山羊傳染性胸膜肺炎病原及診斷方法的研究進(jìn)展

劉 遠(yuǎn)，林仕欣，李文楊

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福州 350013）

山羊傳染性胸膜肺炎（contagious caprine pleruopneumonia，CCPP）是由山羊支原體山羊肺炎亞種（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumonia，Mccp）引起的山羊獨(dú)有的一種急性或慢性呼吸道傳染病，以纖維素性胸膜肺炎為主要特征［1］。該支原體最早由MacOwan和Minette分離得到，被感染羊群無(wú)明顯年齡和性別差異，發(fā)病率和死亡率均較高，廣泛流行于非洲和亞洲養(yǎng)羊國(guó)家，危害極大，已經(jīng)被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列入重要疾病目錄［2］。盡管CCPP的發(fā)生至今已有近百年的歷史，但對(duì)其病原的認(rèn)識(shí)一直比較混亂。國(guó)內(nèi)在分離到Mccp以前，長(zhǎng)期認(rèn)為絲狀支原體山羊亞種（M.mycoides subsp.Capri，Mmc）才是該病的病原［3］，除此之外，綿羊肺炎支原體（M.ovipneumoniae，Mo）感染山羊后也能引起類似山羊傳染性胸膜肺炎的臨床癥狀，經(jīng)常被誤認(rèn)為是CCPP的病原之一［4］。造成這種病原認(rèn)識(shí)不清的主要原因是由于支原體分離培養(yǎng)非常困難，且臨床上又常可能被其它呼吸道疾病干擾而最終不能確診［5］。長(zhǎng)期以來(lái)，內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅、四川、湖南、福建等地均有該病暴發(fā)的報(bào)道［6］，但各地病原分離試驗(yàn)也證實(shí)了各地引起該病的病原差異性和復(fù)雜性。

1 病原

1.1 絲狀支原體山羊亞種

在國(guó)內(nèi)，絲狀支原體山羊亞種長(zhǎng)期被當(dāng)作是山羊傳染性胸膜肺炎的病原。王棟等最早用血清學(xué)方法鑒定了國(guó)內(nèi)4株分離自傳染性胸膜肺炎山羊的支原體，并認(rèn)為Mmc在我國(guó)廣泛存在［3］。一般認(rèn)為Mmc不感染綿羊，加之長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)支原體基因組序列研究的缺乏，導(dǎo)致國(guó)內(nèi)其它研究者也認(rèn)為該支原體是引起我國(guó)傳染性胸膜肺炎的病原［7］。

隨著支原體研究的深入，逐漸形成了直接根據(jù)支原體基因組序列在進(jìn)化上的關(guān)系進(jìn)行支原體的分類。李媛等應(yīng)用序列分析等手段對(duì)引起國(guó)內(nèi)傳染性胸膜肺炎病原的支原體進(jìn)行了分子特征研究，結(jié)果認(rèn)為該病原應(yīng)歸為Mccp［8］。雖然Mmc并不是真CCPP的病原，但可引起臨床上類似于CCPP的胸膜肺炎，感染山羊高熱、不食，解剖可見(jiàn)損傷主要在肺部、胸膜和心包。肺小葉不同程度肝樣變，小葉間隔擴(kuò)大。胸膜常被滲出性纖維覆蓋并與膈膜、心包和胸壁粘連。病變器官的淋巴結(jié)，尤其支氣管、縱膈、下頜及咽后淋巴結(jié)增大、水腫、出血。

1.2 綿羊肺炎支原體

綿羊肺炎支原體是引起綿羊肺炎支原體病的病原，以咳嗽、喘氣、漸進(jìn)性消瘦以及肺間質(zhì)增生性炎癥為特征的慢性呼吸道疾病。該支原體最先由Mackay于1963年從發(fā)生肺炎的綿羊肺中分離到。隨后Cottew在澳大利亞綿羊的病肺中也發(fā)現(xiàn)該霉形體，并由Carmichael等證明了這種霉形體的致病性，建議將其命名為MO［9］。

