淺談中藥鑒別依據(jù)及方法

王雪蓮

一、色譜法

色譜法又稱層析法，是利用中藥化學(xué)成分在流動相與固定相中的分配系數(shù)差異而使各組分分離，并根據(jù)分離所得色譜圖進(jìn)行分析鑒定的一種方法。包括:薄層色譜法(TLC)、薄層掃描法(TLCS)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GCMS)等。色譜法是20世紀(jì)初產(chǎn)生，于60年代開始用于中藥分析，既能對中藥所含化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，又能對成分進(jìn)行定量分析，經(jīng)逐步完善最后列入1977年版中國藥典，且在以后各版藥典的中藥和成方制劑中的應(yīng)用比例迅速上升，成為中藥鑒別最主要的方法之一。

二、光譜法

鑒別中藥的原理:選擇某一波段波長，以此通過中藥的粉末或提取液，測定中藥對這一波段波長的吸收并記錄其吸收光譜。光譜法包括:紫外光譜法(UV)、導(dǎo)數(shù)光譜法(DS)、紅外光譜法(IR)、熒光光譜法(FP)、核磁共振波譜法(NMR)、質(zhì)譜法(MS)。

三、色譜-光譜聯(lián)用分析法

色譜-光譜聯(lián)用分析法是將色譜和光譜分析儀器聯(lián)用，通過對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的綜合分析，用以評價中藥質(zhì)量的一種方法。本法集中了色譜技術(shù)高分離效能和光譜技術(shù)高鑒別能力的特點(diǎn)，廣泛用于中藥化學(xué)成分或組分的分離與含量測定。常用的方法有色譜-質(zhì)譜、光譜-質(zhì)譜和質(zhì)譜-質(zhì)譜等。如:氣相-質(zhì)譜(GCMS)、高效液相-質(zhì)譜(HPLC-MS)、紅外-質(zhì)譜(IR-MS)和質(zhì)譜-質(zhì)譜(MS-MS)等。

四、中藥指紋圖譜鑒定技術(shù)

中藥指紋圖譜鑒定技術(shù)是借用了法醫(yī)學(xué)的指紋鑒定概念，但卻不是簡單的概念重復(fù)。中藥指紋圖譜鑒定是指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后，將中藥中的部分化學(xué)信息(已知的活性成分、已知的非活性成分、部分未知成分)，通過一定的方法(TLC、HPLC、GC、IR 、UV)和手段(譜圖)進(jìn)行表達(dá)，并對其進(jìn)行計算、分析、評價，以技術(shù)參數(shù)和指紋特征加以說明的過程。

五、熱分析法

熱分析法是研究樣品及參比物在相同環(huán)境下等速加溫時，兩者的溫度與時間或與加熱溫度的變化關(guān)系的方法。分析的結(jié)果用熱譜圖表示，比較兩者熱圖譜的差異，以達(dá)鑒別中藥的目的。按分析內(nèi)容分為:熱重量法(熱量法TG)、差示熱量分析法(差熱分析法DTA)、差示掃描量熱法(差動法DSC)。在中藥的鑒別分析中，差熱分析法最為常用。

六、分子生物學(xué)技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR):是1985年發(fā)明的一種模擬自然DNA復(fù)制過程的快速體外DNA片段擴(kuò)增技術(shù)，又稱無細(xì)胞分子克隆技術(shù)，獲得1993年諾貝爾化學(xué)獎。該技術(shù)的問世，為中藥鑒別提供了一條新途徑。PCR能將藥材中提取的痕量的DNA擴(kuò)增到足以供檢測和分析的數(shù)量。在PCR的基礎(chǔ)上延伸出的鑒定方法有很多種，如 RFLP、RAPD、AP-PCR、AFLP、SSR、DNA測序等。其中，隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(random amplified polymorphic DNA ，RAPD)最為普通，它無需專門設(shè)計擴(kuò)增反應(yīng)引物，也無須預(yù)先知道被研究生物基因組的核苷酸序列，尤其是在目前絕大多數(shù)動植物中藥沒有基因組DNA資料的情況下，RAPD技術(shù)有很強(qiáng)的通用性，它最適于種下居群(品種)間的差異，也適用于種間和個體間。DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)屬于直接分析生物的基因形的方法，與傳統(tǒng)的方法相比，具有快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。反映的是中藥樣品之間的DNA水平差異，即最基本的遺傳差異，不受中藥基源物種生長、發(fā)育、生態(tài)、環(huán)境、采收、加工、貯藏等因素影響，因而能給出樣品真?zhèn)巫罹_的直接判定。但因一般的中藥提取(尤其是有機(jī)溶劑提取)物中極少有DNA存在，所以DNA分子標(biāo)記在中成藥的應(yīng)用上有一定限制。僅用于有原藥材存在或被提取物中有DNA存在的情況。

