科技進展

樹突狀細胞對豬鏈球菌的應答特性

對豬來說鏈球菌是一個重要的致病菌，可引起豬的敗血癥和腦膜炎。然而，目前還不清楚宿主對鏈球菌的先天、后天免疫應答及鏈球菌對宿主免疫應答的抵抗作用。

在本研究中首次評估了鏈球菌與骨髓中提取的樹突狀細胞 （DC）相互作用的能力，另外，鏈球菌莢膜多糖調節(jié)DC分泌細胞因子的作用也被評定。具有生物莢膜的豬鏈球菌可以抵御DC的吞噬，但是它可促進機體表達TLR2和TLR6以及促進 DC表達 IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12p40、TNF-α。 鏈球菌的莢膜多糖干擾DC的吞噬作用，如果沒有莢膜多糖的鏈球菌被吞入，很容易被DC分解。鏈球菌的細胞壁成分主要負責激活DC，因為莢膜多糖負突變型菌株誘導DC細胞因子的水平高于野生型菌株。莢膜多糖干擾DC的共刺激分子CD80/86和MHC-Ⅱ的表達。

我們研究得出鏈球菌與豬的DC相互作用，揭示了DC在宿主對2型鏈球菌的先天和獲得性免疫中起到重要的作用。

譯自：Lecours MP，Segura M，Lachance C，et al.Characterization of porcine dendritic cell response to Streptococcus suis.Vet Res， 2011， 42 （1） :72.

甘露寡糖調節(jié)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染豬的基因表達譜

通過研究對照組和甘露寡糖 （MOS）飼喂組實驗豬外周血單核細胞 （PBMC）和支氣管肺泡灌洗液細胞 （BALF）基因表達的特點（對照組和MOS飼喂組又分別分為兩組——感染PRRSV組和不感染PRRSV組，感染病毒組在感染病毒后7天采樣）。斷奶豬 （3周齡）飼喂分別含0%和0.2%MOS（Bio-Mos）的日糧，然后在5周齡時接種PRRSV（對照組進行假接種）。從細胞中提出總 RNA（3只豬/每個處理）。雙鏈cDNA擴增、標記，并進一步雜交豬基因組的Affymetrix基因芯片陣列，該基因芯片陣列由23937套探針組成，代表20201個基因。運用在R語言環(huán)境上的生物芯片數(shù)據(jù)和基因組數(shù)據(jù)分析軟件包進行微陣列數(shù)據(jù)分析 （BioConductor）。差異表達基因用limma分析，通過擬合混合線性模型相當于一個2×2因子方差分析。

飼喂MOS和PRRSV感染因素改變了PBMC和BALF細胞 （P＜0.05）幾千套探針基因的表達。MOS×PRRSV組實驗豬在飼喂MOS和PRRSV感染兩個因素作用下， PBMC（977基因探針上調，1128基因探針下調）比BALF（117基因探針上調，78基因探針下調）改變更多的免疫不相關基因探針表達。MOS×PRRSV組實驗豬的PBMC編碼炎性介質的免疫相關基因探針表達受影響 （P＜0.05）。在未感染的豬中，飼喂MOS的豬只 PBMC表達 IL-1α、IL-6、髓樣分化因子 88、TLR4、 MHCⅡ和 DDX58 增加 （P＜0.05）。

這就證明飼喂MOS可提高豬的抗病力，而且在感染后3天和7天可以很快增加白細胞的數(shù)量。在感染豬，MOS使PBMC表達 IL-1β、IL-6、IL-8、巨噬細胞炎性蛋白（MIP-1α、 MIP-1β）、 單核細胞趨化蛋白 （MCP-1）和 TLR4基因減少 （P＜0.05）。這個發(fā)現(xiàn)解釋了為什么飼用MOS組的感染PRRSV 7天后的豬只發(fā)燒癥狀能得以改善。

IL-1β、IL-6、MIP-1β、MCP-1和 TLR4基因表達被實時定量PCR檢測證實。MOS使感染豬的BALF細胞表達TLR4、MHCⅡ、補體系統(tǒng)相關基因下降，但是MHCI基因表達增加。