MO還能感染山羊，最早是Linvingston等（1979）從患肺炎西班牙和安哥拉山羊中分離。我國(guó)王棟等1991年就報(bào)道了從疑為山羊傳染性胸膜肺炎的病料中分離到12株MO和1株精氨酸霉形體，通過(guò)人工感染試驗(yàn)，證明了對(duì)山羊的致病性，同年鄧光明等也報(bào)道了MO是甘肅省華池縣山羊傳染性胸膜肺炎的病原［4］。楊發(fā)龍等從四川省樂(lè)至縣發(fā)生胸膜肺炎性傳染病的山羊群中檢測(cè)到了綿羊肺炎支原體，且未發(fā)現(xiàn)絲狀支原體簇成員，表明綿羊肺炎支原體是引起山羊群發(fā)生胸膜肺炎的病原，同時(shí)說(shuō)明綿羊肺炎支原體仍然是目前山羊支原體性肺炎的重要病原之一［10］。

1.3 山羊支原體山羊肺炎亞種

山羊支原體山羊肺炎亞種（M.capri.ssp.capripneumoniae，Mccp）最早是MacOwan等1976年在肯尼亞分離出來(lái)的，原稱生物型F38（模式株）。Mccp只感染山羊，現(xiàn)已被國(guó)際公認(rèn)為山羊傳染性胸膜肺炎的唯一病原。但因?yàn)檫@種支原體在體外極難培養(yǎng)，目前分離到病原的不多。我國(guó)辛九慶等從患肺炎山羊分離到一株支原體，經(jīng)分子生物學(xué)試驗(yàn)初步鑒定為Mccp，這是我國(guó)首次報(bào)道有Mccp的存在［11］。CCPP特征性病變僅限于胸腔，單純Mccp感染不伴隨其它器官的損害。CCPP典型病例表現(xiàn)為極度高熱（41～43℃），感染羊無(wú)年齡性別差異，懷孕羊易發(fā)生流產(chǎn)。高熱2～3 d，呼吸加速，顯得痛苦，有時(shí)還發(fā)出呼嚕聲，持續(xù)性劇烈咳嗽。最后山羊不能運(yùn)動(dòng)，兩前肢分開(kāi)站立，脖子僵硬前伸，有時(shí)嘴里不斷流出涎水。死后剖檢顯示胸腔纖維蛋白性滲出（稻草色），肺部伴有大范圍的肝樣變和纖維性胸膜炎。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷

一般而言，根據(jù)病程和臨床癥狀，可分為最急性、急性和慢性3種類型。最急性病初體溫增高，可達(dá)41～42℃，極度萎頓，食欲廢絕，呼吸急促而有痛苦的鳴叫，數(shù)小時(shí)后出現(xiàn)肺炎癥狀，呼吸困難，咳嗽，并流漿液性帶血鼻液，肺部叩診呈濁音或?qū)嵰?，?tīng)診肺泡呼吸音減弱、消失或呈捻發(fā)音。1～2 d后病羊臥地不起，呼吸極度困難并伴有全身顫動(dòng)，粘膜高度充血發(fā)紺，最后衰弱，窒息死亡，病程一般為4～5 d。急性最常見(jiàn)，病初體溫升高，繼之出現(xiàn)短而濕的咳嗽，伴有漿性鼻漏，4～5 d后一側(cè)胸膜出現(xiàn)肺炎癥狀，高熱稽留不退，食欲銳減，呼吸困難和痛苦呻吟，腰背拱起，多數(shù)懷孕母羊發(fā)生流產(chǎn)，最后病羊極度萎頓衰弱而死，幸而不死者轉(zhuǎn)為慢性。慢性多見(jiàn)于夏季，病程可維持2個(gè)月以上，病羊全身癥狀輕微，間有咳嗽和腹瀉，被毛粗亂無(wú)光。

