內(nèi)生真菌提高植物抵御鹽脅迫的研究進(jìn)展

李娥 胡華冉 李蛟男 杜光輝 劉飛虎，

（1. 云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，昆明 650091；2. 云南大學(xué)農(nóng)學(xué)院，昆明 650091）

鹽漬化（Salinization）是自然界中廣泛存在的一種非生物脅迫［1］。目前，全球有8.31×108hm2土地受到鹽漬化威脅，占全球耕地面積10%［2］，中國則有約1×108hm2鹽漬土［3］，約1/5的耕地發(fā)生鹽堿化［4］。鹽漬化嚴(yán)重程度已經(jīng)影響到農(nóng)業(yè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展及環(huán)境的狀況。目前，改善土壤鹽漬化主要通過調(diào)整水利、平整土地、施用大量化肥、種稻洗田、種植鹽生植物等措施進(jìn)行［5］，但這些方法都有一定局限性，不能從根本上改善土壤質(zhì)量狀況及提高植物生物量。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)某些植物內(nèi)生真菌與植物共生，為植物直接提供營養(yǎng)或幫助植物獲得營養(yǎng)，通過產(chǎn)生活性物質(zhì)或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)宿主抗蟲、抗病、抗脅迫（包括鹽、旱、低溫）能力［6-7］，還可以顯著改變土壤微生物群落，改善土壤質(zhì)量［8］。本研究從提高植物耐鹽性內(nèi)生真菌的發(fā)掘、內(nèi)生真菌增強(qiáng)植物耐鹽性機(jī)制等方面的研究進(jìn)展、發(fā)展前景和存在問題進(jìn)行綜述與討論，期望為發(fā)掘和利用內(nèi)生真菌增強(qiáng)植物耐鹽性的相關(guān)研究提供參考和啟示。

1 植物內(nèi)生真菌

1988年，Carroll［9］把植物內(nèi)生真菌定義為生活在植物組織內(nèi)生活史中的某一時(shí)期，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育和生活史特征，將植物內(nèi)生真菌分為clavicpitagen（C）和nonclavicpitagen（NC）2個(gè)內(nèi)生類群［10］。同時(shí)，植物內(nèi)生真菌多屬于雙核菌門、子囊亞門的有核菌綱（Pyrenomyetes）、盤菌綱（Discomycetes）和腔菌綱（Loculoascomyetes）以及無形態(tài)的多種真菌，主要分布于植物各組織的細(xì)胞間，一般在葉鞘和種子中分布最多，而在葉片和根中含量極微［9］。1993年，美國科學(xué)家Stierle等［11］在短葉紅豆杉的樹皮上獲得能合成抗癌活性紫杉醇的一種內(nèi)生真菌，掀起植物內(nèi)生真菌研究的熱潮。目前，在地球上已知的25萬種植物中，內(nèi)生真菌數(shù)量在100萬種以上［12］。

植物內(nèi)生真菌與植物的抗旱、抗鹽、抗蟲、抗重金屬等方面有關(guān)，其次生代謝產(chǎn)物（生物堿等）具有抗菌、殺蟲、抗細(xì)胞毒性和抗癌等作用。植物內(nèi)生真菌作為新型資源，在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥和食品工業(yè)中有廣泛應(yīng)用前景［13］。Maciá-Vicente 等［14］認(rèn)為環(huán)境脅迫使植物與內(nèi)生真菌的關(guān)系更加緊密，以適應(yīng)不利條件。所以，隨著土壤鹽漬化問題的日益突出，越來越多的學(xué)者關(guān)注與植物互作提高其耐鹽性的內(nèi)生真菌的研究。

2 與植物互作抵御鹽脅迫內(nèi)生真菌的發(fā)現(xiàn)

