苔干抑菌活性探討

□ 盧 臣 孫會剛 卞路遙 陳學(xué)紅 李同祥 徐州工程學(xué)院（中心校區(qū)）

苔干，又名響菜、貢菜，為植物系菊科萵苣屬莖用萵苣，是我國江蘇邳州市和安徽渦陽縣義門的名優(yōu)特產(chǎn)蔬菜，迄今已有兩千多年的種植歷史[1]。苔干中含有豐富的氨基酸、果膠、多糖、黃酮類、酚類物質(zhì)以及各種無機鹽，具有健胃、利水、清熱解毒等功能，在室溫內(nèi)長時間放置而不易腐爛，有“天然保健品、植物營養(yǎng)素”之稱[2]。

張雪香等人分析測定了苔干中含有大量糖類、酚類、生物堿及黃酮類物質(zhì)[3]；甄清等對貢菜抗菌作用進行了實驗研究，得出貢菜85 ℃的醇提取液具有抑菌性質(zhì)，結(jié)果分析苔干的醇提取液中含黃酮類物質(zhì)[4]。同時，甄清等利用丙酮對苔干進行浸提、萃取等工藝，結(jié)果表明苔干提取液中存在抗真菌有效成分，并初步定性分析為酚類化合物質(zhì)[5]。楊京霞等以正交實驗法優(yōu)化了苔干中黃酮含量，結(jié)果得出70%乙醇濃度，70 ℃，45min，料液比1∶30，得到2.8%的黃酮含量[6]。

根據(jù)以上研究，可以得出苔干具有良好的抑菌作用，但是目前對于苔干的研究及相關(guān)抑菌實驗進行較少，研究還不夠深入和廣泛，其抑菌活性物質(zhì)的提取沒有較好的工藝方案。

1 材料

1.1 實驗材料

苔干，購于邳州占城；乙醇、丙酮、乙酸乙酯均為分析純。

1.2 試驗菌株

金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、單增李斯特菌、枯草芽孢桿菌均為徐州工程學(xué)院食品（生物）實驗室分離所得，菌液濃度控制為105～106CFU／mL。

1.3 儀器與設(shè)備

高速粉碎機（CS-700）、超聲清洗器（Julabo TW1）、HZ-III型循環(huán)水真空泵、RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平FA2140N、恒溫恒濕箱、SW-CJ-1FD型單人單面凈化工作臺、BCD-539WT電冰箱、立式高壓蒸汽滅菌鍋、烘箱。

2 實驗方法

2.1 原材料處理

苔干復(fù)水洗凈后，放入恒溫干燥箱內(nèi)，于60 ℃烘干至恒重，用高速粉碎機粉碎，過60目篩，用無菌袋收集，放于4 ℃冰箱中備用。

2.2 菌種活化及菌懸液制備

將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、單增李斯特菌、枯草芽孢桿菌接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基進行活化 ，細菌于37℃培養(yǎng)24h，真菌于28℃培養(yǎng)48h。

菌種活化好后，用無菌生理鹽水洗脫，搖勻。用無菌吸管取 1mL菌液于試管中，加入 9mL無菌水，制成菌懸液，再取 1mL充分混合的菌懸液于試管中，加入 9mL無菌水，用顯微鏡直接記數(shù)法測菌體個數(shù)，用無菌生理鹽水調(diào)整濃度為含菌體為 105～106CFU/mL的菌懸液，放于4 ℃冰箱中備用[7]。

2.3 苔干提取液的制備

本實驗采用超聲波輔助提取法[8]，用不同極性的溶劑來提取苔干中的抑菌活性物質(zhì)。

準確稱量4份20g苔干粉，分別置于4個錐形瓶中，再分別量取200mL的80%乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水加入錐形瓶。充分混勻后，將4個錐形瓶放入超聲清洗器中，于45 ℃下密封浸提1h。

浸提完成后，將提取液進行抽濾，并將濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在45 ℃下濃縮成10mL。

3 體外抑菌試驗

本文的抑菌實驗采用牛津杯法，以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、單增李斯特菌為指示菌，在超凈工作臺上將已融化的LB固體培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基冷卻凝固后，用移液槍吸取100 μL指示菌懸液放于培養(yǎng)基中，用涂布棒涂布均勻。

用燒過的鑷子夾取已滅菌的牛津杯放在培養(yǎng)皿中，使牛津杯在培養(yǎng)皿中自然下垂。在其浸沉5min之后，向牛津杯中輕輕注入200 μL提取液，并注明標記，水平移至37 ℃培養(yǎng)箱中，恒溫培養(yǎng)12h，再用電子游標卡尺測量抑菌圈直徑[9]。

將濃縮提取液分別以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、單增李斯特菌為指示菌進行抑菌實驗，每個實驗重復(fù)三次，并設(shè)置空白對照組。

4 結(jié)果

各溶劑的苔干濃縮提取液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、單增李斯特菌有不同程度的抑菌效果。其中對大腸桿菌的具體抑菌情況如圖1所示。

具體抑菌圈見表1。

從上述表格中可以得出，用不同提取劑通過超聲波輔助提取得到的苔干提取液有不同的抑菌效果，其中苔干的丙酮提取液的抑菌性最強，活性大小為：大腸桿菌＞金黃色葡萄球菌＞枯草芽孢桿菌＞單增李斯特菌，乙醇提取液的抑菌性次之，水與乙酸乙酯的提取液抑菌活性相對較小，各提取液對大腸桿菌的整體抑菌性都很強。

圖1 苔干提取液對大腸桿菌的抑菌情況

表1 苔干提取液對指示菌的最大抑菌圈直徑（mm）

5 討論

本文采用的超聲波低溫提取，用時較短，相對其他的提取方法節(jié)約原料，更能保留更多的活性物質(zhì)，可以有效提高苔干中抑菌物質(zhì)的提取率。

苔干的抑菌性較好，本文用不同極性的提取劑得到的苔干濃縮提取液有不同的抑菌效果，其中丙酮提取液最佳，乙醇提取液次之。但是目前對于苔干植物的抑菌性研究較少，因此可對苔干進行深入的探討，加強分離純化其有效抑菌物質(zhì)的活性的研究。

[1]商學(xué)兵.營養(yǎng)貢菜說苔干[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2009(9):46-47.

[2]郭 文 場,楊 松 濤,呂 忠寧.古來“貢菜”話苔干[J].植物雜志,2001(1):27-28.

[3]張雪香,張桂英,陳月.苔干有效成分的提取與分析[J].吉林中醫(yī)藥,1998(4):54.

[4]甄 清 ,黎 明 蘭 ,李 勇 .貢 菜抗菌作用的實驗研究[J].食品科學(xué),1999(5):42-44.

[5]甄清,李勇,陳月,等.貢菜提取液的抗病原性真菌活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2005(4):448-449.

[6]楊京霞,韓帥,李文雍,等.正交試驗法優(yōu)化苔干中黃酮含量[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2010(S1):40-42.

[7]陳學(xué)紅,會剛,唐仕榮,等.綠蘆筍皮黃酮的抑菌性能研究[J].農(nóng)業(yè)機械,2011(14):170-172.

[8]李 萍 ,舒 展 ,胡 矗 垚 ,等 .姜辣素的超聲波法提取及其抑菌活性研究[J].中國調(diào)味品,2017(10):160-164,175.

[9]馬利華,秦衛(wèi)東,陳學(xué)紅,等.牛蒡提取物抑菌活性的研究[J].食品科學(xué),2009 (21):24-27.