總之，MOS調節(jié)豬白細胞的免疫相關和免疫不相關基因的表達，也許能提供一個提高豬免疫力對抗感染的方法，避免免疫系統(tǒng)的應激。

譯自：Che TM， Johnson RW， Kelley KW，et al.Mannan oligosaccharide modulates gene expression profile in pigs experimentally infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus.J Anim Sci.2011 May 27.[Epub ahead of print]

用PCR方法在豬胴體中檢測豬帶絳蟲囊尾蚴

PCR檢測肌肉病變中豬帶絳蟲囊狀幼蟲DNA，對屠豬胴體肉品進行檢疫。在本研究中兩對引物 （TBR引物和Cox1引物）擴增兩個目的基因 （一個是大亞基rRNA基因；一個是細胞色素C氧化酶第Ⅰ亞基基因）用于檢測豬帶絳蟲。在豬囊蟲病檢測中陽性樣品TBR引物和Cox1引物可分別擴增出286 bp和984 bp的產物。在陰性樣品中沒有擴增出任何片段，因此認為這兩對引物非常特異。

總共225頭豬采樣檢測豬囊蟲病，其中在25頭豬的酮體中見到囊尾蚴包囊 （16個發(fā)育的包囊和9個退化的包囊）被確認為豬囊蟲病陽性病例，PCR檢測與上述眼觀檢查一致。其中有35個胴體的肌肉病變懷疑是豬囊蟲病，只有2個在PCR檢測中為陽性。對兩個引物的檢測限度進行了分析，TBR引物最低檢測量為10 pg囊狀幼蟲DNA，而Cox1引物最低檢測量為1 ng囊狀幼蟲DNA。

這個研究說明PCR方法是一個高效檢測囊蟲病豬肉的方法，對于排除疑似囊蟲病豬肉具有重要作用。

譯自：Sreedevi C， Hafeez M， Kumar PA，et al.PCR test for detecting Taenia solium cysticercosis in pig carcasses.Trop Anim Health Prod，2011 Jun 3.[Epub ahead of print]

中國南方典型豬瘟病毒遺傳多樣性和豬瘟病毒毒株正選擇分析

典型豬瘟病毒（CSFV）在世界范圍內導致高度傳染性疾病流行，給生豬產業(yè)造成巨大的經濟損失。目前一直缺乏中國南方地區(qū)CSFV的準確的基因分型。這項研究對2008～2010年分離到的中國南方地區(qū)家豬不同毒株的E2基因進行分析（14株豬瘟病毒）。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，所有的14株豬瘟病毒的基因聚在遺傳亞群1.1。在中國其他地區(qū)分離的豬瘟病毒與其不同，主要為基因2群。

此外，對作用于豬瘟病毒E（rns）和E2囊膜蛋白基因的正選擇壓力進行了評估，逐一分析了dN/dS率以確定特殊的密碼子多元化改變。

盡管沒有明顯證據(jù)顯示觀察到E（rns）基因的正選擇，但E2基因的兩個正選擇在編碼49和72氨基酸殘基位點被發(fā)現(xiàn)。我們的研究結果顯示，中國南部的一些地區(qū)目前主要流行1.1亞群豬瘟病毒，與中國豬瘟病毒C-株疫苗毒株相差較大。

此外，囊膜蛋白E2基因經過了陽性選擇，兩個陽性選擇位點被確定。了解分子流行病學和這些正選擇氨基酸位點的作用是非常重要的，可以幫助預測豬瘟病毒的毒力變化，促進疫苗開發(fā)和疾病控制。

譯自：Shen H， Pei J， Bai J， Zhao M，et al.Genetic diversity and positive selection analysis of classical swine fever virus isolates in south China.Virus Genes.2011 Jun 4.[Epub ahead of print]