目前，報(bào)道最多的與植物互作抵御鹽脅迫的內(nèi)生真菌有叢枝菌根真菌（Arbuscular mycorrhizal fungi，AMF）、印度梨形孢（Piriformospora indica）、有隔內(nèi)生真菌（Dark septate endophytes，DSE）和木霉菌（Trichodermaspp.）等。研究發(fā)現(xiàn)，植物根系和葉片的內(nèi)生真菌對抵御鹽脅迫起的作用較大。其中，葉片內(nèi)生真菌以局部侵染（Locally limited colonization）方式侵染植物，根系內(nèi)生真菌以系統(tǒng)浸染（Extensive or systemic colonization）方式侵染植物，且侵染程度更強(qiáng)。根系內(nèi)生真菌又有菌根真菌和非菌根真菌之分，而菌根真菌尤以印度梨形孢和叢枝菌為代表，而非菌根真菌則以暗色有隔內(nèi)生真菌和紅色不育真菌（Sterile red fungus，SRP）為典型代表［15］。

2.1 叢枝菌根真菌

德國植物生理學(xué)家Frank［16］于1885年發(fā)現(xiàn)某些真菌能與植物根系共生，首次提出了“菌根”（Mycorrhiza）這個(gè)術(shù)語。Bach［17］早在1983年就發(fā)現(xiàn)叢枝菌根真菌能在鹽脅迫下侵染植物。目前，關(guān)于叢枝菌根真菌的分類有4個(gè)目，13個(gè)科，19個(gè)屬，共 214 種［18］。

叢枝菌根真菌能與自然界90%的植物形成共生關(guān)系，提高其抗鹽能力，并且通過不同方式和途徑影響植物的生長［19-21］。在NaCl脅迫下，叢枝菌根真菌能促進(jìn)鹽生植物鹽草［22］、銀膠菊［23］等的生長，也能促進(jìn)非鹽生植物洋蔥［24-25］、柑桔［26-28］、番茄［25，27］、黃瓜［29］等的生長。但叢枝菌根真菌對菌根植物的促進(jìn)作用和侵染強(qiáng)度明顯比非菌根植物（如莧科、藜科、肉桂科和十字花科）強(qiáng)［30］。

2.2 印度梨形孢

1998年，Verma等［31］在印度塔爾沙漠中發(fā)現(xiàn)了一種植物根定殖擔(dān)子菌——印度梨形孢（Piriformosporaindica）， 隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota）、層菌綱（Hymenomycetes）、蠟殼耳科（Sebacinaceae）、梨形孢屬（Piriformospora）。印度梨形孢能與多種植物共生，表現(xiàn)出較強(qiáng)的促生長能力。Waller等［32］于2005年發(fā)現(xiàn)梨形孢具有誘導(dǎo)大麥抗鹽脅迫的潛力。迄今為止，研究發(fā)現(xiàn)接種印度梨形孢能提高煙草［33］、苜蓿［34］、墨西哥虎尾草［35］等多種植物的耐鹽性。

2.3 有隔內(nèi)生真菌

1905年，Gallaud［36］首先在2種植物（Allium sphaerocephalumL.和Ruscus aculeatusL.）根部發(fā)現(xiàn)有褐色或黑色的外生菌根。1922年，Melin［37］在松樹根部也發(fā)現(xiàn)該真菌，并將其命名為Mycelium radices atrovirens（MRA）。直到1998年，Jumpponen和 Trappe［38］才提出有隔內(nèi)生真菌（Dark septate endophytes，DSE）這一定義。目前，已在100科、320屬、近600種植物中發(fā)現(xiàn)有隔內(nèi)生真菌，但是關(guān)于有隔內(nèi)生真菌的分類地位問題還很模糊［39-41］。

有隔內(nèi)生真菌一直都被用來修復(fù)有害金屬污染的環(huán)境［42］。但近年來的研究發(fā)現(xiàn)有隔內(nèi)生真菌能與植物互作提高植物耐鹽性［14］。而且在有隔內(nèi)生真菌與宿主植物形成共生關(guān)系過程中，能促進(jìn)植物生長、改善礦物質(zhì)吸收、提高植物抗逆性［43］。Pan等［44］研究發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫下深色有隔內(nèi)生真菌可侵染白楊，提高白楊苗木耐鹽性。

2.4 其他與植物互作提高宿主耐鹽性的內(nèi)生真菌的發(fā)現(xiàn)

除上面3大類與植物耐鹽性相關(guān)的內(nèi)生真菌之外，人們陸續(xù)從各種植物中發(fā)現(xiàn)與植物互作提高宿主耐鹽性的其他內(nèi)生真菌。