2.2 血清學(xué)診斷

根據(jù)不同支原體株在抗原結(jié)構(gòu)上的差異，可以用血清學(xué)方法進(jìn)行支原體疾病的診斷。目前，該病的血清學(xué)診斷方法有生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)、代謝抑制試驗(yàn)、表面熒光抗體試驗(yàn)（間接法）、直接補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（微量法）、間接血凝試驗(yàn)（IHA）、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。然而，血清學(xué)方法的特異性較低，且支原體之間有交叉反應(yīng)。近年來(lái)微量間接血凝試驗(yàn)（MIHA）常用來(lái)進(jìn)行該疾病的流行病學(xué)調(diào)查，其原理是將可溶性抗原（或抗體）吸附于與免疫無(wú)關(guān)的小顆粒（載體）表面，此吸附抗原（或抗體）的載體顆粒在有電解質(zhì)存在的適宜條件下可與相應(yīng)的抗體（或抗原）發(fā)生凝聚反應(yīng)，該方法操作簡(jiǎn)便，所需時(shí)間較少，但作為病原的確定靈敏性不高［12］。

2.3 分子生物學(xué)診斷

分子生物學(xué)的發(fā)展，一方面提供了支原體在基因組層面的進(jìn)化關(guān)系，為羊傳染性胸膜肺炎病原的確定提供了理論依據(jù)；另一方面，可以利用PCR技術(shù)檢測(cè)病原的部分保守序列對(duì)疾病的病原進(jìn)行確診。李媛等（2007）應(yīng)用序列分析對(duì)引起國(guó)內(nèi)CCPP病原的支原體進(jìn)行了分子特征研究，結(jié)果認(rèn)為該病原應(yīng)該歸為Mccp。同時(shí)，張莉等、儲(chǔ)岳峰等分別參照Mo、Mmc、Mccp標(biāo)準(zhǔn)株序列設(shè)計(jì)引物，建立了各病原相應(yīng)的PCR快速診斷方法［12-14］。另外，鑒于臨床上的復(fù)雜性，儲(chǔ)岳峰等、宋勤葉等分別建立了可以同時(shí)特異性檢測(cè)Mmc和Mo的雙重PCR方法，大大提高了診斷效率，為該病的防治提供了有效的技術(shù)支持［15-16］。

3 研究展望

CCPP的流行早已為國(guó)內(nèi)廣大獸醫(yī)工作者共識(shí)，但直到2007年才有1例Mccp被分離成功和鑒定的報(bào)道，這與中國(guó)生產(chǎn)實(shí)際中CCPP的流行情況存在極大的差異。目前，已知的3種支原體均能引起國(guó)內(nèi)山羊群體羊傳染性胸膜肺炎病，僅通過(guò)臨床癥狀和病理觀察難以區(qū)分臨床發(fā)生的羊支原體肺炎是由哪種病原引起，確診需要進(jìn)行支原體分離鑒定，但受生長(zhǎng)速度慢、培養(yǎng)困難等諸多因素限制，支原體分離率較低。國(guó)內(nèi)外對(duì)CCPP的研究將仍然集中在病原的確定及快速診斷方法的建立兩個(gè)方面。

雖然分離到的3種病原的血清學(xué)特征存在明顯的交叉反應(yīng)，然而三者的抗原特性、藥敏性等方面均存在較大差別。因此，利用分子生物學(xué)技術(shù)，根據(jù)支原體基因組序列特征研究各支原體株在進(jìn)化上的關(guān)系，并以此為依據(jù)進(jìn)行支原體的分類，為羊傳染性胸膜肺炎病原的確定提供科學(xué)依據(jù)，是科學(xué)防治該疾病的重點(diǎn)方向之一。Mccp株的發(fā)現(xiàn)表明該支原體也可能是我國(guó)羊支原體肺炎的優(yōu)勢(shì)病原之一，且臨床感染情況更為復(fù)雜。因此，引進(jìn)Mccp標(biāo)準(zhǔn)株，建立Mccp-Mmc-Mo三重PCR技術(shù)，是下一步我國(guó)羊支原體肺炎病原快速診斷技術(shù)的另一重點(diǎn)方向［15］。

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