子宮內(nèi)膜癌組織表達(dá)中,G1有15%的表達(dá)明顯減少、G2有44%的減少、G3有60%的減少,P值為0.013,具有顯著差異,在臨床病理分期Ⅲ-Ⅳ期(68.8%）的患者表達(dá)較Ⅱ期(40%）和Ⅰ期(18.1%）患者明顯下調(diào),P值0.007具有顯著差異。同時(shí),在有淋巴及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中hMOF蛋白的表達(dá)較無轉(zhuǎn)移的患者表達(dá)也明顯減少這與Stefan[6]等研究結(jié)果相同。提示hMOF蛋白在組織分化程度、臨床分期及淋巴及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與否的表達(dá)水平具有明顯差異,而組織分化程度及淋巴和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移又直接影響到了患者對(duì)治療的反應(yīng)和長(zhǎng)期的生存率。雖然目前hMOF蛋白對(duì)于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的具體機(jī)制尚不清楚,現(xiàn)有研究資料和本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果可以推測(cè)可能與hMOF蛋白參與子宮內(nèi)膜的組蛋白的乙?；惓Ｏ嚓P(guān),但需進(jìn)一步研究證實(shí),從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們認(rèn)為hMOF蛋白可以作為一個(gè)判斷疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后的分子指標(biāo)。

[1]S Rea,et al.Male absent on the first(MOF）:from flies to humans[J].Oncogene,2007,26:5385.

[2]Eberharter A,Becker PB.Histon acetylation:a swtich between repressive and permissive chromatin.Second in review series on chromatin dynamic[J].EMBO Rep,2002,3:224.

[3]Carrozza MJ,Utley RT,Workman JL,et al.The diverse functions of histone acetyltransferase complexs[J].Trend Genet,2003,19:321.

[4]Yamada T,Mizuno K,Hirota K,et al.(Role of Histone acetylation and chromatin remodeling factor in a meiotic recombination hotspot[J].EMBO J,2004,23:1792.

[5]Fraga MF,Ballestar E,Villar-Garea A,et al.Loss of acetylation at Lys16 and trimethylation at Lys20 of histone H4 is a common hallmarker of hunman cancer[J].Nat Genet,2005,37:391.

[6]Stefan Pfister,Setphen Rea,Mikko Taipale,et al.The histone acetyltrsanferase hMOF is frequently downregulated in primarybreast carcinoma and medulloblastoma[J].Int J Cancer,2008,22:1207.

[7]豐有吉,沈 鏗,主編.婦產(chǎn)科學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:334-338.

[8]Jemal A,Siegel R,Ward E,et al.Cancer statistics,2008[J].CA Cancer J Clin,2008,58(2）:71.

[9]Benedet JL,Bender H,Jones H,et al.FIGO staging classifications and clinical practice guidlines in the management of gynecologic cancers.FIGO Comittee on Gynocologic Oncology[J].Int J Gynaecol Obstet,2000,70:209.

[10]Benjamin E,Greer,Nedeen R,et al.NCCN Guidlines Version 1.2011 Endometrial Carcinoma.National Comprehensive Cancer Network,2011.