2005年，Redman等［45］在水稻植株內(nèi)分離的Fusarium culmorum和Curvularia protuberata能提高水稻耐鹽性。緱小媛［46］于2007年研究證明了醉馬草內(nèi)生真菌（真菌類型未注明）可以促進(jìn)NaCl脅迫下醉馬草種子的萌發(fā)，以及調(diào)節(jié)植株的生長和生理，提高了醉馬草的耐鹽性。2009年，王正鳳［47］發(fā)現(xiàn)野大麥內(nèi)生真菌（真菌類型未注明）可以提高野大麥在鹽脅迫條件下的發(fā)芽率、分藥數(shù)和生物量等。2010年，Mastouri等［48］研究表明哈茨木霉T22菌株可以誘導(dǎo)植物對氧化損傷的生理保護(hù)來提高幼苗活力和改善脅迫影響。2011年，Khan等［49］從大豆根中分離出小型青霉LHL09，該菌可以通過影響植物激素和黃酮類化合物的生物合成，從而改善鹽脅迫的不利影響，促進(jìn)了大豆植株的生長。2012年，Maciá-Vicente等［14］在小麥植株中分離得到固氮螺菌，發(fā)現(xiàn)鹽脅迫下其與小麥之間存在共生關(guān)系，能促進(jìn)小麥的生長，并影響小麥幼苗的水分吸收、光合色素含量和脯氨酸積累。鈕旭光等［50］和范黎［51］從翅堿蓬中篩選出能促進(jìn)鹽脅迫下植物種子萌發(fā)和幼苗生長的內(nèi)生真菌。2014年，陳亞平［52］從駱駝刺中分離出Phaeosphaeriopsis屬真菌，從苦豆子和減蓬中分離出Phoma屬真菌，以及在蘆葦中分離到枝狀枝孢菌（Cladosporium cladosporioides），并在200 mmol/L NaCl條件下與水稻共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)能增加水稻耐鹽性。2017年，候姣姣等［53］在鹽脅迫條件下分別用哈茨木霉（Trichodermaspp.）、絲核菌（Rhizoctoniaspp.）、黑附球菌（Epicoccumspp.）、曲霉菌（Aspergillusspp.）菌液灌根處理國槐幼苗，發(fā)現(xiàn)其抗鹽能力提高。2018年，吳曰福等［54］在堿蓬根部分離得到耐鹽內(nèi)生真菌40株，有未被報(bào)道過的耐鹽真菌Aspergillus aculeatus和Fusarium oxysporum，還有3株Aspergillus sydowii嗜鹽真菌。

3 內(nèi)生真菌對植物耐鹽性提高的影響

3.1 穩(wěn)定植物營養(yǎng)元素吸收和保持離子平衡

鹽脅迫嚴(yán)重影響植物的生理過程，產(chǎn)生離子脅迫和滲透脅迫而使細(xì)胞抑制生長或死亡，最終導(dǎo)致植物生長受抑制或者死亡［55-56］。鹽脅迫條件下的離子脅迫主要是Na+和Cl-濃度升高，以及平衡植物體內(nèi)的P和S的減少。Na+和K+在鹽漬土壤中是競爭關(guān)系，內(nèi)生真菌與植物共生可以改變植物體內(nèi)Na+和K+比值，改善由于鹽脅迫造成的植物離子不平衡現(xiàn)象。Pereira等［57］對鹽脅迫條件下的向日葵幼苗接種叢枝菌根真菌和細(xì)菌的混合物，發(fā)現(xiàn)植株各項(xiàng)指標(biāo)均提高，組織中K+、Mg2+、Ca2+、N和P的含量積累，Na+的含量降低。將叢枝真菌與內(nèi)生細(xì)菌混合接種于金合歡，也是相同結(jié)果［58］。Abdelaziz等［59］研究發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫條件下將梨形孢回接擬南芥后，Na+/K+比值降低，鉀轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（HKT1）和鉀離子內(nèi)流相關(guān)基因kt1、kt2的轉(zhuǎn)錄水平升高，推測內(nèi)生真菌提高植物耐鹽性的機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)Na+和K+離子通道的相關(guān)基因的表達(dá)水平，從而使鹽脅迫條件Na+/K+的離子穩(wěn)態(tài)達(dá)到平衡。

