骨巨細(xì)胞瘤組織中MMP-2、E-cadherin的表達(dá)變化及意義

劉煥彩，劉金蘭，孟曉光，陳燕春

(1濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濰坊261031;2濰坊醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室)

骨巨細(xì)胞瘤(GCT)是一種具有潛在惡性的溶骨性腫瘤，術(shù)后復(fù)發(fā)率20% ～50%，1% ～6%的患者可以發(fā)生肺轉(zhuǎn)移［1］，少數(shù)患者甚至可發(fā)生肉瘤變。目前病理學(xué)上一直沿用的Jeffe組織學(xué)分級方法已不能準(zhǔn)確預(yù)測骨巨細(xì)胞瘤術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況?；|(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)是人體內(nèi)降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶類，參與腫瘤演進(jìn)等眾多生理和病理過程，且其表達(dá)水平與人體某些惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù) 發(fā) 密 切 相 關(guān)［2，3］。 上 皮 型 鈣 黏 附 蛋 白(E-cadherin)介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附功能紊亂是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的前提條件之一。本研究對42例骨巨細(xì)胞瘤組織標(biāo)本中的MMP-2和E-cadherin進(jìn)行了檢測，觀察其表達(dá)變化，為骨巨細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院和濰坊市人民醫(yī)院2000～2008年收治的骨巨細(xì)胞瘤患者42例，男22例，女20例;年齡17～58歲。均行手術(shù)治療并留取腫瘤組織標(biāo)本。本組腫瘤按照J(rèn)effe組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ級18例、Ⅱ級15例、Ⅲ級9例。術(shù)后復(fù)發(fā)15例，未復(fù)發(fā)27例。發(fā)生轉(zhuǎn)移8例，未轉(zhuǎn)移34例。

1．2 MMP-2、E-cadherin 檢測 腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片(厚5 μm)。采用免疫組化SP法染色，以PBS代替一抗作陰性對照。MMP-2主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)，以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒樣物質(zhì)為陽性。E-cadherin為跨膜糖蛋白，以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色樣物質(zhì)為陽性。高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野觀察細(xì)胞數(shù)不少于200個(gè)，按陽性細(xì)胞所占百分比及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判定:①按切片中細(xì)胞著色深淺計(jì)分:細(xì)胞無顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②按陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比計(jì)分:陽性細(xì)胞≤5%為0分、6% ～25%為1分、26% ～50%為2分、＞50%為3分。上述兩項(xiàng)評分的乘積0～1判為陰性(-)、2～3為弱陽性(+)、4～5為陽性(++)、≥6為陽強(qiáng)性(+++);+、++、+++視為陽性。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比用χ2檢驗(yàn)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 MMP-2在骨巨細(xì)胞瘤組織中的表達(dá) 在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級骨巨細(xì)胞瘤中MMP-2呈陽性者分別為6、9、7例，Ⅱ +Ⅲ級與Ⅰ級相比，P ＜0．05;在復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)骨巨細(xì)胞瘤中MMP-2呈陽性者分別為13、10例，兩者相比，P＜0．05;在轉(zhuǎn)移、未轉(zhuǎn)移骨巨細(xì)胞瘤中MMP-2呈陽性者分別為7、14例，兩者相比，P＜0．05。

2．2 E-cadherin在骨巨細(xì)胞瘤中的表達(dá) 在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級骨巨細(xì)胞瘤中E-cadherin呈陽性者分別為17、10、4例，Ⅱ + Ⅲ級與Ⅰ級相比，P ＜0．05;在復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)骨巨細(xì)胞瘤中E-cadherin呈陽性者分別為6、20例，兩者相比，P ＜0．05;在轉(zhuǎn)移、未轉(zhuǎn)移骨巨細(xì)胞瘤中E-cadherin呈陽性者分別為2、25例，兩者相比，P ＜0．05。

3 討論

腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜、多步驟的腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞間相互作用的連續(xù)過程，包括基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解、細(xì)胞間黏附的改變、腫瘤細(xì)胞的移出及形成轉(zhuǎn)移灶等過程。在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中，由于腫瘤細(xì)胞要多次穿越基底膜并侵入周圍組織，因此對細(xì)胞外基質(zhì)的降解是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一。細(xì)胞外基質(zhì)主要由Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、纖維連接蛋白(FN)等組成，這些成分均為MMP-2的作用底物［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ+Ⅲ級骨巨細(xì)胞瘤組織中MMP-2陽性者較Ⅰ級多，但Ⅱ、Ⅲ級間無差異。說明MMP-2的表達(dá)與Jaffe組織學(xué)分級有一定的相關(guān)性，但并不完全平行一致，進(jìn)一步證實(shí)Jaffe組織學(xué)三級標(biāo)準(zhǔn)不能準(zhǔn)確反映骨巨細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為。骨巨細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)者，MMP-2陽性表達(dá)率明顯高于未復(fù)發(fā)和未轉(zhuǎn)移者，提示MMP-2過表達(dá)與骨巨細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)密切相關(guān)。Hofmann等［5］研究證實(shí)，MMP-2在黑色素瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要的作用;Ruokolainen等［6］研究證實(shí)，頭頸部鱗癌患者瘤組織中MMP-2的表達(dá)與腫瘤的復(fù)發(fā)密切相關(guān)。腫瘤細(xì)胞通過分泌MMP-2降解腫瘤細(xì)胞周圍的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

細(xì)胞黏附可分為細(xì)胞—細(xì)胞黏附和細(xì)胞—基質(zhì)黏附兩大類。前者又可根據(jù)參與細(xì)胞的類型不同分為同質(zhì)黏附和異質(zhì)黏附。同一種類型細(xì)胞間的黏附稱同質(zhì)黏附，兩種以上細(xì)胞間的黏附稱異質(zhì)黏附。E-cadherin是一類主要介導(dǎo)細(xì)胞間同質(zhì)黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，是維護(hù)上皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整性及極性的重要分子［7］。如果E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞間黏附功能發(fā)生紊亂，將導(dǎo)致細(xì)胞黏附力減弱、細(xì)胞形態(tài)(成纖維細(xì)胞樣)改變、上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、細(xì)胞移動(dòng)性增強(qiáng)等生物學(xué)改變。這在腫瘤的病理過程將導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的無限制性生長，向周圍組織浸潤及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，Ⅱ+Ⅲ級骨巨細(xì)胞瘤組織中E-cadherin陽性者較Ⅰ級少，但Ⅱ、Ⅲ級間無差異。說明 E-cadherin的表達(dá)與Jaffe組織學(xué)分級有一定的相關(guān)性，但并不完全平行一致，也表明骨巨細(xì)胞瘤的Ⅰ級與Ⅱ、Ⅲ級瘤之間有本質(zhì)的區(qū)別，Ⅱ、Ⅲ級骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞黏著降低，更容易復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，應(yīng)將Ⅱ和Ⅲ級視為惡性來看待。骨巨細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)者，E-cadherin陽性表達(dá)率明顯低于未復(fù)發(fā)和未轉(zhuǎn)移者。提示E-cadherin低表達(dá)與骨巨細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)密切相關(guān)。E-cadherin表達(dá)下調(diào)伴隨著腫瘤細(xì)胞的去分化、極性消失、浸潤能力增強(qiáng)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移力增強(qiáng)，且預(yù)示患者預(yù)后不良［8，9］。

綜上所述，骨巨細(xì)胞瘤組織中 MMP-2、E-cadherin的表達(dá)發(fā)生變化，這種變化與腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)密切相關(guān)，對其進(jìn)行檢測有助于骨巨細(xì)胞瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后的判斷。

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