七、中藥生物效應(yīng)鑒定法

在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，以中藥的歸經(jīng)、功能主治為線索，通過高效液相、液-質(zhì)聯(lián)用、氣-質(zhì)聯(lián)用等現(xiàn)代分離分析手段和放射性配體，受體結(jié)合分析法研究中藥活性成分對機(jī)體生物分子(受體)的作用，在此基礎(chǔ)上建立國際承認(rèn)的中藥質(zhì)量評價、控制方法，方法的表征體現(xiàn)為有效成分含量或有效成分半數(shù)有效濃度EC50值、半效抑制濃度IC50值、表觀解離常數(shù)Ki值。

八、化學(xué)模式識別法

模式識別在六十年代末被引入到化學(xué)領(lǐng)域。它基于一個十分直觀的基本假設(shè)，即“物以類聚”:同類或相似的“樣本”間的距離應(yīng)較近，不同類的“樣本”間的距離應(yīng)較遠(yuǎn)，這樣就可以根據(jù)各樣本間的距離或距離的函數(shù)來判別、分類，并利用分類結(jié)果預(yù)報未知。模式識別法中的主成分分析法(PCA)、SIMCA分類法、貝葉斯(Bayes)判別法、聚類分析法(CA)、模糊動態(tài)聚類分析法、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)(ANN)等，另外還有計算機(jī)圖像分析技術(shù)(CIA)、導(dǎo)數(shù)譜線組法(DSUVG)等，這些方法通常是根據(jù)采集到的藥材總成分提取物的大量光譜或色譜數(shù)據(jù)以及某些經(jīng)量化后的指標(biāo)，運(yùn)用計算機(jī)對這些數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，去粗取精，去偽存真，從數(shù)據(jù)分析中獲取能用于藥材分析鑒別的有用信息，然后以計算機(jī)代替人對藥材進(jìn)行分析、鑒別、判斷，進(jìn)行分類和鑒別真?zhèn)巍?/p>

結(jié)論:

中藥是祖國藥學(xué)的寶貴遺產(chǎn)和財富，也是中藥工作者應(yīng)繼承和發(fā)掘的基礎(chǔ)。隨著更多新方法、新技術(shù)的發(fā)現(xiàn)、發(fā)展和使用，使中藥鑒定的方法不斷創(chuàng)新，各種新的鑒別手段和方法的出現(xiàn)，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)中藥鑒定方法和技術(shù)的不足，使中藥品種鑒定與質(zhì)量評價從樸素的認(rèn)識論向客觀化、科學(xué)化的方法論方向邁出了關(guān)鍵的一步，中藥鑒定正朝著標(biāo)準(zhǔn)化、科學(xué)化和信息化的方向穩(wěn)步發(fā)展。

1 陳惠紅.幾種全草類中藥及其混淆品的鑒別.淮海醫(yī)學(xué)，2009，3:258-258

2 張建忠，欒麗，王艷春.淺談中藥的火試法鑒別.中國實(shí)用醫(yī)藥，2009，5"213-213

3 徐維成.幾種中藥鑒別方法.中原醫(yī)刊，1982:04.

4 張漢明，許鐵峰，秦路平，等.中藥鑒別研究的發(fā)展和現(xiàn)代鑒別技術(shù)介紹，2000，22(1)R2.