鹽脅迫使植物養(yǎng)分吸收或運(yùn)輸減少，造成植物養(yǎng)分不平衡［60］。鹽脅迫條件下接種叢枝菌根真菌，其菌絲生長能增加植物根部吸收水分和養(yǎng)分的面積，有利植物對水分和礦質(zhì)元素的吸收，如P的吸收等［61］。除叢枝真菌外，鹽脅迫條件下回接印度梨形孢，也可以顯著提高植物對P的吸收量，從而增加植物生物量的積累［52］。另外，鹽脅迫條件下接種內(nèi)生真菌，還促進(jìn)植物對N的吸收。Qin等［62］將植物內(nèi)生真菌與植物共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，提供有機(jī)氮源時(shí)，大多數(shù)內(nèi)生真菌能將有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮，促進(jìn)植物生長，提高植物生物量。

3.2 提高植物滲透調(diào)節(jié)能力

在鹽脅迫條件下，植物體因大量失水進(jìn)而導(dǎo)致滲透脅迫發(fā)生，植物通過積累有機(jī)物、減小滲透勢、增強(qiáng)細(xì)胞滲透調(diào)節(jié)來適應(yīng)環(huán)境變化［63-64］，生成并積累一些滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，像氨基酸、蛋白質(zhì)、甜菜堿和多胺等［65］。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌可以通過調(diào)節(jié)植物脯氨酸、甜菜堿和可溶性糖等的積累來進(jìn)行滲透調(diào)節(jié)，提高植物的耐鹽性。Jindal等［66］在12.5和25 mmol/L NaCl條件下回接叢枝真菌，發(fā)現(xiàn)植物內(nèi)脯氨酸含量增高。任安芝等［67］研究發(fā)現(xiàn)在高鹽濃度下，叢枝真菌侵染可導(dǎo)致黑麥草葉片內(nèi)的脯氨酸含量顯著增加，可溶性糖含量顯著降低。但付艷平等［68］用促生菌UW4懸浮液浸泡向日葵種子在鹽脅迫下進(jìn)行種植，發(fā)現(xiàn)其脯氨酸含量降低，可溶性糖含量增加。Al-Garni［69］在鹽脅迫下回接叢枝真菌，發(fā)現(xiàn)回接植物中甜菜堿的含量增加，是未回接植物的2倍。因此，鹽脅迫條件下，植物內(nèi)生真菌對植物各滲透物質(zhì)的調(diào)節(jié)作用受鹽濃度、植物種類、環(huán)境等因素的影響，但各因素之間相互作用的機(jī)制不明，還需要進(jìn)一步探究［70］。

3.3 保持植物光合作用和水分利用效率

鹽脅迫對植物光合作用的影響既有氣孔和葉肉的擴(kuò)散限制光合代謝，也有固碳酶減少使光合作用降低［71］以及多重脅迫疊加產(chǎn)生的氧化脅迫。鹽脅迫還會(huì)加速葉綠素的降解、降低類囊體膜穩(wěn)定性、降低葉綠體對光能的吸收、影響光能在2個(gè)光系統(tǒng)之間的合理分配，最終導(dǎo)致光合速率的降低［72］。生長在鹽漬化土壤的植物面臨著生理干旱的危險(xiǎn)，因此，它們必須保持較低的內(nèi)部滲透力，以防止水從根部進(jìn)入土壤，水分對于鹽脅迫下的植物生長至關(guān)重要。鹽脅迫下植物生長的恢復(fù)與碳平衡期間光合作用恢復(fù)的速度和程度有關(guān)，也與水分耗竭期間光合作用下降的程度和速度有關(guān)［60］，而接種內(nèi)生真菌可促進(jìn)植物提高光合速率和對水分的吸收效率，進(jìn)而使植物減緩或抵御鹽脅迫。

