增殖細胞核抗原在涎腺腺樣囊性癌中的表達及其臨床意義*

李曉光,盧會青,劉 敏,王延秀,李騰宇

(山東省泰安市中心醫(yī)院:1.口腔科;2.手術室;3.麻醉科 271000;4.青島大學醫(yī)學院口腔系,山東 青島 266003)

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是我國常見惡性腫瘤之一,約占涎腺惡性腫瘤的27%[1]。該腫瘤浸潤性極強,具有嗜神經(jīng)侵襲和易血行性轉(zhuǎn)移的特性。手術切除仍是其治療的最有效方法,但術后局部復發(fā)及轉(zhuǎn)移是預后不良的主要原因。腫瘤術后的復發(fā)轉(zhuǎn)移是一個多步驟的連續(xù)性的過程,腫瘤細胞的惡性增殖是其中的一個重要方面。本文采用免疫組化技術(SABC)對涎腺腺樣囊性癌的增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表達及其臨床意義進行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 32例涎腺腺樣囊性癌組織均取自本院1984～2010年手術切除標本蠟塊,患者年齡 38～71(平均52.7)歲,男11例,女21例。頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否以術后病理檢查結(jié)果為準。所有患者術前均未接受化療或放療,根據(jù)TNM國際統(tǒng)一分期法(UICC)進行臨床分期,Ⅰ+Ⅱ 期23例,Ⅲ+Ⅳ期9例。組織學分型為管狀型6例,篩孔型15例,實體型11例。其中大涎腺17例(腮腺7例,頜下腺 5例,舌下腺5例),小涎腺15例。蠟塊制備5μ m厚連續(xù)切片,抗PCNA單克隆抗體進行免疫組織化學染色,并做常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色。

1.2 免疫組織化學染色 第一抗體PCNA為武漢博士德公司提供,3,3′-二氨基苯聯(lián)胺(DAB)為Sigma公司產(chǎn)品,染色方法參照試劑盒說明按SABC法進行。分別用1.5%正常兔血清和0.01 mol/L PBS液取代第一抗體作為替代對照和空白對照。用已證實PCNA染色陽性的乳腺癌切片作陽性對照。

1.3 PCNA標記指數(shù)(proliferating cell nuclear antigen label index,PLI) 絕大多數(shù)陽性細胞以胞核棕褐色染色,顆粒狀或彌散,見圖1,部分也可胞漿著色。觀察500個腫瘤細胞,PCNA陽性細胞數(shù)所占的百分數(shù)即為PLI。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS10.0軟件進行數(shù)據(jù)處理,PCNA表達與臨床病理的關系用χ2檢驗。P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 PCNA染色定位于細胞核,細胞核被染成棕黃色或褐色,核顯色較深時,細胞質(zhì)著色較淺,染色方式呈顆粒型或彌漫型,以前者多見。在涎腺腺樣囊性癌不同分化程度或癌的不同區(qū)域,PCNA陽性細胞數(shù)量和分布呈異質(zhì)性。

表1 PCNA表達與臨床病理因素的關系

圖1 PCNA陽性細胞核內(nèi)含有棕褐色顆粒(免疫組化DAB染色×400)

2.2 PCNA指數(shù)在32例涎腺腺樣囊性癌中為17%～92%,平均為(75.17±21.28)%,以PLI平均值分為低18例(17%～54.5%)、高 14例(54.6%～92%)兩組進行分析。

2.3 PCNA表達與涎腺腺樣囊性癌臨床病理因素的關系 見表1。

3 討 論

PCNA是近年來引起人們注意的一種與細胞增殖周期有關的基因,是1974年Miyachi在紅斑狼瘡患者組織中發(fā)現(xiàn)的,是一種相對分子質(zhì)量為36×103的酸性核蛋白,是DNA聚合酶的輔助蛋白[2],定位于20號染色體上。含有6個外顯子與5個內(nèi)含子,長約7.0×103,在內(nèi)含子之間及內(nèi)含子與外顯子之間存在大量重復序列,在 5′端和 3′端存在廣泛的側(cè)翼序列,這些側(cè)翼序列參與細胞內(nèi)的某些調(diào)控并受控于其他基因和細胞因子。PCNA與細胞增殖狀態(tài)明顯相關,是伴隨細胞增殖而表達的一種核內(nèi)蛋白。PCNA在增殖細胞中的含量變化有明顯的周期性,在靜止細胞中量很少,G1晚期開始增加,S期達高峰,G2、M期明顯下降。這種變化與細胞內(nèi)DNA復制的時相變化一致,說明其表達程度與細胞增殖周期關系密切,因此作為評價細胞增殖活性的指標之一[3]。

腫瘤生長不僅是病變體積的增長,更重要的是細胞增殖活性發(fā)生變化,增殖活性是了解腫瘤生物學行為的一個有用的輔助手段。腫瘤細胞增殖活性的增加可能導致多克隆亞群的產(chǎn)生并有助于其中的某些亞群獲得浸潤、轉(zhuǎn)移的能力。在包括結(jié)腸癌、肺癌、甲狀腺癌、胃癌的許多惡性腫瘤中,增殖活性與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能、復發(fā)均有顯著相關性[4-6]。

目前對涎腺腺樣囊性癌生物學行為的判斷仍主要靠組織學分型和臨床分期,但受主客觀因素的影響,由于涎腺腺樣囊性癌術后局部復發(fā)及轉(zhuǎn)移是預后不良的主要原因,所以尋找可靠、準確的判定預后的指標已成為涎腺腺樣囊性癌生物學行為研究的重點之一。本研究結(jié)果表明,PCNA指數(shù)與涎腺腺樣囊性癌的病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤部位及臨床分期密切相關,說明增殖活性較高的腫瘤更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,這與子宮內(nèi)膜癌、胃癌、口腔癌報道結(jié)果一致[7-9]。在組織分化程度高的腫瘤中PCNA陽性細胞數(shù)少,染色較淡,呈棕色,而腫瘤組織分化程度低者,PCNA表達量高,染色加深呈棕褐色,有時呈顆粒狀,反映出腫瘤細胞增殖活性和分化的一般規(guī)律,提示PCNA高表達者細胞增生活躍,生長繁殖能力更強,其分化差,惡性程度高。

以上表明PCNA在常規(guī)病理切片上能敏感檢測腫瘤細胞增殖活性或狀態(tài),是判斷涎腺腺樣囊性癌患者預后的良好指標。這在其他類腫瘤檢測中也有類似發(fā)現(xiàn)報道。PCNA免疫反應能原位檢測腫瘤細胞增殖活性,其方法簡便、重復性強,除可進行細胞動力學研究外,對指導臨床腫瘤化療和放療,判斷預后都具有重要價值。檢測涎腺腺樣囊性癌PCNA的表達可用于判斷其惡性程度及預后,PCNA高表達者需嚴密隨訪,并加強術后輔助治療。

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