桿狀病毒展示豬繁殖與呼吸綜合征病毒的GP3蛋白的免疫原性

豬繁殖與呼吸綜合征病毒 （PRRSV）是世界范圍內最為重要的豬病病原。PRRSV較小的包膜蛋白GP3在清除病毒感染和保護動物方面起著重要的作用。在這個研究中，一個重組的桿狀病毒 （BacSC-GP3）被構建，表達His6-tagged GP3，這個蛋白位于其包膜蛋白gp64的跨膜 （TM）和細胞質 （CT）域，免疫原性在仔豬和小鼠中進行評估。

His6-tagged GP3蛋白成功的展示在病毒粒子的表面，而且此病毒能感染Sf-9細胞。用BacSC-GP3免疫動物，體液免疫反應和淋巴細胞增殖反應高于商業(yè)滅活苗 （對仔豬免疫，效果比商業(yè)滅活苗稍微好一些；如果對小鼠免疫，則免疫效果顯著高于商業(yè)滅活苗）。這是首次研究GP3-桿狀病毒免疫原性，這為研發(fā)新的PRRSV疫苗提供新的策略。

譯自：Wang ZS,Xu XG,Liu HJ,et al.Immunogenicity of the envelope GP3 protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus displayed on baculovirus.Acta Virol， 2011， 55（2）:139-46.

日糧中鈣磷水平、植酸酶的添加對斷奶仔豬生長性能、骨的性狀、營養(yǎng)物質表觀消化率及礦物質、氮的利用率和生長肥育階段骨性狀的影響

通過兩個試驗 （試驗1和試驗2）在日糧中添加鈣和磷以研究日糧中磷水平以及植酸酶的添加對11～30 kg體重斷奶仔豬生長性能、全消化道營養(yǎng)物質表觀消化率及鈣、磷和氮的利用率的影響和生長育肥階段 （體重：30～100 kg）骨性狀的影響。

試驗1采用3×2因子試驗設計 （總磷的含量為4.5 g/kg、5.5 g/kg和 6.4 g/kg，植酸酶的活性為 0 IU/kg和 500 IU/kg），選擇96頭斷奶仔豬 （n=8）用于研究磷和植酸酶對仔豬生長性能、骨性狀以及糞便性狀的影響。由于試驗日糧中磷的濃度逐漸變化，為保證日糧中的鈣磷比為1.6:1，在不同磷水平的日糧中同時調整鈣的水平。30 kg體重時采集48頭豬的骨樣品 （每個處理8頭）。另外 48頭豬的飼料變更為生長育肥豬日糧 ，同時保證日糧的鈣磷水平，直至體重達到100 kg再采樣。

試驗2選擇24頭公豬 （n=4）試驗日糧的設計同試驗1，測定鈣、磷和氮的利用率。仔豬斷奶后轉入代謝籠內進行單獨飼養(yǎng)，分別收集糞和尿。

試驗結果表明，日糧中添加植酸酶的仔豬較未添加植酸酶的仔豬具有較高的飼料轉化率 （P＜0.05）。30kg體重時，日糧中高磷含量組仔豬骨中灰分含量較低、中磷含量組仔豬的骨中灰分含量高 （P＜0.05）。體重100kg時，日糧中添加植酸酶的豬 （P＜0.001）以及日糧中含有中、高水平磷的實驗組豬（P＜0.05）骨中灰分含量高于日糧中沒有添加植酸酶的豬以及日糧中只含有低水平磷的豬。試驗2中，添加植酸酶的豬較未添加植酸酶的豬具有較高的磷消化率以及磷沉積量 （P＜0.001）。

總之，斷奶后日糧中總磷的水平高于5.5 g/kg對商品豬的生產性能沒有特別的益處。但是斷奶后日糧中總磷為6.4 g/kg會使豬100 kg體重時骨中礦物質含量積聚達到最高。

譯自：Varley PF,Callan JJ,O’Doherty JV.Effect of dietary phosphorus and calcium level and phytase addition on performance,bone parameters,apparent nutrient digestibility,mineral and nitrogen utilization of weaner pigs and the subsequent effect on finisher pig bone parameters.Animal Feed Science and Technology， 2011 （165）:201-209.