研究發(fā)現(xiàn)，無性型Epichloe內(nèi)生真菌的侵染，可使大麥氣孔發(fā)生變化并改變根系結(jié)構(gòu)，從而增強(qiáng)水分利用效率［73］。Redman等［45］在鹽脅迫條件下接種Fusarium culmorum和Curvularia protuberata兩類真菌，減少了水稻20%-30%的耗水量，并提高了其生長速度和生物量。Azad等［74］研究表明，在NaCl脅迫條件下，接種內(nèi)生真菌的植株比不接內(nèi)生真菌植株有更高的水分利用效率和光合效率。Ghorbani等［75］在鹽脅迫條件下接種印度梨形孢于番茄，發(fā)現(xiàn)印度梨形孢通過改善番茄水分狀況和光合作用緩解鹽脅迫。

3.4 增強(qiáng)植物抗氧化防御系統(tǒng)

鹽脅迫導(dǎo)致活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生，而活性氧造成植物膜質(zhì)過氧化進(jìn)而影響植物生長［76］。但植物體內(nèi)有ROS酶類保護(hù)系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、 過 氧 化 物 酶（Peroxidase，POD）、 過 氧化氫酶（Catalase，CAT）、抗壞血酸過氧化物酶（Aseorbate peroxidase，APX）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GRX）、脫氫抗壞血酸酶（Dehydroascorbate reductase，DNAR）、 單 脫 氫抗壞血酸酶（Dehydroascorbate reductase，MDHAR）等［77］和非酶類系統(tǒng)（包括抗壞血酸（Ascorbic acid，ASA）、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）、類胡蘿卜素、生育酚、類黃酮和甘露醇等，可以減緩或者避免活性氧對植物造成的損傷［77-78］。

研究表明，植物可通過接種內(nèi)生真菌來清除ROS；通過增強(qiáng)抗氧化酶活性來加強(qiáng)菌根化，進(jìn)而減少了氧化；積累還原的抗壞血酸和谷胱甘肽改善氧化還原穩(wěn)定性，增強(qiáng)植物耐鹽性進(jìn)而增加植物生物量［79］。王英男等［80］在鹽脅迫條件下的羊草內(nèi)接種AMF真菌發(fā)現(xiàn)，抗氧化酶類的活性明顯提高，氧自由基的清除能力增強(qiáng)。另外，Mastouri等［48］在鹽脅迫條件下接種哈茨木霉T22菌株，發(fā)現(xiàn)該菌株能誘導(dǎo)植物接種AMF后宿主植物體內(nèi)對氧化損傷的生理保護(hù)來提高幼苗活力。Pan等［44］在鹽脅迫下將從堿蓬中分離的暗隔內(nèi)生真菌回接楊樹，發(fā)現(xiàn)顯著增強(qiáng)了楊樹體內(nèi)抗氧化酶活性，提高了楊樹耐鹽性。Baltruschat等［81］發(fā)現(xiàn)在NaCl脅迫條件下接種梨形孢于大麥（Hordeum vulgare），顯著提高了大麥抗壞血酸的含量，增加了根中抗氧化酶的活性。

另外，付艷平［68］用促生菌UW4懸浮液浸泡向日葵種子，在鹽脅迫下進(jìn)行種植發(fā)現(xiàn)，其可溶性蛋白增加。張愛娣等［82］在不同NaCl濃度下回接叢枝真菌到大葉女貞，發(fā)現(xiàn)其丙二醛含量相較于對照組明顯降低，王娜等［83］在不同NaCl濃度下回接叢枝真菌到紫花苜蓿也有相同發(fā)現(xiàn)。

3.5 影響植物代謝中心和真菌分泌物質(zhì)

鹽脅迫會(huì)使植物體內(nèi)的激素水平發(fā)生變化，如乙烯的積累，生長素、細(xì)胞分裂素合成的減少［52，56］。植物內(nèi)生真菌能夠刺激植物產(chǎn)生激素，如IAA、吲哚乙腈、細(xì)胞激動(dòng)素等。硝酸擔(dān)子菌（Piriformospora indica）就能刺激植物分泌生長素（如吲哚乙酸），從而促進(jìn)植物生長［84］。很多學(xué)者認(rèn)為內(nèi)生真菌增強(qiáng)植物對環(huán)境脅迫的適應(yīng)性是通過影響植物代謝實(shí)現(xiàn)的。Ghaffari等［85］分析發(fā)現(xiàn)植物根部被印度梨形孢侵染后，植物耐鹽性得到了提高，并提出可能與糖代謝、氮代謝和乙烯合成途徑有關(guān)。有學(xué)者提出內(nèi)生真菌鐮刀菌可以通過抑制植物體內(nèi)的乙烯信號(hào)途徑從而提高植物生長活力［15，86］。另外，禾草內(nèi)生真菌能通過自身產(chǎn)生的次生代謝物保護(hù)植物，使其免受外界環(huán)境脅迫的危害［87-88］。有些內(nèi)生真菌也能通過活化硝酸還原酶、分泌鐵載體和磷酸酶等形式促進(jìn)植物養(yǎng)分吸收，促進(jìn)植物生長［15，89-93］，還能通過分泌粘液物質(zhì)（多糖類），并在根表面形成菌膜來協(xié)助植物抗鹽［15］。

3.6 誘導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)

植物體已進(jìn)化成能通過多種生理生化方式來響應(yīng)鹽脅迫，而這些方式的形成離不開相關(guān)基因的調(diào)節(jié)。一方面相關(guān)基因參與植物-微生物共生體系建立，苜蓿中MtDMI3基因［15，94］和禾草植物內(nèi)生真菌的Nox基因［15，95］參與植物-微生物共生體系的建立；日本百脈根（Lotus japonicus）質(zhì)體蛋白基因（CASTOR和POLLUX）和編碼核孔蛋白的基因NUP85［15，96-97］以及擬南芥 At5g16590 蛋白能協(xié)助真菌侵染植物根部［15，98］；另一方面，植物內(nèi)生真菌可以通過與植物共生來誘導(dǎo)植物相關(guān)耐鹽基因表達(dá)來抵御鹽脅迫?；莘黔偟龋?9］在鹽脅迫下回接印度梨形孢于煙草發(fā)現(xiàn)，印度梨形孢能誘導(dǎo)煙草中耐鹽相關(guān)基因DP8P1、PR-1a、PR2、PR3和PR5的大量表達(dá)，增強(qiáng)煙草耐鹽防御機(jī)制，提高其耐鹽性。李亮等［100］在鹽脅迫下用印度梨形孢侵染紫花苜蓿根部發(fā)現(xiàn)，印度梨形孢可誘導(dǎo)脯氨酸合成酶基因P5CS表達(dá)進(jìn)而增強(qiáng)紫花苜蓿的耐鹽性。鹽脅迫條件下，Ghaffari等［85］回接印度梨形孢于小麥，在小麥根部發(fā)現(xiàn)254個(gè)差異表達(dá)基因。

研究報(bào)道，菌根植物耐鹽性與水孔蛋白的分子機(jī)理有關(guān)，植物內(nèi)生真菌侵染植物后誘導(dǎo)了水孔蛋白基因的表達(dá)。Ouziad等［101］研究發(fā)現(xiàn)，NaCl脅迫下叢枝菌根真菌定殖的番茄中的Na+/H+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和水通道蛋白基因表達(dá)。通過Northern分析和原位雜交發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫下用AMF定殖番茄根后兩種Na+/H+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（水孔蛋白基因LeTIP1和其他LePIP）表達(dá)上調(diào)，液泡膜和質(zhì)膜水通道蛋白基因的轉(zhuǎn)錄水平升高。Aroca等［102］在鹽脅迫下回接叢枝真菌于菜豆和番茄，也發(fā)現(xiàn)了質(zhì)膜水通道基因表達(dá)量增加，LeTIP2表達(dá)量下降，質(zhì)膜水通道蛋白（PIP1）的增加。綜上所述，鹽脅迫下內(nèi)生真菌對不同植物的基因有不同的誘導(dǎo)功能和調(diào)控作用，而且不同植物內(nèi)生真菌提高植物耐鹽性的能力存在差異性，因此，挖掘促進(jìn)植物耐鹽性的內(nèi)生真菌具有重要意義。

4 總結(jié)與展望

內(nèi)生真菌可以從穩(wěn)定植物營養(yǎng)元素吸收和保持離子平衡、提高植物滲透調(diào)節(jié)能力、保持植物光合作用和水分利用效率、增強(qiáng)植物抗氧化防御系統(tǒng)、產(chǎn)生次生代謝物或調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面來保護(hù)宿主植物，減輕鹽害。內(nèi)生真菌極有可能成為減輕植物鹽堿脅迫一個(gè)有力工具，因此，專家預(yù)測內(nèi)生真菌生物技術(shù)與傳統(tǒng)的抗逆育種和轉(zhuǎn)基因抗逆育種在未來將并駕齊驅(qū)［15］。目前，內(nèi)生真菌被廣泛運(yùn)用在增強(qiáng)菌根植物（尤其是禾本科植物）耐鹽性方面［103］，內(nèi)生真菌提高非菌根植物耐鹽性的報(bào)道也越來越多。雖然如此，運(yùn)用內(nèi)生真菌增強(qiáng)植物耐鹽性的研究還有許多方面需要深入探討。

在植物內(nèi)生真菌分離方面：植物內(nèi)生真菌種類眾多，但可分離培養(yǎng)的只占總內(nèi)生真菌的極小部分，植物體內(nèi)還有許多不能分離但能顯著提高宿主植物耐鹽性的內(nèi)生真菌有待挖掘。需要篩選適宜的培養(yǎng)基，不斷更新優(yōu)化培養(yǎng)基成分和配比。還需要比較不同分離方式對植物內(nèi)生真菌多樣性的影響，并篩選出最適合分離內(nèi)生真菌的方法。另外，無論采用組織貼片或者研磨法進(jìn)行植物內(nèi)生真菌分離時(shí)，將分離基數(shù)加大（每個(gè)處理的貼片至少50片），以減少內(nèi)生真菌分離的偶然性。除此之外，內(nèi)生真菌分布具有一定組織特異性，需要研究者分離內(nèi)生真菌時(shí)細(xì)化植物分離部位以獲得更多目標(biāo)內(nèi)生真菌。最后，目前報(bào)道大多都關(guān)注植物體內(nèi)生真菌優(yōu)勢種群研究，但一些起重要作用的非優(yōu)勢菌種或者與優(yōu)勢菌株共同起促生作用的非優(yōu)勢菌種也有待研究。

在鹽脅迫下植物內(nèi)生真菌對宿主植物耐鹽性促進(jìn)機(jī)制方面還有待進(jìn)一步深化。首先，內(nèi)生真菌協(xié)助植物抵御極端環(huán)境的假說有三種：即適應(yīng)性生態(tài)位共生、共生態(tài)調(diào)節(jié)、共生體生活方式轉(zhuǎn)化，但這些假說都是通過觀察植物生長情況或者接種實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證，深層次的機(jī)理研究很少［15］。其次，植物內(nèi)生真菌協(xié)助宿主抵御脅迫的能力受到宿主種類、宿主基因型和環(huán)境等因素的影響，較為復(fù)雜［104-106］。再次，關(guān)于植物內(nèi)生真菌與宿主共生提高植物耐鹽性的研究多局限于菌根植物。因?yàn)榫婢秩舅拗骱?，能使植物產(chǎn)生抗逆性，而非菌根植物內(nèi)生真菌侵染后不穩(wěn)定，而且侵染率極低。最后，內(nèi)生真菌的發(fā)現(xiàn)及其次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生，內(nèi)生真菌與宿主互作的耐鹽信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)與基因交互表達(dá)等都不清晰，應(yīng)該采用現(xiàn)代組學(xué)技術(shù)深入研究植物-內(nèi)生菌共生體響應(yīng)鹽脅迫的特異信號(hào)傳導(dǎo)和代謝途徑［107］。總之，內(nèi)生真菌在促進(jìn)植物抗鹽作用方面有著廣闊的前景，單靠目前研究還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。只有了解了內(nèi)生真菌和宿主植物共生機(jī)制，才能將植物內(nèi)生真菌減緩植物鹽害作用運(yùn)用到環(huán)境治理和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。